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LXA4抑制LPS诱导的内皮间质转化参与脓毒症心肌病的机制研究

更新时间:2009-03-28

脓毒症心肌病(Sepsis cardiomyopathy)是指临床上并发心血管功能障碍的严重脓毒症。目前研究证明,炎症细胞和其产生的细胞因子在心肌局部大量聚集和浸润是加剧脓毒症心肌病心血管功能障碍的原因之一[1]。脂氧素A4(LXA4)是一种由花生四烯酸通过15-脂氧合酶的作用合成的内源性抗炎及免疫调节介质,可以发挥抗纤维化作用,且可抑制肾小管上皮间质转化过程[2]。内皮间质转化是指内皮细胞在一定病理因素的刺激下,失去内皮细胞表型而获得间质细胞表型,使内皮结构完整性受损,将利于许多大分子物质及炎症细胞等进入内皮下[3]。因此,EndMT可使内皮细胞连接的完整性破坏从而使血管内皮通透性增加,屏障作用受损。研究诱导EndMT的通路很多,其中Wnt-β-catenin通路是其中之一。本实验研究LXA4对LPS诱导的EndMT过程的影响及可能的调控机制。

1 材料与方法

1.1 实验细胞和主要材料 人主动脉内皮细胞:购自美国ATCC公司,使用不超过7代。LPS购自eBioscience公司,LXA4购自R&D公司,EGM-2培养基购自Lanza公司,0.25%胰酶和胎牛血清购自Gibco公司,CD31、VE-cadherin、α-SMA、β-catenin、FSP-1及GAPDH抗体购自Abcam公司,Wnt agonist-1购自selleck公司。

1.2 方法 HAECs用内皮细胞专用培养基EGM-2在37℃、5%CO2条件下培养,根据细胞生长状态每2天左右换液,选择5-7代生长状态良好的细胞用于下一步实验。传代使用0.25%胰酶,冻存用90%胎牛血清+10%DMSO。(1)实验分为control组、LPS组和LPS+LXA4组,其中LPS浓度为:10 ug/ml,LXA4浓度为:200 nM;LXA4预处理30 min后予以LPS刺激。分别刺激3d后通过普通显微镜下拍照、免疫荧光、Western blot和qPCR方法检测内皮细胞和间质细胞的标记物表达情况。(2)实验分为control组、LXA4组、Wnt agonist-1组、LPS组、LPS+LXA4组和LPS+LXA4+Wnt agonist-1组,其中LPS、LXA4、Wnt agonist-1的浓度分别为:10 ug/ml,200 nM,20 uM;LXA4和Wnt agonist-1预处理30 min后予以LPS刺激。分别刺激3 d后通过Western blot和qPCR方法检测相关蛋白和mRNA的表达情况。

从全年的气象数据可看出5月中旬到6月中旬,气温降水正常,水稻分蘖正常。6月下旬到7月中旬日均温较低,雨水多,光照不足,不利于水稻孕穗抽穗。7月下旬到10月上旬的光照充足、温度较高,有利水稻灌浆和籽粒成熟。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件处理数据,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.2 LXA4通过Wnt-β-catenin通路发挥抑制EndMT的作用 LXA4抑制EndMT后CD31、VE-cadherin、α-SMA和FSP-1蛋白和mRNA表达水平,而加入Wnt agonist-1预处理后,可恢复LXA4对CD31、VE-cadherin、α-SMA和FSP-1的影响,提示LXA4通过Wnt-β-catenin通路发挥抑制EndMT的作用,详见图2。

第7行的arba的完整形式应为arbai;第8行bedügün即büdügün,ür-e没有写出ü字母的长牙。这都是民间书写没有严格遵蒙古文正字法的结果。由于文书残缺严重,这里只能简述大意:在某月的十几(?)日,雇佣了某人,佣金为若干斗五升大麦。这些大麦中有若干升是大粒种子

  

图1 脂氧素A4抑制脂多糖诱导的内皮间质转化

 

注:*P<0.05 vs.Control组和LXA4组;#P<0.05 vs.LPS组。

2.1 脂氧素A4对脂多糖诱导的内皮间质转化的影响 相较于control组,单纯预先加入LXA4处理组的内皮细胞和间质细胞标记没有明显的变化,而LPS刺激组的内皮细胞标记物CD31和VE-Cadherin表达减少,而间质细胞标记物α-SMA和FSP-1表达增加,但与LPS刺激组相比,预先加入LXA4处理的组内皮细胞标记物CD31和VE-Cadherin表达增加,而间质细胞标记物α-SMA和FSP-1表达减少,详见图1。

