端粒酶、M2型丙酮酸激酶、乳酸联合检测鉴别诊断结核性及恶性胸腔积液的价值

良、恶性胸腔积液的鉴别诊断一直是临床的一大难题。在临床上，结核性及恶性胸腔积液所占比例非常大，脱落细胞学检查是诊断特异性最强的方法，但受到肿瘤细胞数量的影响，敏感性低，仅为50%左右。现在临床开展的与肿瘤有关的一些生化、免疫检测项目均存在敏感性和特异性问题。肿瘤细胞增殖极其旺盛，为了防止异常增殖的肿瘤细胞染色体末端端粒的丢失，端粒酶（telomerase，TE）活性明显增强。另外，由于肿瘤细胞糖无氧酵解极其旺盛，因此无氧酵解的关键酶——M2型丙酮酸激酶（M2 pyruvate kinase，M2-PK）活性明显增强，无氧酵解产生的乳酸水平也会明显升高。本研究探讨了TE、M2-PK、乳酸联合检测在结核性和恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2016年5月—2017年5月大庆市第二医院结核科住院的结核性胸腔积液患者30例以及肿瘤门诊就诊的胸腔积液患者30例。所有患者均经临床诊断、实验室检查、病理学检查、胸水细胞学检查等明确诊断。胸腔积液标本均用无菌管收集，离心20 min，收集上清于-75 ℃保存。

根据相关规定，河道生态环境最小需水量为平均径流量的10%～20%，由此可得六股河可利用地表水量2.96亿m3。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 PHOMO型酶联免疫分析测定试剂盒（上海酶联生物公司）。酶标仪（郑州安图公司）。

1.2.2 测定方法 采用双抗体夹心法测定胸腔积液中的TE、M2-PK、乳酸水平。用纯化的相应抗体捕获抗体，包被微孔板，制成固相抗体，按照试剂说明书进行操作。终止显色后，用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（A）值，通过标准曲线计算标本中的TE、M2-PK、乳酸水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量数据以 ±s表示，组间比较采用t检验。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

从1998年到2005年，王世君先后参加了鸡林腾飞路、鸡西至鸡东一级公路改扩建工程第I合同段建设、正乡桥、万寿菊加工厂路、绥化至北安公路北黑段A1合同段、平阳至前卫公路等工程，施工中任测量工程师、内业负责人或试验室主任等职务。这些工程均在工程施工验收后被评为合格工程或优良工程。通过在这些工程中的积累和锤炼，他从一名道桥专业大专生逐渐成长为一名业务全面的优秀工程技术人员，业务能力及敬业精神被交通系统各级领导所认可。

2 结果

2.1 恶性胸腔积液组与结核性胸腔积液组TE、M2-PK、乳酸水平及阳性率比较

恶性胸腔积液组TE、M2-PK、乳酸水平均高于结核性胸腔积液组（P＜0.05）。见表1。

TE、M2-PK和乳酸联合检测鉴别结核性胸腔积液与恶性胸腔积液的敏感性和特异性高于3项指标单项检测。见表3。

 

表1 结核性及恶性胸腔积液组TE、M2-PK、乳酸水平的比较 （±s）

  

组别 例数 端粒酶（ng/mL） M2-PK（U/mL） 乳酸（mol/L）结核性胸腔积液组 30 0.58±0.41 7.78±4.15 2.25±1.71恶性胸腔积液组 30 2.55±1.72 29.12±3.71 9.45±3.31

 

表2 结核性胸腔积液组和恶性胸腔积液组TE、M2-PK、乳酸的定性分析 [例（%）]

  

组别 例数 TE M2-PK 乳酸阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性结核性胸腔积液组 30 2（6.7） 28（93.3） 4（13.3） 26（86.7） 5（16.7） 25（83.3）恶性胸腔积液组 30 24（80.0） 6（20.0） 23（76.7） 7（23.3） 20（66.7） 10（36.3）

2.2 TE、M2-PK和乳酸单项与联合检测的敏感性和特异性分析

30例结核性胸腔积液患者中TE阳性2例（6.7%）、M2-PK阳性4例（13.3%）、乳酸阳性5例（16.7%）。30例恶性胸腔积液患者中TE阳性24例（80.0%）、M2-PK阳性23例（76.7%）、乳酸阳性20例（66.7%）。见表2。

由此可知，实验组妊娠期高血压、产程异常、产后感染以及胎膜早破等并发症发生率低于对照组，孕期体重增长少于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。实验组引产率、剖宫产率、早产率与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

 

表3 TE、M2-PK、乳酸单项与联合检测鉴别结核性和恶性胸腔积液的敏感性和特异性

  

特异性（%）TE 24 80.0 76.7 M2-PK 23 76.7 86.7乳酸 20 66.7 83.3 TE+M2-PK+乳酸 27 90.0 96.9指标 阳性数（例）敏感性（%）

3 讨论

端粒是存在于真核细胞染色体末端的一段特殊的DNA和蛋白质的复合物，能稳定染色体，保护染色体结构基因，是细胞凋亡的信号 [1]。TE是一种特殊的DNA聚合酶，具有逆转录酶活性，能以自身的RNA为模板，在端粒的末端加上新的重复序列，使端粒延长[2]。有研究发现，癌细胞往往会产生额外的TE，TE的激活使癌细胞不断地分裂、增殖。

肿瘤细胞与人体正常细胞在能量代谢上有很大的不同。正常细胞的能量代谢特点是通过葡萄糖在线粒体内进行氧化磷酸化获得能量，只有在缺氧时才进行无氧糖酵解，而肿瘤细胞即使在氧供应充分的条件下也主要以糖酵解（Warburg效应）获得能量[3-4]，并产生大量乳酸，其原因可能与癌细胞的酶谱变化有关，特别是与糖酵解关键酶M2-PK活性增强有关[5]。

结核性及恶性胸腔积液的鉴别诊断一直是临床面临的一大难题。本研究结果表明，恶性胸腔积液患者TE、M2-PK、乳酸水平明显高于结核性胸腔积液患者（P＜0.05）；3项指标单项检测鉴别诊断结核性及恶性胸腔积液的敏感性最高为80.0%，特异性最高为86.7%，而联合检测的敏感性可达90%，特异性可达96.9%。因此，TE、M2-PK、乳酸联合检测可用于结核性胸腔积液及恶性胸腔积液的鉴别诊断。

参考文献

[1]MIZUKOSHI E，NAKAMOTO Y，MARUKAWA Y，et al. Cytotoxic T cell responses to human telomerase reverse transcriptase in patients with hepatocellular carcinoma[J]. Hepatology，2006，43（6）：1284-1294.

[2]SHARPLESS N E，DEPINHO R A. Telomeres，stem cells，senescence，and cancer[J ]. J Clin Invest，2004，113（2）：160-168.

[3]CHRISTOFK H R，VANDER HEIDEN M G，HARRIS M H，et al.The M2 splice isoform of pyruvate kinase is important for cancer metabolism and tumour growth[J].Nature，2008，452（7184）：230-233.

[4]CHEN M，DAVID C J，MANLEY J L.Concentration-dependent control of pyruvate kinase M mutually exclusive splicing by hnRNP proteins[J].Nat Struct Mol Boil，2012，19（3）：346-354.

[5]PEDERSEN P L，MATHUPALA S，REMPEL A，et al. Mitochondrial bound type Ⅱ hexokinase：a key player in the growth and survival of many cancers and an ideal prospect for therapeutic intervention[J].Biochim Biophys Acta，2002，1555（1-3）：14-20.