基于高通量测序的超级稻不同生育期土壤细菌 和古菌群落动态变化

我国水稻土分布广泛，面积约占世界水稻土面积的1/4，占我国耕地面积的25%左右[1]。水稻作为最重要的粮食作物，一直被放在优先发展地位。在水稻与土壤系统中，土壤微生物是维系此系统健康与稳定的重要成员。水稻在不同生育期内对养分的需求不同，其生长过程实质是一个土壤—微生物—水稻相互作用的过程[2-3]。水稻及其根系生长代谢活动改变土壤理化性质，土壤性质又影响水稻及其根系的生长代谢，且两者相互作用调控土壤微生物群落结构和丰度的变化[4]；土壤微生物通过分解非根际土中几丁质和肽聚糖，再经菌根真菌供给作物吸收利用，从而影响作物生长[5-6]。同时，水稻根系分泌的氧气可以扩散到根际周围[7]，促进微生物的氧化过程；水稻根系分泌的有机物可以为异养菌的繁衍提供充足的有机碳源[8-9]。水稻生长旺盛时期由于根系分泌物增加，促进微生物繁衍；同时水稻植株与微生物对养分产生竞争，促使土壤微生物增强胞外酶的分泌，加速对土壤有机质的水解作用，从而为水稻和微生物提供更多的养分和能量[10]。因此，水稻—土壤—微生物相互作用维系着水稻土环境生物生长的营养元素计量学需求[11-13]。以上研究多通过酶学等方法对水稻根系与土壤微生物关系进行探讨，而土壤胞外酶的状况与水稻土壤微生物的种类及其生长状况有着密切关系，所以对水稻土微生物群落组成状况的研究具有重要意义。吴朝晖和袁隆平[14]通过培养法对不同施氮水平根际土中微生物数量变化研究显示超级稻根际微生物数量及活性在不同施肥处理间差异显著。Zhu等[15]通过磷脂脂肪酸法对7个品种超级稻根际微生物群落结构研究表明超级稻根际土壤微生物群落结构和活性与水稻品种的遗传背景有关。张振兴等[16]通过末端限制性片段长度多态性分子生物技术对水稻分蘖期根际土壤中细菌组成研究发现水稻根系活动和稻田土壤水分状况是影响细菌生态功能的重要因素。近年来高通量测序技术，以耗时少，通量高，能够较准确全面反映土壤微生物群落分布特征等优势，逐渐被用在环境样品分析中[17]。目前对于超级稻不同生育期土壤微生物群落组成状况的研究报道较少。

我国水稻育种和栽培技术在国际上取得了很有影响力的成果。半高秆超级杂交稻是袁隆平院士2012年提出来的新概念，其特点是产量优势明显，生物量大，具有强大的根系。因此研究高产和低产生态区半高秆超级稻不同生育期土壤微生物的群落组成和丰度特征及微生物变化的主要影响因子，对阐明超级稻高产的适宜土壤环境条件，揭示其高产机制有重要科学意义。本研究以大田条件下半高秆超级杂交稻稻田土壤为研究材料，运用高通量测序技术，分析高产生态区和低产生态区高产条件下超级稻不同生育期对土壤微生物群落结构、多样性与丰度的影响，揭示半高秆超级杂交稻不同生育期土壤微生物动态变化及其影响因素，为探究超级稻高产机制提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验地概况与供试材料

试验区位于湖南水稻高产区（HLW）隆回王化永村（110°56′E，27°27′N）和低产区（LNX）宁乡（112°16′E，28°08′N），土壤类型为潮土，栽种前土壤耕作层（0～20 cm）的基本理化性状见表1。供试水稻品种为超级稻“Y两优900”，由湖南杂交水稻研究中心提供。2014年5月移栽，10月收获，水肥等栽培条件和管理措施按常规进行。其中隆回试验区于5月1日施基肥鲜鸡粪6 000 kg/hm2，复合肥750 kg/hm2；5月14日追施尿素135 kg/hm2，复合肥112.5 kg/hm2；5月22日追施尿素75 kg/hm2，氯化钾112.5 kg/hm2；7月5日追施尿素60 kg/hm2，氯化钾150 kg/hm2，分别于8月8日和16日喷施0.5%氨基酸叶面肥1 800 L/hm2。宁乡试验区于5月25施基肥过磷酸钙600 kg/hm2，氯化钾90 kg/hm2，复合肥450 kg/hm2，6月5日追施尿素120 kg/hm2，6月15日追施尿素90 kg/hm2，氯化钾150 kg/hm2，复合肥225 kg/hm2，7月20日追施尿素60 kg/hm2，氯化钾135 kg/hm2，复合肥75 kg/hm2，分别于8月8日和16日喷施0.5%氨基酸叶面肥1 800 L/hm2。

