HPLC法测定植物油中苯并(α)芘含量结果的不确定度评定

苯并(α)芘是一种含5个苯环的稠环芳烃，分子式为C20H12，被世界卫生组织国际癌症研究机构列为第一类“人类致癌物”[1]。大量研究表明，食用油中苯并(α)芘的污染主要来源于环境带入、原料的蒸炒/焙炒、高温压榨、溶剂带入、高温脱臭等环节，已经引起世界各国的广泛重视[2]。GB 2762—2017[3]规定，食用植物油类产品中苯并(α)的安全限量为10 μg/kg。因此，准确测定植物油中苯并(α)芘的含量非常重要。

不确定度是合理表征、赋予被测量值的分散性与测量结果相联系的参数，是科学评价检测结果的参数之一[4]。罗成玉[5]等依据GB/T 22509—2008曾对植物油中苯并(α)芘不同参数测定进行不确定度评定，发现不确定度的主要来源于标准溶液的配置、回收率、测量重复性等。

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依据新国标GB 5009.27—2016[6]，使用购买的苯并(α)芘测定专用柱，移液器配置标准曲线，采用HPLC法测定苯并(α)芘在植物油中的含量，参照CNAS GL06—2006[4]、JJF1059.1—2012[7]标准和Robertson等[8-9]对不确定度的研究，通过分析和量化各不确定度分量对测定结果的影响，计算被测量物质的标准不确定度和扩展不确定度，分析不确定度分量对测定结果不确定度的相对贡献，以期为评价测定结果的准确性和可靠性提供依据[10]。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：LC-20AD液相色谱仪，配荧光检测器(RF-20A)，日本岛津公司；Cleanert® SPE BAP苯并(α)芘检测专用柱；苯并(α)芘溶液标准物质GBW(E)080476，中国计量科学研究院；乙腈(色谱纯)，正己烷(分析纯)，蒸馏水。

1.2 实验方法

参照GB 5009.27—2016[6]反相液相色谱法进行。

1.2.1 实验步骤

首先用正己烷提取，Cleanert® SPE苯并(α)芘检测专用柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，最后用高效液相色谱仪(配荧光检测器检测)确证，外标法定量。

1.2.2 测定过程

称取0.4 g植物油(精确到0.001 g)于50 ml离心管中，加入5 ml正己烷，漩涡混合0.5 min，待净化。

用约30 ml正己烷活化苯并(α)芘检测专用柱，待液面降至柱床时，关闭底部旋塞。将待净化液转移进柱子，打开旋塞，以1 ml/min的速度收集净化液到茄形瓶，再转入50 ml正己烷洗脱，继续收集净化液。将净化液在40℃下旋蒸至约1 ml转移至色谱仪进样小瓶，在40℃氮气流下浓缩至近干。用1 ml正己烷清洗茄形瓶，将洗涤液再次转移至色谱仪进样小瓶并浓缩至干。准确吸取1 ml乙腈到色谱仪进样小瓶，涡旋复溶0.5 min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。

1.2.3 色谱条件

色谱柱：C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(体积比为88∶12)，流速为1.0 ml/min；荧光检测器：激发波长为384 nm，发射波长为406 nm。

1.2.4 定量方法

综上所述，校准过程带入的不确定度为

1.2.5 苯并(α)芘含量的计算公式

按照下式计算苯并(α)芘的含量。

 

式中，X表示样品中苯并(α)芘的含量，μg/kg；C表示由标准曲线得到的样品净化溶液浓度，ng/ml；V表示试样最终定容体积，ml；m表示试样质量，g；1 000表示由ng/g换算成μg/kg的换算因子。

2 结果与讨论

2.1 不确定度分量的评定

2.1.1 校准不确定度

校准过程中的不确定度包含两种不确定因素：一是标准溶液配制的不确定度，二是计算样品中苯并(α)芘浓度时带入的不确定度。

人们普遍感到这是个物质上快节奏发展的时代，是个精神上有些浮躁的时代。物质的繁荣让吃饱穿暖的人们有闲暇去追求娱乐和令人愉悦的东西，以颜值为代表的观念应运而生。这让我想到了魏晋南北朝时代，风气是那么的相似。年少时看书，看到潘岳、卫玠的出场是那么让人眼前一亮地欢喜，看到慕容冲和独孤信的出现是那么让人惊为天人地欢呼！他们不但有一定的才华能力，还都那么容颜绝代，留下了许多美丽的故事和画面：掷果盈车、珠玉在侧、侧帽风流、凤止阿房，造化把多少灵秀之气都聚集在了这样的几人身上啊！

