IL-1β对人颞下颌关节滑液间充质干细胞生物学特性的影响

随着颞下颌关节紊乱病的发病率越来越高，对患者生活工作和整个社会经济的影响已越来越不可忽视。干细胞和再生医学的发展为疾病的早期干预及治疗修复提供了新方向。已有较多的研究报道干细胞通过免疫调节和自我增殖分化的作用在治疗和修复组织再生中发挥重要的作用［1⁃7］。Kondo等［1］通过灵长类动物膝关节内注射滑膜来源间充质干细胞发现可以有效促进受损的半月板再生，延缓关节软骨组织退化破坏。本课题组已在颞下颌关节紊乱病患者的关节滑液中成功分离培养获得滑液间充质干细胞（human synovial fluid mesen⁃chymal stem cells，hSFMSCs）［2］，其来源更加简便微创、易培养、增殖能力强，并与关节内组织具有直接关系，不仅成为理想的种子细胞来源，对其生物学特性的研究无疑可以更好地应用于颞下颌关节组织的修复和再生。hSFMSCs应用于颞下颌关节疾病的治疗中会受到关节内炎性环境、关节运动及压力变化等刺激的影响。有研究针对炎性微环境下间充质干细胞的生物学行为进行分析，发现炎性环境可以促进大量炎性因子的产生，影响干细胞的增殖、迁移和分化能力［3］，从而对治疗及修复产生不利影响。目前关于局部因素的影响多关注在骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）［4］。那么，颞下颌关节紊乱病的局部炎性微环境是否会对hSFMSCs的生物学特性产生影响呢？在正常颞下颌关节滑液中白细胞介素⁃1β（in⁃terleukin 1β，IL⁃1β）含量很少［5］，而在颞下颌关节紊乱病患者，IL⁃1β的表达与病程的进展呈正相关［6］。因而被认为是颞下颌关节炎症及关节组织损害发生发展中最重要的炎症因子之一。本课题组前期参考颞下颌关节紊乱病患者关节滑液中炎性因子的种类及浓度，模拟关节内环境的炎症进行体外刺激实验，发现IL⁃1β是介导hSFMSCs炎性因子分泌的关键因子［7］，因此，本实验拟利用IL⁃1β体外刺激以模拟颞下颌关节紊乱病关节内炎性微环境，初探其对hSFMSCs生物学特性的影响。

由表3可以看出,序列长度为L的“0”串和“1”串个数大致相等,且占整个二进制序列总游程个数的1/2L,满足Golomb伪随机假设的第二条件。

1 材料和方法

1.1 材料和试剂

胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、α⁃MEM 细胞培养基、GlutaMAX（Gibco，美国）；rhIL⁃1β（Pepro⁃Tech，美国）；结晶紫（Sigma，美国）；CCK8试剂盒（同仁化工，日本）；细胞周期检测试剂盒（联科生物有限公司）；Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒（联科生物有限公司）；总RNA提取试剂盒EastepTM TotalRNA Super Extraction Kit（Promega，美 国）；Transcriptor First Strand cDNA Synthesis kit、LightCy⁃cler® 480 SYBR Green I Master（Roche，美国）。

1.2 细胞培养及分组

选取来自中山大学附属口腔医院颞下颌关节门诊就诊的颞下颌关节紊乱病患者，患者未接受过非甾体类抗炎药物、肌松剂等或其他药物治疗，且无特异性炎症、类风湿关节炎、外伤史或肿瘤等其他全身系统性疾病患者。因诊疗需要做关节灌洗，获得颞下颌关节滑液样本进行体外培养获得hSFMSCs原代细胞，进行混合后进一步体外培养扩增。本研究已获广州中山大学附属口腔医院医学伦理委员会批准（口腔［2016］伦审第（18）号），所有参与研究的患者均已签署知情同意。

实验分为3组：对照组用完全培养基（α⁃MEM细胞培养基+10%FBS+1×GlutaMAX）常规培养（命名为0 ng/mL IL⁃1β组），IL⁃1β刺激组分别于完全培养基中加入 rhIL⁃1β 1 ng/mL（1 ng/mL IL⁃1β组）和rhIL⁃1β 10 ng/mL（10 ng/mL IL⁃1β组），根据实验不同需求分组干预。

