甲硝唑、克霉唑对精斑混合斑前列腺特异抗原检验的影响

1962年，Garaway首先提出某些治疗药物可以影响体液中多种成分浓度的检测，这个问题受到了越来越多生化学家、检验工作者及临床医师的广泛关注。对检验结果有影响的药物，目前已达40 000多种[1]。

前列腺特异抗原(prostate-specific antigen,PSA)检验是法医精斑确证试验的首选方法。性侵案件中，由于受害人的随机性，不可避免存在受害人有阴道用药情况。为验证这些药物是否对PSA检验结果产生影响，实验室在已知PSA浓度的精斑混合液中加入常用阴道药物甲硝唑、克霉唑，观察加药前后PSA测量值有无变化，现报道如下。

2.1 本工程上人梯共2个，分别位于1#、2#煤仓之间南侧和2#、3#煤仓之间南侧，每相邻两个仓共用1个上人梯。

1　材料与方法

1.1　药物　分别将药物粉碎，使用天平称重，在0.01～0.08 g之间设置5个梯度，置于eppendorf管中备用，本次实验所用药物主要技术参数，摘自药物使用说明，见表1。

 

表1　两种实验用药物一般情况

  

名称生产厂家主要成分针对菌群作用机理使用方法甲硝唑片康美药业股份有限公司甲硝唑，每片0．2g阴道滴虫病、厌氧菌感染机理未明，对厌氧菌有杀灭作用，能抑制细菌脱氧核糖核酸的合成，从而干扰其生长、繁殖每次0．5g，，阴道给药克霉唑阴道片华纳大药厂克霉唑+辅料(乳酸、乳糖等)，每片500mg念珠菌广谱抗真菌药。抑制真菌细胞膜合成，影响其代谢过程阴道给药，睡前1片

1.2　仪器　全自动化学发光免疫分析仪(雅培i2000，美国)；天平(赛多利斯CP225D，德国)；抗体(雅培公司，试剂批号：64214FN00)；PSA金标试剂条(biowin，符合GA766-2008)

参考文献：

[1]　贺勇,涂植光.药物对实验室检验结果的干扰[J].国际检验医学杂志,2003,24(2):122-123.

2　结果

已知浓度的PSA溶液加入药物后检测，克霉唑最低浓度为0.024 6 g·mL-1，最高浓度为0.152 4 g·mL-1；甲硝唑最低浓度为0.022 6 g·mL-1，最高浓度为0.153 2 g·mL-1。PSA定量值明显下降，且下降值和加入的药物量呈正相关，两种药物相比，克霉唑下降更明显。金标法PSA检验与定量检验结果下降趋势一致。 PSA定量值为7.399～8.141 ng·mL-1时，金标试剂条检验为弱阳性，PSA定量值为4.790 ng·mL-1时，金标试剂条表现为阴性，见表2。

 

表2　已知精斑与药物混合后PSA检验结果

  

PSA溶液/(ng·mL-1)加入克霉唑粉剂孵育后PSA检测加入甲硝唑粉剂孵育后PSA检测加入量/gPSA定量值/(ng·mL-1)PSA金标法加入量/gPSA定量值/(ng·mL-1)PSA金标法124．9900．012317．289+0．011329．042+124．9900．022111．313+0．023527．469+124．9900．03798．141±0．036324．078+124．9900．04618．100±0．043721．001+124．9900．07627．399±0．076618．319+8．7370．01342．009-0．01394．790-8．7370．02291．616-0．02253．911-8．7370．03671．562-0．03493．349-8．7370．04721．490-0．04833．875-8．7370．07411．399-0．07502．499-

3　讨论

本研究结果，甲硝唑、克霉唑可以影响精斑混合斑中PSA浓度的检测，加入药物后，定量检测值明显下降。分析原因可能为加入的药物使前列腺特异抗原结构或者带有荧光标记的抗体发生结构改变，使得带有荧光标记的抗体与抗原不能结合，定量值下降；PSA定量值为7.399～8.141 ng·mL-1时金标试剂为弱阳性，PSA定量值为4.790 ng·mL-1时金标试剂为阴性，分析认为金标试剂条灵敏度约5 ng·mL-1。

