猪流行性腹泻的诊断与防治

猪流行性腹泻是猪的一种急性、接触性传染病，该病的首次报道在1970年的英国和比利时，此后在许多国家也报道了该病的发生，我国在1973年发生该病，1984年，我国通过荧光抗体试验和血清中和试验证实了猪流行性腹泻病。该病是由猪流行性腹泻病毒引起的急性接触性肠道传染病，此病毒容易感染哺乳仔猪，临床表现为呕吐、腹泻、脱水，死亡率高达95%，给全世界的养猪行业造成极大的经济损失。

1 流行病学

近些年，随着集约化、规模化养殖的不断发展，给猪流行性腹泻病的传播创造了十分有利的条件。猪流行性腹泻主要在春冬两个季节频发，该病容易感染新生仔猪，发病率可高达100%[1]，发病仔猪表现持续性腹泻、迅速脱水、严重导致死亡。猪流行性腹泻病的传播途径有很多，猪的粪便、尿液等排泄物均可带毒，在饲养过程中，这些带毒的排泄物可以通过饲料、饮水、生产工具和空气进行传播，同时能够感染消化道和呼吸道，不久之后便可以传染给整个猪群。

2 临床症状

各种年龄段的猪均易感染猪流行性腹泻，但是属哺乳仔猪临床症状最为明显和典型。通过感染途径的不同，该病的潜伏期也不相同。通过自然感染的潜伏期比较长大约是5～8 d，与自然感染相比较，通过口服人工感染的潜伏期相对较短，新生仔猪潜伏期是18～24 h，育肥猪是2 d。哺乳仔猪一旦感染，会表现出明显的症状：呕吐（多发生在吃食之后）、腹泻、脱水等。刚发病仔猪体温没有明显变化，表现正常或者体温稍微偏高一些。但是出现连续腹泻症状之后，患病仔猪体温明显下降。腹泻开始时，患病仔猪排出粪便呈黄色粘稠样，之后是水样便，有时粪便中混有黄白色的凝乳块，到后期严重的时候直接排水导致仔猪出现脱水。呕吐、腹泻以及脱水症状出现的同时，患病仔猪还会出现精神抑郁、萎靡不振、食欲减退的现象。症状的严重程度与患病仔猪的年龄大小有直接关系。通常情况下，年龄越小的仔猪，患病症状越严重[2]。仔猪出生后感染猪流行性腹泻病的死亡率是最高的。断奶猪、育成猪和成年猪感染此病后，也会出现厌食、精神萎靡不振、腹泻等症状，但是症状持续几天之后，逐渐消退，并且恢复正常。

3 实验室诊断

由于猪流行性腹泻与猪传染性胃肠炎有着相似的临床症状，难以辨别两种疾病。但是随着诊断技术的不断进步，猪流行性腹泻病能够被快速、准确的诊断出。猪流行性腹泻病的实验室诊断方法主要有三种，分别是病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断。实验室最为常用的检测方法是聚合酶链式反应（PCR）诊断技术和酶联免疫吸附试验（ELISA），因为随着分子生物学的不断快速发展，这两种检测方法具有快速、准确、方便、特异性强的优点，经常被用来检测猪流行性腹泻。除此之外，病原学和血清学诊断方法在很大程度上有了一定的进步和改善，这两种诊断方法具有简单、快速、方便等特点也会经常被用来进行猪流行性腹泻的实验室诊断。如下分别介绍几种实验室检测方法：

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3.1 病原学诊断方法

首先需要进行病毒的分离与鉴定，实验采集人员采集仔猪空肠或者空肠内容物，用青霉素和链霉素PBS缓冲液将所采集的空肠或者空肠内容物制作成5倍悬液。然后在低温离心机中将其离心，收集上清液。然后用滤膜将收集的上清液进行过滤，将滤液接种在体外细胞上，放置于培养箱中，将培养箱温度调至37℃，将细胞培养3～4 d，然后观察细胞是否出现细胞表面变得粗糙、颗粒增多，细胞逐渐脱落等病变。若细胞出现这些病变现象，可以初步判断为猪流行性腹泻，最后的确诊还需要结合其他实验室诊断方法进行进一步诊断。