3.1 脂氧素A4抑制脂多糖诱导的内皮间质转化

  

图2 脂氧素A4通过Wnt-β-catenin通路发挥抑制EndMT作用

 

注:*P<0.05 vs.Control组和LXA4组;#P<0.05 vs.LPS组;&P<0.05 vs.LPS+LXA4组。

3 讨论

当地群众作为县级电视台的主要受众,他们是否认可和喜欢,将直接影响到电视的收视率。为此,乡镇电视台无论是在采编新闻,还是制作新闻,都应立足于最广大群众的利益,学会站在群众的角度思考问题,让县级新闻不仅符合党的方针和政策,更能获得群众的认可和青睐。可见,乡镇电视台的新闻内容应以群众的意识和需求为切入点,制作一些能够获得群众支持并和他们产生精神共鸣的新闻节目,才能使乡镇电视台得以长久、稳定、可持续发展

临床上脓毒症(sepsis)是指主要由感染引起的全身炎症反应综合征,脓毒症最常见的病因是细菌感染[4]。其中,LXA4是一种内源类花生酸类脂质介质,作为一种重要的抗炎和促分解介质,LXA4在脓毒症中起着重要作用[5];在心脏方面,LXA4可以发挥抗纤维化作用[6],且可抑制肾小管上皮间质转化过程。体外实验显示:与LPS组相比,LXA4预处理组的CD31和VE-Cadherin表达增加,而α-SMA和FSP-1表达减少,说明LXA4可以抑制LPS诱导的内皮间质转化过程。

3.2 脂氧素A4通过Wnt-β-catenin通路发挥抑制EndMT作用 体外细胞实验已证实,LXA4可以抑制LPS诱导的EndMT;在心血管系统中,诱导EndMT的常见通路有许多,而Wnt通路就是其中之一[7]。与LPS+LXA4组相比,LPS+LXA4+Wnt agonist-1组的CD31和VE-cadherin的蛋白和mRNA表达减少,同时,α-SMA和FSP-1的表达增加,这提示LXA4可能通过Wnt-β-catenin通路发挥抑制EndMT的作用。

综上所述,在体外细胞实验中,LXA4可抑制LPS诱导的EndMT过程,且可能通过Wnt-βcatenin通路发挥作用,进一步研究LXA4在动物模型中发挥的作用及相关的机制将有助于深入认识脓毒症心肌病的病理生理学机制,为脓毒症心肌病的药物治疗提供新的靶点。

参考文献

[1] Vincelj J.Septic Cardiomyopathy[J]。 Acta Med Croatica,2015,69(3):177.

[2] Cheng Q,Wang Z,Ma R et al.Lipoxin A4 protects against lipopolysaccharide-induced sepsis by promoting innate response activator B cells generation[J].International Immunopharmacology,2016,39:229.

[3]Herrington W,Lacey B,Sherliker P,et al.Epidemiology of atherosclerosis and the potential to reduce the global burden of atherothrombotic disease[J].Circ Res,2016,118(4):535.

[4] Kakihana Y,Takashi Ito,Mayumi Nakahara,et al.Sepsis-induced myocardial dysfunction:pathophysiology and management[J].Journal of Inten-sive Care,2016,4(1):22.

[5] Cheng X,He S,Yuan J,et al.Lipoxin A4 attenuates LPS-induced mouse acute lung injury via Nrf2-mediated E-cadherin expression in airway epithelial cells[J].Free Radical Biology and Medicine,2016,93:52.

[6] Kong P,Christia P,Frangogiannis NG,et al.The pathogenesis of cardiac fibrosis[J].Cellular and MolecularLife Sciences,2014,71(4):549.

[7] Li L,Chen L,Zang J,et al.C3a and C5a receptor antagonists ameliorate endothelial-myofibroblast transition via the Wnt/β-catenin signaling pathway in diabetic kidney disease[J].Metabolism,2015,64(5):597.

 
方永标,黄图城,王晓俏,陈样新
《岭南急诊医学杂志》2018年第02期文献

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