冠心病患者血浆ANK1及KRT8的表达及临床意义

冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease），是由于冠状动脉血管发生粥样硬化而致血管腔狭窄或者阻塞，继而引起心肌缺血缺氧，甚至坏死的心脏病［1］，具有发病率、致残率及致死率高的特点［2］。寻找有效的生物标志物来预测和诊断冠心病具有重要意义。细胞锚蛋白（ankyrin，ANK）1是一种参与细胞活化、增殖的重要联接蛋白，细胞角蛋白（keratin，KRT）8是与细胞有丝分裂、凋亡坏死等过程密切相关的细胞支架蛋白［3，4］。内皮细胞的凋亡在冠脉动脉粥样硬化过程中有重要作用。ANK1和KRT8是否也参与了冠心病的发生发展过程？目前鲜有相关的文献报道。本研究旨在探讨ANK1和KRT8在冠心病患者血浆中的表达，为临床早期预测和诊断冠心病找到有效的蛋白标志物。

1 临床资料

1.1 一般资料 收集2014年6月至2015年12月我院收治的139例冠心病患者为病例组，纳入标准：①经冠状动脉造影术、心电图以及心脏超声检查证实为冠心病的患者；②既往未接受过冠脉旁路移植术以及冠脉介入治疗。排除标准：①妊娠期及哺乳期的妇女；②合并有主动脉夹层、心肌炎以及心脏瓣膜病；③肝、肾功能不全者；④合并有感染性疾病、免疫缺陷性病的患者；⑤恶性肿瘤、脑血管疾病者。另选取本院80例健康体检者为对照组。两组基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

 

表1 病例组和对照组基线资料比较

  

基线资料性别（男，例）年龄（岁）空腹血糖（mmol/L）总胆固醇（mmol/L）高密度脂蛋白胆固醇（mmol/L）低密度脂蛋白胆固醇（mmol/L）三酰甘油（mmol/L）糖尿病（例）高血压（例）病例组（n=139）76（54.67%）59.2±10.8 5.46±0.33 4.02±0.24 1.34±0.87 2.11±0.12 1.76±0.28 12（8.63%）19（13.67%）对照组（n=80）47（58.75%）61.1±10.3 5.52±0.31 3.98±0.32 1.44±0.79 2.19±0.10 1.83±0.25 10（12.50%）15（18.75%）

1.2 分组标准 采用Judkins法对冠心病患者的左、右冠脉进行造影，根据病例资料将病例组分为三组：稳定型心绞痛组（38例）、不稳定型心绞痛组（45例）和心肌梗死组（56例），三组的基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。对冠心病患者进行Gensini评分，并按照评分标准［5］对患者进行分组，其中Gensini评分＜20分为轻度狭窄组（29例）、20-40分之间为中度狭窄组（72例）、＞40分为重度狭窄组（38例），三组的基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.3 ANK1和KRT8检测 分别收集两组研究对象清晨空腹时的肘静脉血，离心后将血浆置于-80℃的环境下保存。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆标本中的ANK1和KRT8浓度，试剂盒由CUSABIO公司提供，严格按照说明书操作。

1.4 统计学处理 采用SPSS21.0软件进行统计分析，定量资料以（±s）表示，两独立样本比较采用成组t检验，多组独立样本之间的比较采用方差分析，两两比较采用Dunnett-t检验，定性资料以率（%）表示，比较采用χ2检验，相关性分析采用Pearson积矩相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.3 ANK1和KRT8与冠脉狭窄程度的相关性分析 Pearson积矩相关分析，血浆ANK1、KRT8水平与Gensini评分呈正相关关系，r=0.692、0.735，差异有统计学意义（P＜0.05）；亚组分析中，血浆ANK1、KRT8水平与轻度冠脉狭窄组Gensini评分的相关系数r=0.593，0.683，与中度冠脉狭窄组Gensini评分的相关系数r=0.681，0.726，与重度冠脉狭窄组Gensini评分的相关系数r=0.773，0.791。