定期进行疫苗免疫是预防阶段必不可少的环节，不同年龄段的猪免疫接种疫苗的时间和剂量也不相同，但是均可以免疫接种猪腹泻氢氧化铝灭活苗。体重为10～25 kg仔猪接种疫苗1 ml，25～50 kg仔猪接种疫苗3 ml，接种疫苗之后两周便可以产生免疫力。对于妊娠母猪在其产前30 d接种疫苗3 ml。如果猪流行性腹泻病和猪传染性胃肠炎病混合感染时，可用中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制的猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联灭活苗。免疫方法和免疫剂量：体重为25 kg以下的仔猪每头接种1 ml；25～50 kg育成猪接种剂量为2 ml/只；体重为50 kg以上的成年猪每头接种疫苗的剂量为4 ml；妊娠母猪在产前20～30 d，接种4 ml/只。

3.2 血清学诊断——酶联免疫吸附试验（ELISA法）

反转录聚合酶链式反应法（RT-PCR法）是一种模仿体内DNA复制过程的体外扩增特异DNA片段的方法。RT-PCR经过变性、退火、延伸三个过程大概需要进行30个循环将DNA片段实现扩增数万倍的结果，这种方法体现高度的准确性和灵敏性。经历的变性、退火和延伸三个过程的转换的顺利进行都是依靠温度的改变而实现，在进行试验之前，将每一过程需要的温度都可以提前输入到机器的程序中。这种方法除了有高度灵敏性之外，还具有高度特异性。因为引物与DNA模板的结合需要严格的匹配才能实现。国外研究学者已经根据现有的基因序列成功设计出一对可扩增目的片段的引物，这对引物的长度是854碱基，并且成功建立了能够诊断猪流行性腹泻病毒的RT-PCR[5]。可以用来检测细胞毒和粪便毒。目前，RT-PCR适用于实验室诊断，而不能应用于临床诊断，因为这种检测方法需要借助特殊的实验仪器在实验室内完成。

3.3 分子生物学诊断——反转录聚合酶链式反应法 （RT-PCR）

目前，酶联免疫吸附试验（ELISA法）是应用较为广泛的检测方法，此法能够直接从粪便中检查猪流行性腹泻病毒抗原。如果猪一旦出现腹泻症状，可以采集其粪便进行检查，十分方便，便捷。但是在ELISA法没有应用之前，许多国外的研究人员采用的方法是培养病毒，然后对猪流行性腹泻病毒抗体进行检测。但是这样方法有很大的缺陷，对检测造成很大的阻力。因为猪流行性腹泻病毒适应细胞的培养有一定难度，细胞存活率极低，同时制备全病毒抗原也存在一些潜在的排毒危险，所以并不能顺利的直接应用到临床实践检测中。因此，当时需要一种安全、稳定、容易准备且特异性高的诊断方法。经过多年研究，ELISA应运而生，之后在临床实践中，这样方法被广泛用来检测猪流行性腹泻病毒[4]。

“我妈去世以后，我爸爸的生活明显凄凉了很多。上次见他，衣服上的扣子都掉了几个。要是我妈活着不至于这样，很心酸。”（C2,女，36岁）

4 预防措施

4.1 加强饲养管理

当猪场已经发生猪流行性腹泻病时候，应该对猪场进行全面消毒工作，对厂区周围也要进行播撒生石灰消毒，从而切断传染源。做好猪舍的保温工作是重要环节，一般采用保温灯的效果比较好。预防机体脱水、酸中毒，抗菌消炎同时也要止泻补液。

4.2 疫苗免疫预防

除了对病毒分离培养与鉴定方法之外，还可以采用免疫电镜法，这种检测方法拥有简便、直观、快速、准确的优点，但是由于检测过程中需要使用价格昂贵的电镜设备，所以诊断费用比较高。此种方法不适合进行大规模的诊断。免疫电镜法就是可以通过电镜能够清晰的观察到病毒结构、形态以及立体结构等特征，然后可以对疾病作出判断。将患病仔猪的小肠或者病毒细胞培养物用固定液进行固定，然后用机器切成超薄的切片，在电镜下进行观察病毒的结构、形态。这种方法能够有效区别猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒，因为免疫电镜法不仅可以用已知的猪流行性腹泻病毒高免血清检测未知抗体，而且还能够借助已知的猪流行性腹泻病毒抗原检测未知抗体[3]。

