溶血对常规生化项目检测的干扰评估*

随着全自动分析仪的普及和检测试剂质量的不断提高，医学检验的分析中误差下降[1-2]，准确率明显提高。随着实验室信息系统（laboratory information system，LIS）的广泛应用，分析后的错误大大降低。目前科学工作者更注重分析前的影响因素，溶血、高浓度胆红素和高血脂是分析前影响的主要原因[3-4]。溶血时红细胞膜破裂，血红蛋白及其它细胞内容物释放至周围体液。溶血对生化检验的影响大致如下[5-6]：（1）分析物的假性增高和稀释效应；（2）血红蛋白与分析系统的化学反应；（3）血红蛋白对吸光度的影响，尤其应用415、540、570 nm的分析项目。影响因素往往同时发生，相互作用，正负影响综合使得情况复杂难解。考虑到溶血校本对实验结果的干扰，一般实验室弃之重采。然而判断溶血必须在离心后才能发现，重采的时间耽误存在着一定的风险，比如判断急性胰腺炎的指标（淀粉酶、脂肪酶等），昏迷患者的血糖检测，心肌梗死的判断指标（肌钙蛋白、肌酸激酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶等），溶栓治疗的评估项目（凝血酶原时间）等，直接关系到临床对危急患者的及时治疗。如果轻中度溶血对上述项目影响并非十分严重，而病情危急，可以考虑先行测试并注明溶血及程度，在最终结果出来前，给临床一个基本判断。故而评估溶血对项目分析的影响是有必要的，本文就溶血对二十项常用生化项目检测的干扰进行评估。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 日立7600全自动生化分析仪，长沙湘仪离心机仪器有限公司TDZ4-WS台式低速离心机，Sysmex XN-2800血球计数仪，Panasonic MDF-382E（CN）医用低温箱，检测试剂、原理见表 1。

 

表1 检测项目、试剂生产商和检测原理

  

*谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate transaminase，AST）、总蛋白（total protein，TP）、白蛋白（albumin，ALB）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）、葡萄糖（glucose，Glu）、谷氨酰转肽酶（glutamyl transpeptidase，GGT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）、淀粉酶（amylase，AMY）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cr）、尿酸（uric acid，UA）。

 

检测项目* 检测原理 检测试剂生产商K+ 间接离子选择测定法 日本日立公司Na+ 间接离子选择测定法 日本日立公司Cl- 间接离子选择测定法 日本日立公司Ca2+ 偶氮肿Ⅲ法 上海科华生物工程股份有限公司Mg2+ 甲基百里香酚蓝法 浙江夸克生物科技有限公司P3- 紫外直接法 上海科华生物工程股份有限公司ALT IFCC（UV） 上海蓝怡科技股份有限公司AST IFCC（UV） 上海蓝怡科技股份有限公司TP 双缩脲法 上海复星长征医学科学有限公司ALB 溴甲酚绿法 上海复星长征医学科学有限公司TBIL 化学氧化法 宁波瑞源生物科技有限公司Glu 氧化酶法 上海科华生物工程股份有限公司GGT IFCC（GGCN) 日本关东化学株式会ALP NPP地物-AMP缓冲液法 宁波美康生物科技股份有限公司LDH 乳酸底物法 宁波美康生物科技股份有限公司CK 磷酸肌酸底物法 宁波美康生物科技股份有限公司AMY G3-CNP法 上海申索佑福医学诊断用品有限公司BUN 脲酶-谷氨酸脱氢酶法 宁波美康生物科技股份有限公司Cr 改良Jaffe法 日本Kyowa medex Co.,Ltd UA 尿酸酶法 宁波美康生物科技股份有限公司

1.2 方法 实验志愿者（本文通信作者）实验第一天空腹，抽取两管肝素抗凝血（约5 mL/管），6管无添加剂血液（每管4～5 mL）。肝素抗凝血轻轻颠倒混匀，一支肝素抗凝管称为样本一，另一支肝素抗凝血3 000 r/min离心5 min，血浆转移至灭菌塑料离心管，称之为样本二。6管无添加剂血液，37℃水浴30 min，3 000 r/min离心5 min，血清无溶血，吸取血清合并至灭菌塑料离心管，颠倒混匀，称之为样本三，3个样本-70℃冻存。