 

表2 比较病例组与对照组血浆ANK1和KRT8水平（±s）

  

注：与对照组比较，*P＜0.05，与稳定型心绞痛组比较，△P＜0.05，与不稳定型心绞痛组比较，＃P＜0.05。

 

组别稳定型心绞痛组不稳定型心绞痛组心肌梗死组对照组例数38 45 56 80 ANK1（ug/L）134.75±11.54*165.26±12.23*△198.33±9.85*△＃39.27±11.02 KRT8（ug/L）75.71±10.92*89.53±10.21*△117.80±11.34*△＃15.64±9.95

2.2 不同冠脉狭窄组患者与对照组血浆ANK1和KRT8水平比较 见表3。

 

表3 比较不同冠脉狭窄组患者与对照组血浆ANK1和KRT8水平（±s）

  

注：与对照组比较，*P＜0.05，与轻度狭窄组比较，△P＜0.05，与中度狭窄组组比较，＃P＜0.05

 

KRT8（ug/L）68.94±10.34*89.53±9.62*△122.03±8.83*△＃15.64±9.95组别轻度狭窄组中度狭窄组重度狭窄组对照组例数29 72 38 80 ANK1（ug/L）116.57±9.87*165.43±11.60*△208.58±10.34*△＃39.27±11.02

2.1 两组血浆ANK1和KRT8水平比较 见表2。

我的儿子在2岁8个月时，对我们的身体产生了强烈的好奇心，他发现洗澡的时候大人是不穿衣服的，于是，只要家里有人进入浴室洗澡，他便端上一个小板凳，坐在浴室门口像看电影一样，不允许洗澡的人关门，否则就大哭。

3 讨论

干燥、干旱气候会使农田灌溉次数增多。由于华北地区的夏季温度较高，经常会出现干旱、干燥的现象，因此为了能够更好的满足农田的根本需求，应进行合理的灌溉，在灌溉的过程中应采用相关的技术才能保障水资源的合理利用。但全国很多地区都面临着严重水资源短缺的问题，使得水资源难以有效的满足于农田的根本需求，所以在农田水利工程当中运用节水灌溉技术成为了重要的研究课题。

本研究结果显示，病例组患者的血浆ANK1和KRT8水平均高于对照组，提示冠心病患者外周静脉血中ANK1和KRT水平明显升高。在此过程中，ANK1通过促进心脏的快信号传导等电生理活动而扮演了重要角色。而内皮细胞的凋亡参与了冠状动脉粥样硬化的发生发展过程，因此KRT8可能参与了冠心病的发病。研究结果显示，稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛组和心肌梗死组患者血浆ANK1和KRT8水平依次增大。按照Gensini评分，轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组患者血浆ANK1和KRT8水平依次增大，上述结果均提示冠心病患者病情越严重，冠脉狭窄程度越厉害，ANK1和KRT8的表达水平越高。

冠状动脉造影是临床诊断冠心病的“金标准”，但其具有有创性，且价格较为昂贵［6］，寻找有效的生物标志物对早期筛查和诊断冠心病具有重要意义。

ANK家族参与了细胞的活化、增殖等细胞活动，是连接细胞骨架肌动蛋白的联接蛋白。报道显示［7］，ANK家族蛋白通过与收缩蛋白相结合调节不同的离子通道，促进心脏和神经的快信号传导等电生理活动。KRT家族蛋白包括I型KRT和II型KRT，与细胞的有丝分类、凋亡坏死等细胞活动有密切关系。KRT8是上皮细胞中II型KRT中重要的一种，研究表明［8］，KRT8在细胞的凋亡过程中被磷酸化，最后在细胞膜上被破坏而脱落。有研究显示［9］，KRT8在冠心病患者的血管平滑肌细胞中水平升高，并且随着病情的持续恶化而升高。同时，也有研究证实［10］，行冠脉搭桥手术的患者，KRT8表达较高，术后更易出现远期预后不良。