 

表1 不同产区土壤化学性质Table 1 Chemical properties of the soils in different areas

  

注：大写字母表示不同生态区显著性，P＜0.05，下同。

 

高产生态区 47.53±5.49 A 2.77±0.22 A 0.61±0.05 A 27.53±0.42 A 7.23±0.31 A低产生态区 36.07±2.65 B 1.96±0.16 B 0.50±0.07 A 25.63±2.95 A 5.50±0.17 B

1.2 样品采集

分别于超级稻移栽前（4月29日）、分蘖期（6月14日）、抽穗期（8月15日）和成熟期（9月24日），按“S”形采集表层0～20 cm土壤样品，每个重复区取10～15个点混合，混合后的样品立即分成2份，一份包入无菌锡箔纸放入液氮中速冻，带回实验室后保存在-80 ℃冰箱中用于微生物群落分析，另一份装入封口聚乙烯袋，带回风干处理，用于理化指标分析。每个生态区采集3个重复样品。

1.3 样品测定与分析

pH用酸度计法测定（土水比1∶2.5）；全氮用凯氏定氮法测定；有效磷用碳酸氢钠浸提—钼锑抗比色法测定；速效钾用乙酸铵浸提—原子吸收火焰光度法测定；有机质用重铬酸钾容量法测定[18]。

土壤微生物基因组 DNA 采用MOBIO土壤微生物提取试剂盒（PowerSoil® DNA Isolation kit）进行提取，提取的DNA采用NanoDrop分光光度计（Thermo Fisher）进行质量和浓度检测。

以提取的土壤微生物基因组DNA为模板，采用16S rDNA通用引物515F（5’-GTGCCAGCMGCC GCGGTAA-3’）和 806R（5’-GGACTACHVGGGTWTC TAAT-3’）扩增细菌和古菌的16S rRNA V4高变区，扩增体系和条件参考Caporaso等[19]的研究，然后对PCR扩增产物进行纯化，并将纯化产物送至中南大学资源加工与生物工程学院采用Illumina MiSeq测序平台进行高通量测序。

1.4 数据处理

对所得测序结果进行加工和去杂（使用软件FLSAH），去除前后引物，获得首尾整齐的高质量序列，然后用软件Mothur（http://www.mothur.org/wiki/Download_mothur）对这些序列数据进行生物信息学分析，以97%相似性划分OTU（Operational Taxonomic Unit），并采用RDP classifier贝叶斯算法对各OTU代表的序列进行分类学分析（Release 11.1, http://rdp.cme.msu.edu/），从而获得细菌和古菌组成和多样性数据。采用SPSS19.0双尾ANOVA分析，以及CANOCO4.5进行RDA冗余分析，以获取细菌和古菌群落结构与土壤理化性质的耦合关系。

2 结果与分析

2.1 土壤基本理化性质

从超级稻栽种前土壤理化性质分析看，高产区（隆回）土壤偏碱性（7.23），低产区（宁乡）土壤偏酸性（5.50）；高产区养分全量均大于低产区，其中有机质和全氮的差异均达到显著水平（P＜0.05），全磷、全钾无显著差异（P＞0.05）（表1）。土壤速效养分含量在两个产区均随着超级稻生育期的变化有下降的趋势，其中碱解氮下降最明显，速效钾在两个产区均没有显著变化，速效磷只在高产区有显著变化趋势（表2）。