采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析,用(±s)表示计量资料,行t检验,用%表示计数资料,行卡方检验,p<0.05,差异比较具有统计学意义。

实验第二天，取出3个样本，融解。样本一3 000 r/min离心5 min，上清转移至灭菌塑料离心管，混匀。取样本一100 μL加入到1mL样本三，编为1号测试样本，样本一用样本二进行梯度稀释（稀释梯度为 1∶2），共 7 个稀释度，每梯度吸 100 μL 加入到1 mL样本三，编号2～8号测试样本，取100 μL样本二加入到样本三，编号9号测试样本。1～4号测试样本摇匀，取100 μL检测血红蛋白，5～8号测试样本的血红蛋白浓度按稀释度获得，所余测试样本均分3样品杯进行20项生化测试。

经过数字信号和信号系统课程相关理论学习，引入MATLAB应用案例教学，能够加深对快速傅里叶变换的理解程度，特别是在快速傅里叶变换对信号频谱分析的过程中，能够加深理论的理解，将实践和理论有效的结合。例如在给求给定的高斯序列的频谱，绘制时域波形及频谱图，并简要分析其频谱的特点。高斯序列信号如式1所示。

1976年Laessig等[8]研究表明，1%红细胞破坏所致溶血标本 LDH、AST、CK、K+的结果毫无价值。Fe3+、ALT、T3的结果与不溶血标本结果有显著差异，而 P3-、TP、Na+、Cl-、Ca2+、Glu、Urea、UA、CH、ALB、TBil、TG、Cr、ACP、Mg2+不受影响。1986 年 Yücel等[9]研究表明，LDH、ACP、K+受溶血影响显示正偏离，而AST、ALT、P3-、GLU、Bil、TP、ALB 的结果溶血与不溶血无显著差异。2006年Lippi等[10]的研究表明，0.6 g/L血红蛋白影响 AST、LDH、K+、Na+的检测，而 TBil、Ca2+、Cl-、UA在20.6 g/L血红蛋白时仍不受影响。我们的结果表明0.14 g/L以上血红蛋白影响Na＋、Cl-、LDH的检测结果，0.56 g/L以上血红蛋白影响CK的检测结果，1.1 g/L以上血红蛋白影响K+、AST、TP、Cr的检测结果，2.2 g/L以上血红蛋白影响P3-、UA的检测结果，4.3 g/L以上血红蛋白影响Glu、AMY的检测结果，7.4 g/L以上血红蛋白影响Ca2+、TBIL的检测结果，ALB在13.4 g/L血红蛋白时受影响，而Mg2+、ALT、GGT、ALP、BUN 在 13.4 g/L 血红蛋白时仍不受影响。

2 结 果

偏倚主要影响临床诊断，相当于造成参考区间平移，从而出现错误诊断。以AMY为例，本文使用的检测系统参考区间为28～130 U/L，7.4 g/L溶血时本实验室偏倚度为-0.15，此时参考区间为24～111 U/L，亦即如果临床溶血标本所测血红蛋白达7.4 g/L，结果超过111 U/L即可判为高于参考区间。各实验室可以建立各自的溶血偏倚表，遇到紧急情况（如急性胰腺炎）可以报告临床检测值及校正参考区间以供参考并通知采血复查。本文数据是体外溶血试验结果，不适合体内溶血患者的病情判断，比如K+的检测，显然体内溶血体外溶血结果解释不可等同。

 

表2 不同溶血程度各生化指标的检测结果（±s）

  

