云南地区不明原因猝死心肌CD8+T细胞表达及心肌电镜观察

不明原因猝死(sudden unexpected death,SUD)是指经法医病理解剖、组织学检验及常规毒药物检验后仍不能明确死亡原因的猝死。不明原因猝死是当前法医学领域研究的热点问题之一。统计发现有1%～5%的死亡通过法医学系统尸体检验不能得出明确死亡原因[1]。在云南地区还存在着一类特殊的不明原因猝死类型，该猝死主要发生在云南一些偏远山区、半山区，具有明显的家族或家庭聚集性、空间聚集性和时间聚集性等特点，被学者称为云南不明原因猝死(yunnan sudden unexplained death,YNSUD)[2]。YNSUD自1978年首次报道以来，先后有20多个县的50多个乡镇报告了400余例猝死病例[3]，因其死因不明，无有效的治疗和预防措施，已成为严重的社会问题和法医学鉴定难点[4]。有学者通过常规的HE染色观察认为，部分YNSUD就是暴发性心肌炎。然而，心肌炎性损伤较为轻微的YNSUD通过常规的HE染色观察并不能明确认定为心肌炎[5]。为探明云南地区不明原因猝死与心肌炎之间的关系，本研究对YNSUD心肌、散发性SUD心肌进行免疫组织化学染色，检验CD8+T细胞在心肌的表达情况，同时对YNSUD病例的心肌组织进行扫描电镜观察，现报道如下。

对于数学全息定义，从建构数学科学体系的角度来看它是好的定义，但从教学的角度来看它既难教又难学．全息定义和非全息定义的教学有较大区别，全息定义一般应强化，而非全息定义一般宜淡化．

1　材料与方法

1.1　材料　本研究样本均来自昆明医科大学司法鉴定中心2013年至2015年，经鉴定为不明原因猝死病例29例(其中包括5例为YNSUD、24例为散发性不明原因猝死)，所选案例均经过常规HE染色后，光学显微镜下检查未达到诊断心肌炎标准，其他均未发现异常。正常心肌对照组9例。免疫组织化学检验所用抗体(mouse anti-CD8)、SABC免疫组化染色试剂盒和DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。2例死后20 h解剖提取的YNSUD病例心肌组织进行扫描电镜观察。

1.2　方法　免疫组织化学检验：心肌样品取材→包埋组织→切片→贴片→脱蜡→水化→抗原修复→血清封闭→加一抗→加二抗→显色剂→复染→脱水→封片→显微镜观察。扫描电镜观察：心肌样品取材→固定→脱水→干燥→粘样→镀膜→扫描电镜观察。

1.3　结果判定标准　本研究按许良中的判断标准：先将染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。再将阳性细胞所占的百分比评分：阴性为0分，阳性细胞簇10%为1分，11～50%为2分，51～5%为3分，>75%为4分。染色强度与阳性细胞百分比的乘积>3分为免疫反应阳性[6]；通过光学显微镜进行判断定性，每个高倍视野≥5个炎性细胞或淋巴细胞为心肌炎，<5个为炎性细胞或淋巴细胞浸润[7]；扫描电镜结果由两位专家分别进行观察判断。

2　结果

[12]Markiewicz-oskot G, Moric-Janiszewska E, Mazurek U.The risk of cardiac events and genotype-based management of LQTS patients[J].Ann Noninvasive Electrocardiol,2009,14(1):86-92.

4．多种极品类型均有产出。昌乐蓝宝石矿床之所以被称为极品宝石的摇篮，不仅是因为以上三方面特点，更主要的是矢车菊颜色、卡蓝等世界公认的极品类型蓝宝石品种在这里均有产出。

 

表1　29例不明原因猝死心肌情况　例

  

组　别CD8+T细胞阳性淋巴细胞及单核细胞浸润阴性合计YNSUD0145散发性SUD271524正常心肌0099

  

A:YNSUD心肌组织;B:散发SUD心肌组织;C:散发SUD心肌组织;D:散发SUD心肌组织呈炎性改变。图1　心肌组织中CD8+T细胞表达情况(HE,×100)

[1]　Tester DJ, Medeiros-domingo A, Will ML,et al.Cardiac channel molecular autopsy:insights from 173 consecutive cases of autopsy-negative sudden unexplained death referred for postmortem genetic testing[J].Mayo Clin Proc,2012,87(6):524-539.

  

A:心肌间质自溶性改变；B:心肌肌原纤维自溶性改变；C:心肌肌原纤维自溶横切面；D:心肌肌原纤维自溶横切面。图2　心肌肌原纤维电镜扫描图

3　讨论

心肌炎性损伤较为轻微的病变如何明确认定为心肌炎是目前猝死心脏病病理研究的一个难点。有学者通过对云南地区不明原因猝死尸体解剖及病理组织学光学显微镜检查表明，48%病例具有局灶性心肌炎改变[8,10,13]，但对其他无明显炎性细胞浸润的不明原因猝死是否存在心肌炎性损伤尚无研究报道。研究发现CD8+T淋巴细胞是免疫反应的效应细胞[8]，可介导细胞毒性作用，CD8+T细胞在病毒性心肌炎小鼠心肌组织浸润的炎性细胞中所占的百分率与心肌组织病理积分及心肌细胞凋亡率均呈显著正相关，与心肌细胞炎性损伤密切相关，可作为心肌炎性损伤的一个重要检测指标[9]。