2.2 超级稻不同生育期土壤细菌和古菌群落高通量文库分析

通过对微生物16S rRNA的V4区进行高通量测序，本研究中高产生态区和低产生态区24个样品共获得383 286条有效序列，其中细菌序列占91.7%～98.9%，古菌占1.1%～8.3%。以97%相似水平为划分依据，高产和低产生态区各时期获得3 243～4 154个OTU（表3），高产区水稻移栽前OTU数量显著低于生育期（P＜0.05），而低产区水稻移栽前和生育期微生物OTU数量没有显著变化（P＞0.05）；高产生态区微生物OTU数量大于低产区，在分蘖期和抽穗期达到显著水平（P＜0.05）。

[13] Loeppmann S, Blagodatskaya E, Pausch J, et al. Substrate quality affects kinetics and catalytic efficiency of exo-enzymes in rhizosphere and detritusphere[J]. Soil Biology and Biochemistry,2016, 92: 111-118.

高产区微生物多样性大于低产区，其中Chao指数分析显示在分蘖期和抽穗期达到显著水平（P＜0.05），Shannon指数显示在分蘖期、抽穗期和成熟期均达到显著水平（P＜0.05），Simpson 指数在4个时期均达显著水平（P＜0.05）。

 

表2 土壤速效养分随超级稻生育期的变化Table 2 Dynamics of soil available nutrients during the super rice cultivation stages

  

注：同列小写字母表示同一生态区不同生育期的差异性，大写字母表示不同生态区同一生育期间的差异性，P＜0.05，下同。

 

高产生态区移栽前 234.33±18.50 aA 30.77±2.77 aA 262.33±12.58 aA分蘖期 195.00±13.11 bA 19.27±11.71 bA 217.67±52.01 aA抽穗期 171.33±18.56 bcA 22.60±6.22 abA 228.33±58.38 aA成熟期 156.33±10.26 cA 17.23±9.72 bA 223.67±31.88 aA移栽前 150.00±10.69 abB 5.03±4.74 aB 47.33±10.26 aB分蘖期 149.33±27.61 abB 5.35±4.77 aB 42.67±8.02 aB抽穗期 135.67±32.39 abB 5.18±4.34 aB 42.67±8.50 aB成熟期 131.67±25.16 bB 4.94±4.91 aB 36.33±6.66 aB低产生态区

 

表3 土壤细菌和古菌群落高通量测序文库质量分析Table 3 Information of high-throughput DNA sequencing libraries of bacterial and archaeal communities in the tested soils

  

高产生态区移栽前 15 988±8 3 609±178 bA分蘖期 15 995±2 4 005±172 aA抽穗期 15 992±6 4 154±130 aA成熟期 15 972±13 4 115±246 aA低产生态区移栽前 15 971±3 3 421±191 aA分蘖期 15 965±6 3 243±336 aB抽穗期 15 941±6 3 651±192 aB成熟期 15 934±22 3 731±462 aA

2.3 超级稻不同生育期土壤细菌和古菌群落结构动态分析

本研究获得的微生物序列可分为28～32个门，73～81个纲，101～120个目，160～211个科，251～399个属。2.3.1 超级稻不同生育期细菌群落结构与丰度分析根据相对丰度在0.1%以下的为稀有微生物的划分标准[20]，将各样品中相对丰度均小于0.1%的菌门舍去。所有样品中，变形菌门（Proteobacteria，16.65%～38.92%）、酸杆菌门（Acidobacteria，12.61%～19.77%）、绿弯菌门（Chloro fl exi，4.98%～28.26%）、疣微菌门（Verrucomicrobia，2.90%～8.84%）所占比例最多，为2种生态区表层（0～20 cm）水稻土中主要细菌类群；拟杆菌门（Bacteroidetes，4.98%～9.45%）只是高产区的优势细菌类群。样品中检测到的细菌还有浮霉菌门（Planctomycetes）、厚壁菌门（Firmicutes)、放 线 菌 门（Actinobacteria）、 芽 单 胞 菌 门（Gemmatimonadetes）、 蓝 细 菌（Cyanobacteria）、装甲菌门（Armatimonadetes）、硝化螺旋菌门（Nitrospira）、绿菌门（Chlorobi）等。