2.1.1.1 标准溶液配制的不确定度

2.1.1.1.1 标准物质的不确定度

不同厂家生产的标准物质的纯度不同，由其所导致的不确定度也不同，查找苯并(α)标准物质的出厂证书可以知道其浓度为(4.95±0.05) μg/ml，置信水平为95%，假设为正态分布，故其标准不确定度(u)和相对标准不确定度(urel)分别为

 

2.1.1.1.2 中间标准溶液配制的不确定度

吸取1 ml浓度为4.95±0.05 μg/ml的苯并(α)芘标准储备液，用乙腈定容到10 ml容量瓶，得到浓度为495 ng/ml的标准中间液，配制过程中使用移液器吸取标准储备液时，会引入一定的不确定度，依据JJG 646—2006移液器检定规程中相应的最大允差(MPE)，并根据矩形分布计算可以得到

 

同样可以根据JJG 196—2006规程得到，配制过程中使用的10 ml容量瓶的允差为±0.020 ml，u(V2)和urel(V2)分别为

图2为C/C试样热解碳的偏光显微图.由图可知,C/C试样中CVI制备的热解碳具有规整的“十”字架消光轮廓及环向裂纹,为光滑层结构,因此C/C试样的摩擦系数相对较低,具有耐磨的特性.在摩擦过程中,热解碳形成的磨屑膜隔离材料与对磨销的直接接触,起到了减小摩擦系数、降低磨损率的作用;热解碳消耗后,树脂碳支撑碳纤维,与碳纤维共同保持材料的结构,承受应力作用;树脂碳被犁削后,碳纤维因失去支撑而断裂或脱出,形成硬质磨屑.

 

2.1.1.1.3 标准工作液配制的不确定度

同理可得到2#—6#酒样的模糊综合评判总分为：T2=76，T3=84，T4=58，T5=84，T6=90。

将浓度为495 ng/ml的苯并(α)芘标准中间液用乙腈稀释得到0.5、1、5、10、20 ng/ml的校准曲线溶液。配制过程中使用了大小不同的移液器，由此产生的不确定度如表1所示。

 

表1 使用不同量程移液器时的不确定度

  

移液器量程ml吸取标液体积mlMPE(移液器)%u(移液器)mlurel(移液器)定容总体积ml定容所需移液mlMPE(1ml移液器)%u(1ml移液器)mlurel(1ml移液器)0.10.043.00.00173u1=0.0430.990.951.00.00577u2=0.00581.00.501.00.00577u3=0.01210.51.00.00577u3=0.0121.00.501.00.00577u3=0.01210.51.00.00577u3=0.0120.20.21.50.00173u4=0.008610.81.00.00577u2=0.00581.00.51.00.00577u3=0.01210.51.00.00577u3=0.012

依据JJG646—2006移液器检定规程中相应的MPE，计算得到

(2)实验结果的不确定度可表示为(3.10±0.472) μg/kg。在测定过程中，检测人员应严格按照规范配置标准溶液，减小定容和移液过程中提取、净化、洗脱等步骤的关键控制点，由于不同品牌氧化铝活性存在差异，应对质控样品进行测试，或做加标回收试验，以验证氧化铝活性是否满足回收率要求。只有这样，才能把不确定度控制在可接受的范围内。

现代社会，人文关怀已成为领导者成功的重要因素，其本质内核在于尊重。校长的重要职责，就是充分了解教职员工的优势与专长，尊重每位教师的工作需求和个性特点，信任他们，使大家各得其所、各尽所能，获得职业的归属感和认同感。

综上可知，标准溶液配制带人的不确定度为

urel(ref)0.0540。

2.1.1.2 计算样品中苯并(α)浓度带入的不确定度

样品中苯并(α)芘浓度测定过程采用所配制的0.5、1、5、10、20 ng/ml的标准工作液，每个浓度分别测定3次，得到3次对应的峰面积A1-A3，根据最小二乘法计算，拟合求得标准工作曲线的一元一次方程A=54 139C+1 783.7,结果见表2。

④运动指导：运动方式必须是在保证孕妇及胎儿安全的前提下进行，运动的形式以有氧运动及能长期坚持为原则，如散步、上肢运动、孕妇体操等。运动的强度以中强度为宜，自测心率＜120次/min。运动持续时间从10 min开始，逐步增加至 30～40 min，餐后1 h进行。

 

表2 标准工作液测定结果和标准曲线方程

  

标准溶液浓度ng·ml-1峰面积A1A2A3A40.524015295232896527501152145531875535653563528137628144127404027895210547310535714538734540586201131482106743010542691084394拟合结果A=54139C+1783.7R2=0.9999 截距a=1783.7 斜率b=54139