分析物溶血程度（血红蛋白）0 g/L 0.14 g/L 0.28 g/L 0.56 g/L 1.1 g/L 2.2 g/L 4.3 g/L 7.4 g/L 13.4 g/L K+（mmol/L）4.27±0.044.21±0.014.25±0.024.31±0.014.41±0.014.65±0.005.09±0.015.94±0.037.66±0.02 Na+（mmol/L）144.8±1.1141.8±0.2142.1±0.7141.8±0.3141.1±0.3140.9±0.1140.2±0.3138.6±0.5136.8±0.4 Cl-（mmol/L）105.9±1.1102.9±0.2103.1±0.7102.5±0.3101.8±0.3101.9±0.2101.7±0.4101.0±0.4100.4±0.3 Ca2+（mmol/L）2.42±0.012.40±0.012.41±0.012.39±0.022.41±0.062.39±0.012.38±0.012.36±0.012.31±0.03 Mg2+（mmol/L）0.75±0.010.75±0.010.73±0.010.74±0.010.74±0.010.74±0.020.74±0.010.75±0.010.79±0.00 P3-（mmol/L）0.88±0.010.87±0.020.89±0.010.89±0.020.89±0.010.92±0.010.95±0.010.98±0.031.06±0.02 ALT（U/L） 40±1 41±1 40±0 40±1 39±1 39±0 39±1 38±1 39±1 AST（U/L） 61±0 62±0 63±1 64±1 67±1 73±1 84±1 104±1 140±0 TP（g/L） 76.1±0.9 73.4±0.9 75.4±1.4 77.3±0.5 78.8±0.8 79.2±0.3 83.1±0.7 88.7±0.7 101.0±0.6 ALB（g/L） 45.8±0.4 45.7±0.5 45.6±0.8 45.5±0.4 45.2±0.4 46.4±0.5 45.4±0.7 46.9±0.2 47.6±0.3 TBIL（μmol/L） 6.8±0.3 6.9±0.1 6.8±0.3 6.6±0.2 6.7±0.3 6.6±0.1 6.6±0.2 5.19±0.2 5.03±0.3 Glu（mmol/L） 5.45±0.01 5.44±0.01 5.41±0.05 5.34±0.04 5.49±0.04 5.34±0.05 5.28±0.03 5.19±0.02 5.03±0.10 GGT（U/L） 139±0 140±1 139±1 139±1 140±2 138±1 140±1 138±2 136±3 ALP（U/L） 78±1 78±1 78±1 77±1 78±1 75±1 74±2 72±2 71±2 LDH（U/L） 210±2 227±1 243±1 286±5 334±6 429±3 619±2 972±2 1591±14 CK（U/L） 88±1 90±1 90±1 93±1 101±2 111±1 132±1 174±1 260±3 AMY（U/L） 74±1 74±1 73±1 72±1 73±1 70±1 67±1 63±1 58±1 BUN（mmol/L） 5.21±0.03 5.28±0.08 5.31±0.04 5.17±0.03 5.31±0.07 5.17±0.05 5.37±0.18 5.21±0.09 5.36±0.05 Cr（μmol/L）91±189±189±188±185±285±181±374±159±1 UA（μmol/L） 432±2 430±3 427±3 422±4 417±3 407±5 391±2 362±3 312±2

3 讨 论

1.3 统计学处理 计量数据均以±s表示，溶血模型的数据与未溶血的结果之偏倚（bias，B）根据公式B=（Cx-Cn）/Cn求得，Cx表示欲求偏倚的检测结果，Cn表示未溶血的结果。需要说明的是偏倚指检测值与靶值的差异，本文参考文献[7]认为如果溶血模型的数据与未溶血的结果之偏倚不大于中华人民共和国卫生行业标准所附的“临床生物化学常规检验项目分析质量指标”的规定，则认为相应浓度的溶血对临床诊断无显著影响。所有计算用Excel表完成。

 

表3 不同溶血程度各生化指标的结果与不溶血结果的偏倚

  

*偏倚超过中国临床生物化学常规检验项目分析质量标准

 