优势菌群中，Chloro fl exi在低产区相对丰度显著大于高产区（P＜0.05），Bacteroidetes和Proteobacteria的相对丰度则是在高产区显著大于低产区（P＜0.05），Acidobacteria和 Verrucomicrobia的相对丰度在2种生产区差异不显著（P＞0.05）（图1和图2）。其它菌群中，Planctomycetes、Actinobacteria和Nitrospira在高产区相对丰度大于低产区，Firmicutes的相对丰度在高产区和低产区差异不显著（P＞0.05）。

 

表4 超级稻不同生育期土壤细菌和真菌群落多样性Table 4 Diversity of soil bacterial and archaeal communities in different growth stages of super hybrid rice

  

高产生态区移栽前 5 381±475 bA 488±131 aA 7.053±0.125 bA分蘖期 6 039±95 aA 583±62 aA 7.277±0.058 aA抽穗期 6 474±213 aA 548±21 aA 7.190±0.061 abA成熟期 6 166±294 aA 551±16 aA 7.167±0.006 abA低产生态区移栽前 5 058±317 aA 277±73 aB 6.867±0.115 aA分蘖期 5 039±233 aB 363±92 aB 6.937±0.101 aB抽穗期 5 439±258 aB 264±101 aB 6.897±0.110 aB成熟期 5 490±457 aA 257±56 aB 6.833±0.040 aB

Acidobacteria和Verrucomicrobia的相对丰度在2种生产区随生育期的变化呈先减小后增大的趋势，在收获期相对丰度最大，并且在低产区变化更明显（图2）。Bacteroidetes和Proteobacteria的相对丰度在高产区随超级稻生育期的变化呈现下降趋势，在低产区总体上也呈下降趋势，只在抽穗期有一定升高。Chloro fl exi的相对丰度在2种生产区均呈现先上升后降低的趋势（图2）。另外，Actinobacteria和Planctomycetes的相对丰度在2种生产区也呈现先上升后降低的趋势（图1）。

  

图1 超级稻不同生育期门分类水平上土壤细菌群落结构Fig. 1 Soil bacterial community structure at phylum level in different growth stages of super hybrid rice

 

注：0表示移栽前；1表示分蘖期；2表示抽穗期；3表示成熟期。下同。

  

图2 不同生育期门分类水平上各优势细菌群落丰度变化Fig. 2 Variation of relative abundance of dominant bacteria at phylum level in different growth stages

  

图3 不同生育期门分类水平上古菌群落组成Fig. 3 Soil archaeal community structure at phylum level in different growth stages

2.3.2 超级稻不同生育期土壤古菌群落结构与丰度分析 土壤古菌在门分类水平上的群落结构表明，高产区稻田表层土壤（0～20 cm）的主要优势菌群是广古菌门（Euryarchaeota），占该区古菌总量的70.1%～84.2%；而低产区稻田表层土壤中的优势菌群是泉古菌门（Crenarchaeota），占该区古菌总量的38.0%～62.7%，其次是广古菌门，占30.7%～56.2%（图3）。

低产区古菌数量显著大于高产区，是高产区的2.8～5.5倍（图3）；并且低产区泉古菌门丰度显著大于高产区，是高产区的7.1～23.0倍。总体上，各优势古菌门丰度在超级稻生长期呈现先减少后增加的趋势（图4）。泉古菌门（Crenarchaeota）丰度在高产区整个生育期无显著变化（P＞0.05）；在低产区，分蘖期丰度显著降低（P＜0.05），抽穗期急剧增加（P＜0.01），收获期略有下降，但不显著（P＞0.05）。广古菌门（Euryarchaeota）在高产区和低产区的变化趋势比较一致，均是分蘖期丰度下降，之后呈现增长趋势（图4）。

  

图4 门水平上优势古菌在不同生育期的动态变化Fig. 4 Dynamics of the abundance of main archaea at phylum level during different growth stages

2.4 超级稻不同生育期土壤微生物群落组成的影响因素

通过方差分析显示，超级稻耕作土壤中微生物多样性与不同生产区和不同超级稻生育时期均存在显著相关性（表5）。

 