PSA试验阴性，表示待测样品中不存在精斑[3]。但在法医实践中，PSA试剂条阴性却检出男性DNA分型的现象时有报道[7-11]，杨思思等报道分析水中尸体PSA试剂条阴性但检出男性精子DNA分型的原因考虑为PSA水中溶解、腐败[8]，王智等考虑为被女性阴道内的蛋白酶破坏[11]，并未对形成原因做进一步实验性验证。作者所在实验室也存在上述现象，通过对本地案件回访发现，部分受害人案发前后有阴道用药的行为。

为进一步验证阴道用药与PSA测量值的相关性，本研究采用将药物加入到已知浓度的精斑中，观察加药前后PSA定量值是否有变化。药物选用甲硝唑、克霉唑(主要是因为阴道炎是妇科阴道类疾病中最为常见的疾病[12]，对上述疾病治疗通常采用甲硝唑、替硝唑类栓剂、克霉唑片剂等类型药物抗治疗)。PSA定量检测浓度在0.001～1 000 ng·mL-1均能正确进行定量。为便于观察药物作用前后定量结果的不同和验证金标PSA试剂条的灵敏度，将已知人精斑混合斑稀释成高低两个浓度，分别为124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1两种。药物使用量在0.01～0.08 g之间，明显低于说明书中的单次用药量。试验过程则模拟阴道用药溶解后直接与PSA接触的方式，将药物粉碎后直接加入到含有人PSA的精斑浸泡液中，37 ℃孵育30 min，期间适时对混合液进行摇匀。

PSA系成熟的男性前列腺及尿道周围腺体上皮细胞产生的丝氨酸蛋白酶，也称为E1蛋白、γ-精浆蛋白、P30、PA等[2]，具有高度的器官特异性和种属特异性，能正确区别动物精斑与人类精斑[3]，尤其适用于输精管结扎术后及精子缺乏个体的精斑检验[4-5]。因此，对混合斑进行PSA检验为大多数法医物证实验室精斑确证实验的首选方法，并可根据PSA检测结果制定下一步的检验方案[6]。

本实验中，定量值为8.737 ng·mL-1的低浓度的PSA溶液，加入实验药物后PSA金标试剂条均表现为阴性，但定量法均能够检出。在本实验室实际工作中，在对1例未知名女尸体阴道拭子进行检验时金标试剂条阴性，却检出微量精子DNA分型，后通过定量补测PSA浓度为0.491 ng·mL-1。因此，在法医实践中，使用金标法试剂条检验精斑时，如存在药物等影响PSA的因素，检验时应采取各种措施提高检材浸泡液中的PSA浓度，如增加检材量、减少浸泡液体积、延长浸泡时间等，避免PSA浓度低于试剂条灵敏度造成阴性而漏检。为了更客观、真实地描述检材中的PSA量，有能力的实验室应引进准确性更高的现代化定量检测设备，出具鉴定文书时，同时对检测方法的灵敏度进行描述。

1.2 仪器与设备 GC-MS-2010-plus型气相色谱-质谱联用仪，配有EI源，四级杆质量分析器；GC-MS Solution，日本岛津公司；NIST05版质谱图库；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；57330U型手动SPME萃取手柄及65 μm聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯(PDMS/DVB)萃取探头；20 mL精密螺纹口透明玻璃顶空进样瓶，美国Supelco公司。

综上，阴道药物甲硝唑、克霉唑可使精斑混合斑中的PSA检测值下降，金标试剂条表现为阴性，在法医实践中应当引起重视。对强奸案件进行受理检验时，除详细了解案情、作案经过外，还应对受害人的身体状况进行了解，详细询问受害人案发前后有无妇科用药、具体用药种类、具体洗液类型等，以免漏检，并为案件的侦查起诉提供更多信息。