1.3 IL⁃1β对hSFMSCs细胞克隆形成率的影响

将hSFMSCs消化离心，加入无菌PBS制成单细胞悬液并计数。按10个/cm2的浓度接种于6 cm培养皿中，按上述分为3组：0 ng/mL IL⁃1β组、1 ng/mL IL⁃1β组和10 ng/mL IL⁃1β组。培养皿每周更换1次培养基，2周后去除培养基，PBS冲洗，4%多聚甲醛室温固定15 min，PBS冲洗，0.1%结晶紫室温下染色30 min，双蒸水洗，晾干。拍照并统计，细胞克隆形成率＝克隆形成数/接种细胞数×100%。

1.4 CCK8法检测IL⁃1β对hSFMSCs细胞增殖的影响

通过连续5 d的CCK8检测发现，各浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs体外生长增殖能力相似，在接种2.5 d左右即进入指数生长期，在4.5 d开始进入平台期，各组间差异没有统计学意义（F＝0.001，P＝0.999）（见图2）。

1.5 IL⁃1β对hSFMSCs细胞周期和凋亡的影响

将hSFMSCs按500个/cm2接种于6孔板中，分为0 ng/mL IL⁃1β组、1 ng/mL IL⁃1β组及10 ng/mL IL⁃1β组共3组。每72 h换1次培养基，6 d后细胞去除培养基，胰蛋白酶消化离心，PBS冲洗，离心去上清；分别参照细胞周期和凋亡试剂盒说明，流式细胞仪检测分析。

1.6 IL⁃1β对hSFMSCs细胞多向分化能力的影响

GAPDH 引物：上游 5’⁃GACAGTCAGCCG⁃CATCTTCT⁃3’，下游 5’⁃TTAAAAGCAGCCCTGGT⁃GAC⁃3’。RUNX2引物：上游 5’⁃TCAACGATCT⁃GAGATTTGTGGG⁃3’；下游5’⁃GGGGAGGATTTGT⁃GAAGACGG⁃3’。OCN引物：上游5’⁃CCACCGAGA⁃CACCATGAGAG⁃3’；下游5’⁃TCAGCCAACTCGTCA⁃CAGTC⁃3’。PPARG2引物：上游5’⁃GCAAACCCCTATTC⁃CATGCTG⁃3’，下游5’⁃CACGGAGCTGATCCCAAAGT⁃3’。LPL引物：上游5’⁃CAAGAGTGAGTGAACAAC⁃3’；下游5’⁃AATTATGCTGAAGGACAAC⁃3’。

茜素红染色：成骨诱导培养2周、4周后，分别去除培养基，4%多聚甲醛固定10 min，PBS洗，0.1%茜素红染液37℃孵育30 min，PBS洗后倒置相差显微镜下比较各组染色情况并摄片。

油红染色：成脂诱导培养2周、4周后，分别去除培养基，4%多聚甲醛固定10 min，PBS洗，新鲜配置的3%油红染液室温染色3 min，70%酒精脱色至背景清，观察染色情况并摄片。

成骨/脂标志基因的表达比较：成骨/脂诱导培养2周、4周后，分别去除培养基，提取孔板中细胞总RNA，用Nanodrop检测RNA浓度。按逆转录试剂盒操作方法合成cDNA。采用实时荧光定量PCR检测比较各组基因：Runt相关基因2（runt⁃re⁃lated transcription factor 2，RUNX2），骨钙素（osteo⁃calcin，OCN），过氧化物酶体增殖物激活受体G2（peroxisomal proliferative receptor G2，PPARG2），脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）的表达情况。