表5 不同产区和生育期土壤微生物群落结构差异性分析（双尾方差分析）Table 5 Relationships between microbial community diversity and area or stages by two-way ANOVA

  

产区效应 ＜ 0.001 0.001 ＜ 0.001生育期效应 ＜ 0.001 0.034 ＜ 0.001交互作用 0.026 0.182 0.082

通过冗余分析法（RDA）对不同产区超级稻不同生育期土壤理化性质与微生物在门水平上的关系进行分析（图5）。基于这个模型，两个排序轴共解释了细菌和古菌菌群的94.3%的变异，其中第一排序轴解释了80.7%的变异，而第二排序轴解释了13.6%的变异。第一轴排序轴主要与速效钾、全氮、速效磷、pH、全磷、有机质、速效氮高度相关，相关系数分别为 -0.951，-0.9468，-0.942，-0.931，-0.871，-0.828和 -0.804。Bacteroidetes、Proteobacteria、 和Nitrospira与速效钾、全氮、速效磷、pH、全磷、有机质及速效氮正相关。对Bacteroidetes种群影响最大因素的是速效磷，对Proteobacteria影响最大的因素是有机质。优势菌Acidobacteria与全钾含量有一定正相关性，而受其它土壤理化性质影响较小，优势菌Verrucomicrobia与土壤理化性质相关性也较小。Crenarchaeota、Euryarchaeota、Cyanobacteria和优势菌Chloro fl exi与速效钾、全氮、速效磷、pH等理化性状呈负相关关系。

通过RDA分别对两个不同产区微生物群落影响因素分析表明，高产区微生物群落组成的主要影响因子是速效氮（0.980），其次是速效磷（0.945），然后是速效钾（0.894）。而低产区的主要影响因子是速效磷（0.896）（图6）。

  

图5 不同生育期土壤性质与细菌和古菌群落的RDA分析Fig. 5 Relationships between microbial (bacteria andarchaea) community and soil physiochemical characteristics based on redundancy analysis (RDA) in four growth stages

 

注：TK—全钾，TP—全磷，TN—全氮，AK—速效钾，AP—速 效 磷，SOM—有 机 质，AN—速 效 氮。Bac—Bacteroidetes，Gem—Gemmatimonadetes，Pro—Proteobacteria，Spi—Spirochaetes，Nit—Nitrospira，Act—Actinobacteria，Chlorob—Chlorobi，Pla—Planctomycetes，Chlorof—Chloro fl exi，Cya—Cyanobacteria，Unc—Unclassified，Cre—Crenarchaeota，Eur—Euryarchaeota，Arm—Armatimonadetes，Fir—Firmicutes， Ver—Verrucomicrobia，Aci—Acidobacteria。下同。

3 讨论

高通量测序技术以其数据产出通量高的特点在土壤微生物物种多样性方面得到广泛应用[17]，本研究利用此技术获得较好的微生物数量（图1）。多样性指数分析显示高产区微生物多样性大于低产区（表4），这可能是高产区养分含量有机质、全氮等显著高于低产区所致（表1）。秦杰等[21]研究发现，有机质含量高的NPK处理土壤细菌和古菌的多样性显著高于有机质含量低的CK和PK处理，原因可能是有机质含量低的土壤中细菌和古菌可利用的有机碳源减少。本研究也发现，超级稻生育期土壤微生物多样性大于移栽前，可能是生育期存在水稻根系分泌的有机物促进了微生物繁衍；Henriksen和Breland [22]、Meidute等[23]发现碳氮底物的可获性和种类是微生物繁殖的重要控制因素，在水稻根系比较发达的分蘖期和抽穗期，高产区与低产区微生物多样性差异已达到显著水平也间接说明可利用碳氮源对微生物多样性有影响（表1，高产区速效氮含量显著大于低产区）。Singh等[4]和张振兴等[16]研究结果显示土壤理化性质影响水稻根系的生理代谢，水稻根系的生长代谢活动改变土壤理化性状，两者相互作用共同影响微生物的群落组成及多样性。本研究方差分析显示土壤中微生物多样性与不同产区（理化性状不同）和不同生育期（根系生长代谢差异）均存在显著相关性，也印证了土壤—植物—微生物间的关系。

  

图6 高产区和低产区土壤速效养分与细菌和古菌群落的RDA分析Fig. 6 Relationships between microbial (bacteria and archaea) community and soil available nutrients in high-yield area and low-yield area based on redundancy analysis (RDA).