溶血程度（血红蛋白）0.14 g/L 0.28 g/L 0.56 g/L 1.1 g/L 2.2 g/L 4.3 g/L 7.4 g/L 13.4 g/L K+（mmol/L）0.02-0.01-0.000.010.03*0.09*0.19*0.39*0.80*Na+（mmol/L）0.015-0.02*-0.02*-0.02*-0.03*-0.03*-0.03*-0.04*-0.06*Cl-（mmol/L）0.015-0.03*-0.03*-0.03*-0.04*-0.04*-0.04*-0.05*-0.05*Ca2+（mmol/L）0.02-0.01-0.00-0.01-0.00-0.01-0.02-0.03*-0.05*Mg2+（mmol/L）0.0550.00-0.02-0.01-0.01-0.00-0.010.000.05 P3-（mmol/L）0.03-0.020.000.010.010.04*0.08*0.11*0.20*ALT（U/L） 0.06 0.02 0.00 0.00 -0.02 -0.03 -0.03 -0.04 -0.03 AST（U/L） 0.05 0.02 0.03 0.05 0.10* 0.20* 0.38* 0.71* 1.30*TP（g/L） 0.02 -0.04* -0.01 0.02 0.03* 0.04* 0.09* 0.16* 0.33*ALB（g/L） 0.02 -0.00 -0.00 -0.01 -0.01 0.01 -0.01 0.02 0.04*TBIL（μmol/L） 0.05 0.01 0.00 -0.02 -0.02 -0.03 -0.03 -0.11* -0.23*Glu（mmol/L） 0.02 -0.00 -0.01 -0.02 0.01 -0.02 -0.03* -0.05* -0.08*GGT（U/L） 0.055 0.00 -0.00 0.00 0.00 -0.01 0.00 -0.01 -0.02 ALP（U/L） 0.10 -0.00 -0.00 -0.02 -0.01 -0.04 -0.06 -0.09 -0.09 LDH（U/L） 0.04 0.08* 0.16* 0.36* 0.59* 1.04* 1.95* 3.63* 6.58*CK（U/L） 0.055 0.02 0.03 0.06* 0.15* 0.27* 0.50* 0.98* 1.96*AMY（U/L） 0.075 0.00 -0.01 -0.02 -0.00 -0.05 -0.09* -0.15* -0.21*BUN（mmol/L） 0.03 0.01 0.02 -0.01 0.02 -0.01 0.03 0.00 0.03 Cr（μmol/L）0.055-0.02-0.02-0.03-0.06*-0.07*-0.11*-0.19*-0.35*UA（μmol/L） 0.045 -0.00 -0.01 -0.02 -0.03 -0.06* -0.09* -0.16* -0.28*分析物 目标偏倚度B

不同溶血程度各生化指标的检测结果见表2，不同溶血程度各生化指标的结果与不溶血结果的偏倚见表3。结果表明0.14 g/L以上血红蛋白影响Na＋、Cl-、LDH 的检测结果，0.56 g/L 以上血红蛋白影响CK的检测结果，1.1 g/L以上血红蛋白影响K+、AST、TP、Cr的检测结果，2.2 g/L以上血红蛋白影响P3-、UA的检测结果，4.3 g/L以上血红蛋白影响Glu、AMY的检测结果，7.4 g/L以上血红蛋白影响Ca2+、TBIL的检测结果，ALB在13.4 g/L血红蛋白时受影响，而 Mg2+、ALT、GGT、ALP、BUN 在 13.4 g/L血红蛋白时仍不受影响。

156例患者行鼻内镜电凝止血术，一周后复查发现患者血压控制尚可，鼻腔黏膜伪膜形成良好，6例患者血痂未完全脱落，清理后，未见明显活动性出血。术后随访1个月，仅3例鼻出血患者恢复期间出现患侧鼻腔少量血丝样分泌物，自行压迫后可自止，未予特殊处理，余患者均未见出血再发。

随着对溶血机制的深入理解，检测试剂质量的不断提高，检验仪器功能的改进，科学工作者会想办法降低溶血对检测的影响，但避免溶血的发生显然仍是最有效的。采血医师应充分掌握可导致溶血发生的环节并尽量避免[11-16]，比如：控制止血带扎绑时间，避免消毒液污染血液标本，选择适宜的穿刺针，顺利穿刺，避免剧烈振摇试管，运输及保存标本温度不可过高过低，离心速度不可过快，时间不可过长等。

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