犬源巴贝斯虫的流行及检测技术研究概况

巴贝斯虫是一类隶属梨形虫目、巴贝斯虫科、巴贝斯虫属(Babesia)的寄生于宿主红细胞内的单细胞血液原虫[1]。犬的巴贝斯虫病由犬源巴贝斯虫感染引起，主要病原有吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)、犬巴贝斯虫(B.canis)和韦氏巴贝斯虫(B.vogeli)等。自1895年首次报道猎犬的犬巴贝斯虫病以来，世界各地均有犬巴贝斯虫病的报道。犬类感染巴贝斯虫后，临床表现精神沉郁、嗜睡、消瘦、贫血、血红蛋白尿、黄疸等症状，急性感染可导致犬只死亡[2]。犬与人类关系密切，是人类接触的主要蜱虫宿主，对公共卫生构成威胁。本文就犬源巴贝斯虫的流行病学和检测方法等重点综述，以期为犬巴贝斯虫病的防控提供参考。

1 流行病学

1.1 病原种类

目前已报道的犬源巴贝斯虫主要有7种(表1)，根据其在红细胞中的形态、大小和分子生物学检测结果，将其分为大巴贝斯虫(2.5 μm～5.0 μm)和小巴贝斯虫(1.0 μm～2.5 μm)，前者包括犬巴贝斯虫(B.canis)、韦氏巴贝斯虫(B.vogeli)和罗氏巴贝斯虫(B.rossi)，后者包括吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)、B.conradae、小巴贝斯虫(B.microti)和犬泰勒原虫Theileira annae[3]。

1.2 传播媒介

犬源巴贝斯虫的主要传播媒介是硬蜱，不同犬源巴贝斯虫的宿主蜱也不相同(表1)。犬巴贝斯虫病的高发期与蜱虫活跃期密切相关，通常发于春夏秋三季，其中多发于夏秋蜱虫活跃期，有较强的季节性[3]。

1.3 传播途径

犬源巴贝斯虫传染犬科宿主的自然途径为蜱虫叮咬机械性传播，此外也有研究证明输血[4]，犬-犬直接传播[5]，胎盘垂直传播[6]也会成为犬源巴贝斯虫的传播途径。

1.4 生活史

犬源巴贝斯虫的生活史包括宿主感染和硬蜱传播两大部分。巴贝斯虫寄生于犬类宿主红细胞内，硬蜱通过叮咬携带病原的犬类而感染。病原进入硬蜱体内后，侵染蜱虫的肠道上皮细胞，反复进行分裂生殖，形成的合子侵入蜱卵母细胞内并保持休眠状态。由卵孵化而来的幼蜱虫中便携带了病原。合子在幼蜱体内随血液进入唾液腺，发育形成具有感染能力的子孢子。当幼蜱或成蜱叮咬健康犬时，子孢子便进入犬体内，并通过进入红细胞，随后红细胞被虫体分解[7]，即通过吸食血液完成一个生活周期。

常用的免疫学检测方法主要有间接荧光抗体技术(indirect fluorescent antibody，IFA)、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、补体结合试验(complement fixation test，CFT)、间接血凝试验(indirect heamagglutination assay，IHA)等方法。陈启军等[19]用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)鉴定出南京地区流行的吉氏巴贝斯虫虫种与日本吉氏巴贝斯虫虫种存在基因差异。巴音查汗等[20]采用ELISA和IFA检测犬吉氏巴贝斯虫病阳性率，结果一致。IFA和ELISA因其高效性而应用较为广泛，但不同巴贝斯虫种间存在交叉反应。ELISA在临床诊断中应用较少，较常用于研究和流行病学调查。同时，由于病原感染后特异性抗体出现较晚，故免疫学检测方法难以在疾病的早期对巴贝斯虫病进行诊断。

1.5 流行分布

犬巴贝斯虫病发病率与年龄无显著相关性，但不同性别、不同品种的犬发病率存在差异。姜莉莉等[14]对辽宁锦州地区86例犬巴贝斯虫病病例的分析证明发病率与年龄无明显相关性，各年龄段的犬均可感染发病。雌性犬对于罗氏巴贝斯虫的感染风险低于雄性犬和绝育犬[15]。杨其清[16]对南京地区144例犬巴贝斯虫病病例分析发现，狼犬发病率最高，京巴犬次之，杂种犬、博美犬和西施犬发病率较低。此外，幼龄犬感染犬巴贝斯虫和韦氏巴贝斯虫后临床症状较明显[17-18]。

针对单一的一维混沌伪随机序列实现简单、复杂度低、随机性差、在扩频通信中容易被反向破解的问题,本文提出用多种一维混沌映射相互控制并进行异或叠加的方法,构成一个复合混沌优选序列。对比于单一的混沌序列,这种多映射的参数互控的复合混沌优选序列不仅明显提高了序列的复杂度和随机性,而且也满足PN序列检验的要求,能够作为伪随机序列应用到扩频通信中。

表1 不同犬源巴贝斯虫的形态特征和传播媒介

Table 1 Morphological characters and vectors of Babesia spp. from dogs

种类 Species 大小Size形态Morphology宿主蜱Vectors大巴贝斯虫犬巴贝斯虫B.canis4 μm×5 μm双梨籽形,锐角相连血红扇头蜱,网纹革蜱Bigger Babesia 韦氏巴贝斯虫B.vogeli2.5 μm×4.5 μm圆形或卵圆形一种血蜱罗氏巴贝斯虫B.rossi2 μm×5 μm成对出现血红扇头蜱小巴贝斯虫 吉氏巴贝斯虫B.gibsoni0.5 μm×2.5 μm圆点状,单个出现血红扇头蜱,二棘血蜱Small Babesia 小巴贝斯虫B.microti1 μm×2.5 μm单个血红扇头蜱B.conradae0.3 μm×3 μm环形血红扇头蜱犬泰勒原虫Theileira annae1 μm×2.5 μm通常单个六角硬蜱,血红扇头蜱