有研究表明，土壤养分含量不同，使土壤优势细菌各门、纲的相对丰度不同，土壤营养元素含量的变化导致土壤微生物组成及群落结构发生变化[24-26]。本研究显示优势细菌在两个产区的分布存在差异，Bacteroidetes和Proteobacteria的相对丰度在高产区显著大于低产区，而Chloro fl exi在低产区相对丰度显著大于高产区。从RDA分析可见，土壤速效磷含量是影响Bacteroidetes丰度的最主要因子，Proteobacteria也与土壤有机质和速效氮高度正相关，而Chloro fl exi与土壤养分呈负相关，这可能是这3类优势菌在两个产区形成差异的主要原因。其它常见菌群中，Planctomycetes、Actinobacteria和Nitrospira在高产区相对丰度大于低产区，可能受土壤碱解氮和有机质的影响（图6）；其中参与硝化作用的硝化螺旋菌门Nitrospira受土壤速效氮素影响最大。如已有研究报道，古菌耐受性较强，适宜在养分含量较低的环境中生长[27-29]，本研究得出类似结论，低产区古菌数量显著大于高产区，RDA分析发现古菌与土壤养分含量，特别是速效氮和有机质呈负相关关系。通过分析微生物组成与土壤养分含量关系，可以得出Bacteroidetes、Proteobacteria、Planctomycetes、Actinobacteria和 Nitrospira喜好营养丰富的土壤环境，Chloro fl exi、Crenarchaeota和Euryarchaeota在较低营养环境中生长更好。

大量研究表明土壤微生物群落组成与土壤pH密切相关[30-34]。陈孟立等[24]和Liu等[25]研究报道Proteobacteria为碱性土壤中的主要优势菌群，本研究虽显示在碱性水稻土中其丰度显著大于偏酸性水稻土，但最大影响因素是土壤有机质和速效氮含量，差异存在原因可能是前者研究对象是旱地土壤环境，本研究是水稻土环境。有研究发现Acidobacteria的数量与组成受pH的影响较大[35-37]，而本研究显示pH对Acidobacteria的影响不大，并且与土壤养分含量的关系也不大，这与袁红朝等[38]和Pankratov等[39]研究结果不一致。

[24] 陈孟立, 曾全超, 黄懿梅, 等. 黄土丘陵区退耕还林还草对土壤细菌群落结构的影响[J]. 环境科学, http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1895.X.20171027.1350.043.ht.Chen M L, Zeng Q C, Huang Y M, et al. Effects of the program of converting farmland into forest or grassland on soil bacterial community structure in loess hilly region[J].Environmental Science, http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1895.X.20171027.1350.043.ht

 

表6 超级稻不同生育期Proteobacteria和Bacteroidetes与土壤速效养分的相关性分析（n=8）Table 6 Correlation coefficients between soil available nutrient and the relative abundances of Proteobacteria and Bacteroidetes in four growth stages

  

注：**表示P＜0.01。

 

Proteobacteria 0.873** 0.954** 0.875**Bacteroidetes 0.763** 0.848** 0.846**

通过RDA分别对两个不同产区微生物群落影响因素分析表明（图6），高产区微生物群落组成的主要影响因子是速效氮，而低产区的主要影响因子是速效磷。这可能因高产区土壤碳氮含量较高（表1），速效氮和速效钾均处于极丰富状态，速效磷含量也较丰富[42]（表2），说明在土壤肥力较高水稻土中，速效氮是影响微生物群落的首要限制因子。低产区虽然速效氮处于较丰富状态，但是速效磷和速效钾处于较缺乏状态（表2），所以在养分含量较贫乏水稻土中，速效磷是影响微生物群落组成的主要因子。