2.1.5 随机效应带入的不确定度

 

式中，S(A)表示标准溶液峰面积残差的标准差，表示标准溶液峰面积；C表示标准溶液浓度表示标准溶液的平均浓度,ng/ml；Scc表示标准溶液浓度残差的平方和，表示标准溶液的测定次数，本实验取n=15；p表示试样的测定次数，本实验取p=3。

标准曲线的拟合过程中存在的urel(C)值为

 

用浓度为(4.95±0.05) μg/ml的标准储备液逐级稀释，配成浓度分别为0.5、1、5、10、20 ng/ml系列标准工作溶液，5种不同浓度的标准工作液均用HPLC法重复测定3次，取平均值，标准工作曲线用最小二乘法拟合进行校准得到浓度-峰面积曲线。

2.1.4 样品处理液定容引入的不确定度

2.1.2 样品称量不确定

用精确至0.1 mg的电子分析天平称取植物油样品，称量过程所引入的不确定度来自天平校准。天平校准的允许误差极值为±0.1 mg，按正态分布，容量因子k=2，称样量为0.4 g，则称量样品时天平引入的相对标准不确定度为

 

2.1.3 试样均匀性和处理操作过程引入的不确定度

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测量重复性主要受实验人员在样品处理过程中的操作一致性、样品均匀性和仪器性能的影响，该不确定度属A类评定，利用添加2.5 μg/kg水平6次样品进行平行加标测定，测定的样品回收率Rec分别为97.4%、94.6%、92.4%、93.3%、98.4%、95.8%。平均回收率标准偏差sR=2.31%，计算得到和分别为

 

urel(cal)

罪犯改造质量是衡量监狱行刑效益的重要量尺，是检验监狱工作层次和水平的试金石。做好新时代监狱工作，我们必须坚持以政治改造为统领，统筹推进监管改造、教育改造、文化改造、劳动改造，切实把罪犯教育改造好，提高罪犯的改好率，降低重新犯罪率，切实维护社会稳定和国家安全。

根据JJG646—2006[11]，1 ml移液器允许最大误差为±1.0%，按均匀分布，则1 ml移液器的相对标准不确定度

 

将得到的3次样品峰面积值(A1=71 901、A1=65 618、A1=69 716)代入标准曲线方程中，求得3次测定的平均浓度C=1.24 ng/ml，样品中苯并(α)的浓度根据标准曲线求得，而标准曲线的拟合过程中存在着一定的不确定度，其u(C)值为

按照GB 5009.27—2016[6]测定阳性植物油中苯并(α)含量，结果分别为3.14、2.95、3.21 μg/kg，平均值标准偏差计算测定过程中伴随的随机效应导致的和分别为

 

2.2 主要不确定度分量对不确定度的贡献

表3为主要不确定度分量对不确定度的相对贡献。由表3可知，标准溶液配制的不确定度的相对贡献占绝大部分，随机效应次之，体积的影响相对较小，因此，在测量的过程中要严格控制标准溶液的配置。

 

表3 主要不确定度分量的相对贡献

  

不确定度分量相对标准不确定度u(y1)相对贡献[u(y1)/u(y)]2/%校准过程0.071287.39体积的影响0.00580.58样品前处理Rec0.00991.69随机效应的影响0.023610.35

2.3 合成标准不确定度

由上述各相对标准不确定度合成植物油中苯并(α)芘含量测定的相对标准不确定度为

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——武汉大学社会学系研究员、博士生导师吕德文表示，非黑即白是现在一些媒体报道和学术研究的共同特点，非常容易影响人们的情绪

2.4 扩展不确定度

本实验植物油中苯并(α)芘的含量为3.10 μg/kg，则其标准不确定度

 

在没有特殊要求的情况下，按照国际惯例，取扩展因子k=2，置信概率p=95%，则苯并芘测量结果的相对扩展不确定度

 

3 结论

本研究采用HPLC法测定植物油中苯并(α)芘的含量，通过分析和量化各分量不确定度对测定结果的影响，计算得出各分量的标准不确定度和扩展不确定度，并对测定结果的不确定度来源及各分量相对贡献进行比较和评定，得到如下结论。

(1)测量结果的不确定度主要来源于标准溶液的配置，其次是样品前处理Rec、随机效应和标准曲线拟合，体积的影响最小。

urel(Vs)

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[8] ROBERTSON M,CHAN T S S.APLAC interpretation and guidance on the estimation of uncertainty of measurement in testing[J]．J AOAC international,2003,86(5):1 070-1 076.

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