1.6 感染犬只年龄和品种

犬巴贝斯虫病在世界各地均有发现和报道。不同巴贝斯虫的分布具有地域性，其中犬巴贝斯虫在亚洲、欧洲、北美洲和大洋洲均有报道；吉氏巴贝斯虫和韦氏巴贝斯虫则呈世界性分布。Hamel D等[8]对欧洲的罗马尼亚和匈牙利216只犬进行调查，发现犬巴贝斯虫在罗马尼亚宠物犬中感染率高达44.8%。Konishi K等[9]对日本的1207份犬血液样品进行血清学检测，发现吉氏巴贝斯虫感染率为10.6%。Criado-Fornelio A等[10-11]在法国的调查显示，法国韦氏巴贝斯虫感染率为0.9%～13.6%。

2 检测方法

2.1 常规血液病原学检测

目前，检测犬巴贝斯虫的方法较多，但血涂片染色镜检仍是最常用的检查方法，也是实验室和临床基础诊断方法。该方法可在显微镜下直观观察寄居于犬红细胞内的犬源巴贝斯虫的基本形态、大小，并根据形态特征初步确定病原种类。犬巴贝斯虫一般成对出现，多呈双梨籽形排列，两虫锐角端相连；韦氏巴贝斯虫多为圆形、卵圆形和梨籽形；罗氏巴贝斯虫一般成对出现。吉氏巴贝斯虫单个或多个出现，在红细胞内的形态多为圆点状，少数呈月牙状、指环状及双芽形，虫体长度小于红细胞半径[2](表1)。血涂片检查虽然简单迅速，但要求检查者对犬各种巴贝斯虫形态特征要充分了解；检出率较低且难以区别形态相近的病原。此外，该方法对隐性感染犬的病理检出率较低。

2.2 免疫学检测

一是完善组织领导体制。要将建设服务型党组织长效机制工作列为党建工作的重要内容，作为年度考核的重要指标，确保服务工作认识到位、责任到位、精力到位。要选优配强党组织书记和各委员并建立健全议事制度，党组织书记是机关党组织服务工作第一责任人，要定期组织开展服务工作研究，结合部门实际分析服务需求与重点，研究服务工作思路与载体建设，推动及时解决工作中出现的实际问题。

在我国，犬源巴贝斯虫分布广泛。犬巴贝斯虫和吉氏巴贝斯虫在江苏、河南、安徽等16个省份均有报道，韦氏巴贝斯虫则主要分布于广东、重庆、浙江、江苏等省市。据Xu D等[12]报道，江苏的犬韦氏巴贝斯虫感染率高达11.3%，吉氏巴贝斯虫感染率为1.5%。王望宝等[13]检测了我国32个不同地区的警犬血液样品，结果显示感染警犬的均为韦氏巴贝斯虫，且重庆地区感染率最高，达26.67%。

氯氮平购自Sigma(美国)，阿立哌唑购自中国食品药品检定研究院，喹硫平、齐拉西酮、氯氮平-d3、喹硫平-d8和齐拉西酮-d8购自Toronto research chemicals Inc(加拿大)，N-去甲基氯氮平、阿立哌唑-d8购自 cerilliant(美国)，色谱甲醇、乙腈购自默克公司(德国)，屈臣氏蒸馏水购自广州屈臣氏食品饮料有限公司。

2.3 分子生物学检测

随着分子生物学的发展，聚合酶链反应(PCR)和套式PCR(nested PCR)、半套式PCR(seminested PCR)、实时荧光定量PCR(real-time PCR)和核酸探针法等方法逐渐被应用到临床检测中。应用PCR技术鉴定出土耳其3例自然感染的犬巴贝斯虫病病原为韦氏巴贝斯虫亚种[21]。Birkenheuer等[22]用Nested PCR检测并区分犬巴贝斯虫、吉氏巴贝斯虫、韦氏巴贝斯虫和罗氏巴贝斯虫。Wang C等[23]用高分辨定量荧光共振能量转移PCR技术区分犬源巴贝斯虫的种类。Penzhorn B L等[24]用生物探针进行特异性检查，发现黑背豺是罗氏巴贝斯虫在非洲的自然宿主。与常规病原学检查和免疫学方法相比，核酸探针法的最大优点是可较准确地区分形态相似的病原，因此多被用于病原的分类鉴定，但该方法需要设备复杂且检出速度慢，仅适用于实验室病原深入研究，因此较少用于分子流行病学调查。PCR方法具有敏感性高、特异性强等优点，可用于早期病原诊断和分子流行病学调查，但其操作较为繁琐，不适合临床实践中现场应用。

3 结语

综上所述，前人在犬源巴贝斯虫的流行病学和病原检测与诊断等方面进行了较多的研究并取得了长足进展，但不同地域、不同品种犬的巴贝斯虫病的发生与流行的复杂性等，仍需要开展深入细致的工作；建立敏感性高、特异性强、简便快速、适于现场应用的病原检测和疾病诊断方法，对犬源巴贝斯虫的流行病学调查、疾病诊断与防控等具有重要意义。

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