4 结论

研究表明，高产区和低产区土壤微生物群落动态变化的主控因子分别是速效氮和速效磷，说明在土壤肥力较高水稻土中，速效氮是影响微生物群落的首要限制因子，而在养分含量较低水稻土中，速效磷是影响微生物群落组成的主要因子。不同产区中土壤有机质是影响Proteobacteria分布的最关键因子，土壤速效磷则是影响Bacteroidetes分布的主要因子，而Acidobacteria与土壤养分含量的关系并不大，说明优势菌群的分布对土壤性质的响应不同。超级稻土壤中微生物多样性与不同产区（理化性状不同）和不同生育期（根系生长代谢差异）均存在显著相关性，印证了土壤—植物—微生物间存在相互作用关系。这些结论为进一步探明超级稻高产的土壤环境微生物分子机理提供数据支持。

参考文献：

3) 对于气动执行机构，若从经济角度考虑不便安装防火保护罩时，可以选择在气缸上加装易熔塞。当发生火灾时由于温度急剧升高，气缸温度达到或超过易熔塞的熔点时，易熔塞熔化将气缸内的压力泄放掉，使另一侧气缸内的弹簧或储气罐内的压缩空气推动活塞将阀门自动关闭。

[2] 曾路生, 廖敏, 黄昌勇, 等. 水稻不同生育期的土壤微生物量和酶活性的变化[J]. 中国水稻科学, 2005, 19(5): 441-446.Zeng L S, Liao Min, Huang C Y, et al. Variation of soil microbial biomass and enzyme activities at different developmental stages in rice[J]. Chinese Journal of Rice Science, 2005, 19(5): 441-446.

将式(4)傅立叶展开,可得一次谐波和二次谐波的系数分别为:If=Ioη;I2f=-kαoCLIo,可见一次谐波中含有光强信息,二次谐波中则含有气体浓度信息。令二次谐波和一次谐波的比值则m值既包括了气体浓度信息,同时消除了半导体激光器初始光强的影响[1-3]。因此本文重点为求取光源通过被测气体后的二次谐波和一次谐波强度的比值,并将此比值与标准仪器测量的气体浓度进行标教比对,确定甲烷气体浓度的计算公式。

[3] Sinsabaugh R L, Manzoni S, Moorhead D L, et al. Carbon use efficiency of microbial communities: Stoichiometry, methodology and modelling[J]. Ecology Letters, 2013, 16(7): 930-939.

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胡长荣，1962年出生，江西省作协会员。曾在《诗刊》《诗神》《北京文学》《星星》《诗潮》《绿风》《飞天》《鸭绿江》《创作评谭》《星火》《江西日报》等全国100余家报刊发表小说、散文、诗歌1000余篇（首）。作品入选多种选本。

由表3可以看出，古宇庙水库在2006年、2008年、2010年、2012年的内梅罗综合污染指数较高，处于1≤Pj<1.78，水质状况在Ⅳ类标准范围内，属于中度污染，其余年份的内梅罗综合污染指数处于0.750≤Pj<1，水质状况在Ⅲ类标准范围内，属于轻污染。古宇庙水库水质综合状况在Ⅲ、Ⅳ类别，不过水质在呈良性发展，2013年以来一直处于Ⅲ类标准，水质总体趋于好转。

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集控台上和机旁控制面板上均设有车钟显示板，用于使机旁试车工作人员及时掌握主机的运行状态(车令复示功能)和与集控台操作人员的通信(辅车钟通信功能)。

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在信息技术不断发展的当今时代，教师运用现代化的教学手段开展教学，不仅能够激发学生的学习兴趣，还能够提升其学习质量，促进学生自主学习意识的形成。针对小学语文阅读教学来说，教师运用微课教学手段开展教学，能够有效地丰富学生的学习内容，吸引其注意力，提升学生的学习效率。因此，在具体的教学过程中，教师需要摆正微课教学的理念，创新自身的微课教学手段，为学生营造现代化的教学环境。