1.3　已知浓度精斑制备　日常受理案件中已知人精斑混合斑，超纯水稀释后使用化学发光免疫分析仪对PSA定量，终浓度分别为124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1两种。

1.4　方法　在装有不同量的克霉唑、甲硝唑粉剂的eppendorf管中，分别加入浓度为124.990 ng·mL-1、8.737 ng·mL-1的PSA稀释液500 μL，药物终浓度为0.022 6～0.153 2 g·mL-1，37 ℃孵育30 min，期间每隔5 min震荡混匀。离心取上清200 μL，化学发光免疫分析仪定量检测；同时进行金标试剂条PSA检验。

[2]　Rao AR,Motiwala HG,Karim OM.The discovery of prostate specific antigen[J].BJU Int,2008,101(1):5-10.

电阻效应、等离子体溅射和中子、伽玛辐射会导致上述线圈的温度不断升高。为了防止这些线圈过热，该堆在这些线圈内敷设了流有液氮、液氦、FLiBe等冷却剂的冷却管，或将线圈中的导线直接浸没在这些流动的冷却剂中，以带走线圈产生的热量。

[3]侯一平.法医物证学[M].北京:人民卫生出版社,2009:331-333.

[4]Healy DA,Hayes CJ,Leonard P,et al Biosensor developments:application to prostate specific antigen detection[J].Trends Biotechnol, 2007,25(3):125-131.

牛咀大桥为双向八车道城市-A级公路桥梁，为简支桥梁，跨度 25m，分左右两幅，每幅桥梁宽度 16m，桥面到桥底最大高差24m，每跨桥梁采用两根直径1.8m墩柱式桩基础。

[8]刘海渤,侯安山.焚烧尸体子宫内检出精斑DNA1例[J].刑事技术,2011,216(1):12.

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[7]杨思思,贾晓杰.精斑试纸在水中高腐尸体应用实效1例[J].山西职工医学院学报,2011,21(3):3-6.

此外，实验室还对市售妇科洗液妇炎洁与已知浓度的PSA溶液进行混合后定量检测，结果显示也可导致定量值下降，考虑到洗液大部分为中药配方且成分复杂，其对PSA的影响实验室将进一步研究并再做报道。

由图2可知，线缆SC1固定点间最近的距离为371 mm，最远的距离为834 mm。根据车钩缓冲器的伸缩量进行曲线模拟，可得到表2。

[9]王玉健,杨智,匡金枝.1例强奸案件DNA鉴定分析[J].中国法医学杂志,2006,2(13):184-186.

[10]高林林,周志全,陆永佳,等.Y-STR分型技术在性侵犯案件中应用3例[J].中国法医学杂志,2015,30(2):190-191.

1.1 资料来源 选取2016年1-12月在德阳市人民医院门诊进行体检的健康学龄前儿童1 452例为研究对象，经血常规检查确诊，排除其他类型的贫血、其他疾病导致的贫血、合并感染、肝肾功能不全、心脑血管疾病、内分泌疾病、1个月内无消化道或呼吸道感染、3个月内使用过糖皮质激素及免疫制剂者、正在接受缺铁性贫血治疗者。所有研究对象均为健康体检儿童，非因疾病原因接受检查。研究对象男815例，女637例；年龄6个月～6岁，平均 (3.14±0.57)岁，其中<1岁378例、1～3岁595例、4～6岁479例。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象家属对本研究知情并签署知情同意书。

[11]王智,苗林,李昆亚,等.PSA试剂条阴性镜检阳性三例分析[M]//刘烁，叶健.2016法医遗传学进展.北京:中国人民公安大学出版社,2016:393-395.

[12]高丽虹.31 879名已婚女性妇科体检结果[J].浙江预防医学,2013,25(1):70-71.

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（1）毕业设计文档的撰写和整理。在毕业设计过程中，指导教师需要定期对毕业设计进行阶段性总结，针对每个学生指出近阶段的改进之处，并提出后一阶段的工作重点和方向。特别是文档撰写过程中对于设计说明书的内容剪裁、布局排版、语言描述、绘图技巧等进行多次反复的交流指导。