本研究通过检测CD8+T细胞在云南地区不明原因猝死者心肌组织中的表达，结果有2例散发性不明原因猝死心肌CD8+T细胞表达呈阳性，表明其存在心肌炎性损伤，虽不能诊断为心肌炎，但其心肌炎性损伤可能与其死亡原因相关。本研究中5例YNSUD均未发现CD8+T细胞表达阳性，提示YNSUD与心肌炎无明确相关性。8例淋巴细胞及单核细胞浸润表明心肌存在炎性反应应答，而淋巴细胞是特异性免疫功能的重要组成部分，淋巴细胞在抗感染免疫中发挥重要作用[9]，本研究中8例不明原因猝死心肌存在不同程度的淋巴细胞及单核细胞浸润，提示不明原因猝死可能存在轻微心肌炎性反应。本研究扫描电镜观察，心肌组织主要呈自溶性改变，未发现其他病理性改变，其原因主要可能与检查没有在死者死亡后及时提取和送检有关。扫描电镜观察需要机体死亡后立即取材与送检，结合本研究结果及法医病理尸体检验时通常都要死后数小时才能进行，故扫描电镜观察结果可能受自溶性改变影响较大。

YNSUD发病迅猛、病情变化快、突然死亡、病死率高，多数学者认其应为心源性猝死[10]。本研究中云南地区不明原因猝死者心肌CD8+T细胞的表达，仅在散发性不明原因猝死者心肌组织中存在CD8+T细胞，提示CD8+T细胞可能与心肌损伤的发生、发展存在联系，可能与猝死的机制有关[11]。但是，这尚不能解释云南地区不明原因猝死的发生机制，尤其是YNSUD的发生还可能与心脏离子基因变异、局灶性心肌炎、不明原因毒物(小白菌)中毒等多种原因相关[12-19]，有待进一步深入研究。

参考文献：

2.2　心肌电镜扫描结果　2例YNSUD者心肌超微电镜观察得到的心肌超微结构未发现细胞间质中血管、心肌细胞的病理性改变，见图2。

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当然啦。你揭不开他的蹊跷,摸不着他的底细,他就万无一失呀。卢一平停一下,话锋突然一转。既使这样,我还有把握赢他,你信吗？

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优化PPP模式 弥补“一带一路”项目融资缺口………………………………………胡忆楠 王小莉 周怡休（11. 61）

2.1　免疫组织化学结果　29例不明原因猝死病例中有2例散发性不明原因猝死心肌CD8+T细胞表达呈阳性，8例有淋巴细胞及单核细胞浸润但无CD8+T细胞表达(其中YNSUD 1例，散发性不明原因猝死7例)但未达到心肌炎诊断标准；9例正常心肌对照组均为阴性，见表1、图1。

[8]　范彦琦,何瑞玲,覃炳军.淋巴细胞亚群对病毒性心肌炎患者生存率的预测价值[J].中国医学创新, 2017, 14(19):8-11.

金石文字刻在旌义坊坊身，明间字板正中横刻“名荐天朝”4个大字，右书：“洪熙元年孟冬朔吉抚州府知府王崧金溪县知县王勋”，左书：“湖州府推官门婿张应雷书同为辟荐增广生员徐积善立”。主楼字板刻圣旨全文：“奉天承运皇帝诏曰国家施仁养民为首江西抚州府金溪县儒学增广生员徐积善时遇饥馑能出谷四千五百石用助赈济有司以闻朕用嘉之今特赐敕奖谕劳以羊酒仍免本户杂泛差役十年尚允蹈忠厚表励风俗用副朝廷褒嘉之意钦哉故敕”，落款“洪熙元年五月十九日”。

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测绘新技术在建筑工程测量中的地位越来越重要，尤其是随着建筑工程行业的规模不断壮大其重要性越来越突出。但与此同时，传统的测绘技术因为效率、准确性和可靠性的问题很难再满足建筑工程发展的需要。在这种状况下，越来越多的新的测绘技术不断涌现对推动测绘事业的发展以及提高建筑工程测量的准确度和可靠性起到了重要作用。

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那罗寨矿原煤质量见表1。考虑到矿井原煤质量及生产成本，依据洗选加工效益最大化原则，该矿原煤按动力煤洗选加工更合适。选煤厂确定采用筛分工艺，将筛下低灰高发热量物料直接作为动力煤产品销售，筛上高灰低发热量物料进入重介质分选系统。在原煤筛分破碎楼新增一套分级系统。生产实践证明，系统稳定运行，保证了矿井劣质原煤生产，同时又降低了洗选加工成本。

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把流行音乐引入音乐校本课程，让音乐课堂“活”起来，让学生了解、认识、喜爱音乐，是音乐教师进行教学的有效手段。教师应该做一名称职合格的音乐向导，引导学生选择积极健康的流行歌曲，同时注重提升学生的文化艺术素养，培养学生在茫茫乐海中练就一双“火眼金睛”，不断提升自己的音乐审美情趣，充分享受美妙音乐带来的乐趣。