4.3 紧急预防措施

预防疾病的发生，主要在于平时的饲养管理工作，所以加强饲养管理工作具有十分重要意义。平时要搞好猪舍内卫生，经常清除粪便，不给猪饲喂污染的泔水。严格按照猪场消毒制度定期对猪舍进行消毒，防止病毒侵入猪群，防止猪群感染疾病。饲养员要精心护理新生仔猪，注意保暖，给仔猪提供松软、舒适的草垫，防止其感染疾病。除此之外，坚持自繁自养原则，从根本上防止猪流行性腹泻病的感染。若需要引种，在引种之前进行病原检测，而且需要在没有疫病的猪场中选择健康种猪或者仔猪进行引入。引入后也不能直接混群饲养，需要对引入的猪群进行2～4周的隔离，经观察确诊为无病毒携带，才可以混群饲养。

二是强化对农业领域PPP项目中农地经营权的规范和保护。农地经营权是一种用益物权，类似于德国法规定的次地上权或下级地上权。在农业领域PPP项目中，农地经营权的主体由农民变为实施PPP项目的公司，这不会对农地承包权的实现构成挑战，因为农地经营权的实现受到农民转让承包权的约束。农地经营权与承包权分离后，经营权包括自主生产权、抵押入股等处分权、收益权，项目公司转让经营权的行为应受到一定的限制；农民对经营权主体享有对价请求权、监督权、到期收回权。

5 治疗方法

目前，对于猪流行性腹泻病的治疗原则是对症治疗，降低仔猪死亡率。猪场发生该病后，应该停喂饲料，多饲喂清洁饮水，并且在饮水中添加食用红糖和少量的食盐，对猪群补能量补盐，防止由于腹泻而产生脱水。同时对病猪群每天补充口服盐溶液，盐溶液配方为：NaC l3.5 g，KCl 1.55 g，NaHCO32.5 g，葡萄糖20 g，用1 000 ml水进行配制。除此之外，可以肌肉注射0.1 ml/kg的2.5%恩诺沙星，每日注射一次，或者每日两次进行肌肉注射盐酸环丙沙星注射液2.5 mg/kg[6]，以控制并发感染。

6 总结

猪流行性腹泻病已经成为造成猪出现腹泻症状的重要疾病之一，各种年龄段的猪都能够感染此病。由于没有特效药物，目前此病对养猪业带来巨大的经济损失。但是，随着诊断技术的不断发展和进步，能够快速、准确将此病检测出，也能够为养殖业降低损失。此外，本病的发生大多是因为引进病猪或者携带病原猪，因此需要加强平时的防控，才能够防患于未然，将病毒“拒之门外”，从根本上杜绝该病的发生。

为进一步加强双创教育，学院在上述三个指导教师团队的基础上，还明确全体任课教师双创教育责任，聘请社会上已经创业成功的优秀校友及其他优秀企业家，担任专业实践课和双创课的兼职教师。在对新进教师进行岗前培训时，学校将提高新进教师双创教育的意识和能力作为一项重要培训内容，达到每位专业教师都具备双创意识，从而更好地指导学生双创。

参考文献：

[1] 李红，刘成倩，于宗幸,等.猪流行性腹泻的研究进展[J].上海农业学报.2014，30（6）:150-154.

[2] 李绍青，猪流行性腹泻的鉴别诊治[J].畜牧与饲料科学，2009，30（1）：185.

[3] 洪声安.猪流行性腹泻病病毒的分离鉴定[J].中国动物保健.2012，14（5）：20-21

[4] Ren X，Suo S，Jang Y S.Development of aporcine eppidemic diatthea virus Mprutein-based ELISA for birus detection[J].Biotechnol Lett，2011，33（2）:215-220.

[5] 吴学敏，陈如敬，王隆柏，等.猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法建立及初步应用研究 [J].中国农学通报，2012，28（26）：59-62.

[6] 杨春华，王强，王毅，等.猪流行性腹泻的诊断与科学防治[J].畜牧与饲料科学，2009，30（7/8）：34-36.