Gensini评分是评估冠心病患者冠脉狭窄程度以及累及段数的重要指标，评分越高，冠状动脉狭窄程度越严重，本研究结果显示，血浆ANK1、KRT8水平与Gensini评分呈正相关关系，提示将ANK1和KRT8作为辅助诊断冠心病病情的蛋白标志物具有重要的价值。

自进入21世纪以来，我国城镇化进程加快、社会经济迅速发展，人民生活水平逐步提高，先进的医疗技术和设备不断涌现，伴随着医疗理念的转变，医学模式的创新，人们对医疗服务功能越发重视，对医院的定位已经不单纯局限于治疗疾病，进而对医疗设施、医疗环境，甚至医院建筑的设计也给予了越来越多的关注，并提出了更高的要求。

鉴于药学类实验室种类多样，经常存在多学科交叉共用实验室现象，笔者提出以实验室安全防控点为依据的实验室分类方案，以便安全环保培训和实验室准入制度的实施。该分类方案将实验室按安全与环保因素分为以下几类：“有毒”指可直接接触有毒物质、产生有毒气、液、固体物质、接触高传染性生物、放射性物质等的实验室；“危险”指实验中可能发生爆炸、爆沸、明火，接触高压、高温等实验室；“风险”指实验中可能接触腐蚀性物质，可造成实验者肢体损伤，接触动物、微生物有潜在感染，火、水、电伤害等的实验室；“一般”可能出现水、电、火灾及普通污染物等实验室，具体涉及的实验室见表1。

综上所述，ANK1和KRT8在冠心病患者的血浆中明显升高，并且随着患者冠状动脉狭窄程度的加重而升高。相较昂贵且有创的冠状动脉造影检查，ANK1和KRT8对早期筛查及诊断冠心病具有重要临床意义。

参考文献

［1］ Taneja S，Chauhan S，Kapoor PM，et al.Prevalence of carotid artery stenosis in neurologically asymptomatic patients undergoing coronaryartery bypass grafting for coronary artery disease：Role of anesthesiologist in preoperative assessment and intraoperative management［J］.Ann Card Anaesth，2016，19（1）：76.

［2］ Zhang L，Zhang T，Xiang Z，et al.The rs3737964 single-nucleotide polymorphism of the chloride channel-6 gene as a risk factor forcoronary heart disease［J］.Mol Genet Genomic Med，2015，3（6）：537.

［3］ Preti D，Saponaro G，Szallasi A.Transient receptor potential ankyrin 1（TRPA1）antagonists［J］.Pharm Pat Anal，2015，4（2）：75.

［4］ Wang X，Chen P，Cui J，et al.Keratin 8 is a novel autoantigen of rheumatoid arthritis［J］.Biochem Biophys Res Commun，2015，465（4）：665.

［5］ He LY，Zhao JF，Han JL，et al.Correlation between serum free fatty acids levels and Gensini score in elderly patients with coronary heart disease［J］.J Geriatr Cardiol，2014，11（1）：57.

［6］ Menke J，Unterberg-Buchwald C，Staab W，et al.Headto-head comparison of prospectively triggered vs retrospectively gated coronary computed tomography angiography：Meta-analysis of diagnostic accuracy，image quality，and radiation dose［J］.Am Heart J，2013，165（2）：154.

［7］ Wang C，Wei Z，Chen K，et al.Structural basis of diverse membrane targent recognitions by ankyrins［J］.Elife，2014，10（3）：e04353.

［8］ Kuchma MH，Kim JH，Muller MT，et al.Prostate cancer cell surface-associated keratin 8 and its implications for enhanced plasmin activity［J］.Protein J，2012，31（3）：195.

［9］ 李蓉，蔡辉.内皮细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的研究进展［J］.中国老年学杂志，2012，32（12）：2649.

［10］Perek B，Malinska A，Ostalska-Nowicka D，et al.Cytokeratin 8 in venous grafts：a factor of unfavorable longterm prognosis incoronary artery bypass grafting patients［J］.Cardiol J，2013，20（6）：583.