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三种多样性指数分析显示，生育期土壤中微生物多样性大于移栽前，其中低产田各时期微生物多样性差异不显著（表4），Chao指数显示高产区微生物多样性在生育期显著大于移栽前期（P＜0.05）。

（3）由于张家口地区缺乏长系列流量资料水文站，设计洪水主要采用《张家口市水文水资源手册》的经验公式和推理公式进行计算，对该地区防洪评价项目设计洪水计算具有重要指导意义。

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砂浆按监理人批准的配合比采用搅拌机拌制，浆砌石砌筑采用铺浆法，铺浆厚度3～5 cm，铺浆后砌石。砌缝内砂浆采用扁铁插捣密实，严禁先堆砌石再用砂浆灌缝。上下层砌石错缝砌筑，砌体外露表面平整美观，外露面上的砌缝预留约4 cm深的空隙，以备勾缝用处理。勾缝自上而下，用砂浆分数次填充压实抹光，勾缝后及时洒水养护。

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在门分类水平上，高产区和低产区在超级稻不同生育期微生物组成存在差异。Acidobacteria和 Verrucomicrobia的相对丰度在2种生产区随生育期的变化呈先减小后增大的趋势，其变化趋势与超级稻根系生长趋势[40-41]相反。Chloro fl exi、Actinobacteria和Planctomycetes的相对丰度在2种生产区均呈现先上升后降低的趋势，与超级稻根系生长趋势相近，其可能受水稻根系影响更大。Proteobacteria和Bacteroidetes的相对丰度呈现下降趋势，与土壤速效养分氮磷钾含量变化趋势一致，且具有极显著相关性（表6）；从相关系数大小来看，速效磷是影响此两种菌门的首要肥力因子，其次是速效钾。

12月3日，一师十二团职工医院党支部在全院开展以“遵崇宪法、学习宪法、遵守宪法、维护宪法、运用宪法”为主题的第五个“国家宪法日”暨全国第18个“12·4”全国“法制宣传日”活动，做到依法行医，诚信行医。

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玉敏沉思了一会，把事先编好的谎言暗自梳理了一遍，说许姐，你知道这事因我而起，老板逼我还钻戒。我也理解老板，他需要资金周转，能早点拿回钻戒，卖了就是钱。我被逼得无奈，从老家东挪西凑，凑够了钱买了同样的钻戒还给了店里。你当初付的钱和手续，都在我手里了。这事如果拖到现在，老板早开除我了。请许姐理解我，把钻戒还给我，我把钱和手续都退给你，咱就两清了。

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随着我国城市化发展步伐的逐步加快，人们开始源源不断地涌入城市，使得出行成为了一大难题，一系列交通运输问题随之而来。而城市地铁具有运输量大、速度快、节能、准时等诸多特点，所以近几年来已经成为了城市生活的一种主要出行工具，随着城市地铁线路的设计范围逐渐扩大，同时也拓宽了城市地铁网络系统的搭建范围，因此使得地铁换乘站的建筑设计也成为了当前地铁运输的重点内容，并且实际建筑效果也会对地铁服务质量产生重要影响，因此要致力于研究城市地铁换乘站的建筑设计。为此，本文主要对当前城市地铁换乘存在的问题进行了分析，并对城市地铁换乘站的建筑设计进行了初步探究。

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针对山洪灾害预警预报需求，美国国家水文研究中心（HRC）联合其他机构或单位，提出了基于山洪预警指标 FFG（Flash Flood Guide）的预警系统建设思路，并自2004年开始在中美洲7个国家50万km2的山丘区应用。经初步检验该系统预报准确度为65%，误报率为35%，漏报率为3%。

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国内外风电市场经过前几年的迅速发展，目前进入稳步发展阶段，但是随着风力发电机市场的发展，也出现了很多意想不到的问题。其中风力发电机作为发电机机组的主要旋转部件，其运行的稳定性直接影响着整个机组的性能。发电机运行振动大是一种常见的故障，已经成为影响风力发电机机组整体性能的重要因素。振动过大不仅影响到发电机本身部件的结构稳定性、可靠性、疲劳强度等，也会影响发电机机组主要部件的运行可靠性、稳定性及疲劳等问题[1]。

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