各组间细胞分裂间期比较；G1期（F=0.773，P=0.503）、S期（F=0.636，P=0.562）差异均无统计学意义。

上转换发光材料主要是通过利用掺杂在基质材料中的少量稀土元素特殊的能级结构，在泵浦光的激发下吸收两个或多个光子，释放出一个高能量的光子，即为反斯托克斯(anti-Strokes)效应[10]。目前已知比较常见的上转换发光过程包括激发态吸收、合作上转换机制、能量转移以及光子雪崩等过程[11]。而使这四个过程成立的条件则是在Ce3+离子的基态能级与激发态能级中间必须存在一个中间能级。除此之外激发态吸收、能量转移和合作上转换还要求这个中间态的能量必须和激发光的光子能量相等。而对于Ce3+来说，并不存在这样的中间能级，而光子雪崩这种上转换发光机制并不常见，而且不会存在于单一掺杂的薄膜材料中[12]。

1.6.1 成骨/脂诱导 上述3组分别加入成骨/脂诱导液（成骨/脂诱导组），以加入完全培养基（α⁃MEM细胞培养基+10%FBS+1×GlutaMAX）而不是成骨/脂诱导液的未诱导组为对照。每72 h更换1次培养基。

1.6.2 成软骨诱导 成软骨诱导0 ng/mL IL⁃1β组、1 ng/mL IL⁃1β组和10 ng/mL IL⁃1β组SFMSCs分别加入成软骨诱导液（成软骨诱导组），450 g离心8 min后半悬开离心管盖，于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，形成软骨微球。以加入完全培养基（α⁃MEM 细胞培养基+10%FBS+1× GlutaMAX）而不是成软骨诱导液的未诱导组为对照。每72 h更换1次培养基。

随着乡村经济水平的不断提高，贷款需求呈现多样化趋势，因此，必须创新农村金融产品，坚持以市场为导向，提供适合乡村经济发展的信贷产品，根据土地、林地等，开发土地承包经营权贷款、宅基地使用权贷款与林权抵押贷款以及信贷+保险方面的贷款产品，满足农村新型经济组织多方面的金融需求，农村金融产品可以从抵押形式、担保机制、风险机制、信用增级和支付结算等方面进行创新。

夜幕低垂，当武成龙和樊虎拿着两个布套进了柳含烟和白雪的厢房，柳含烟和白雪就明白是怎么回事，因为她们被送来此时头上也戴着一个布套。白雪惊惧地道：“这里是安和庄对吗？请允许我见那位身穿宝蓝色长衫的书生。”看到武成龙和樊虎脸色骤沉她吓得眼泪都掉下来了。

在目前的情况下，我们国家在进行道路施工的过程之中，所使用的沥青都是普通沥青，普通沥青由于其自身所具有的特点，不能很好的延长道路的使用寿命。再这样的情况下，在修建道路的时候，使用改性沥青新材料，能够最大限度的延长道路的使用寿命，提升道路的安全度，满足人们对于道路不断提升的需求。

GAPDH 引物：上游 5’⁃GACAGTCAGCCG⁃CATCTTCT⁃3’，下游 5’⁃TTAAAAGCAGCCCTGGT⁃GAC⁃3’。 SOX9引物：上游 5’⁃ACACACAGCT⁃CACTCGACCTTG⁃3’；下游 5’⁃AGGGAATTCTG⁃GTTGGTCCTCT⁃3’。 COL⁃Ⅱ 引 物 ：上 游 5’⁃GGCAATAGCAGGTTCACGTACA ⁃3’；下 游 5’⁃GACTGGTAATGGCATCAAGGGA ⁃3’。 MMP13引物：上游5’⁃GACTGGTAATGGCATCAAGGGA⁃3’；下游5’⁃CACCGGCAAAAGCCACTTTA⁃3’。

1.7 统计学分析

所有数据以均数±标准差表示，采用SPSS 15.0统计软件分析，不同组间比较采用完全随机设计资料的方差分析，检验水平α＝0.05。

2 结果

2.1 IL⁃1β对hSFMSCs细胞克隆形成率的影响

2.5.2 成脂分化 hSFMSCs在成脂诱导14 d时油红O染色倒置显微镜下可见散在的红色脂滴形成，在28 d时即可见较多的脂滴团形成，但IL⁃1β刺激组油红O染色中脂滴形成较0 ng/mL IL⁃1β组数目明显减少（图5）。说明IL⁃1β刺激下能明显影响hSFMSCs的成脂分化能力。

  

图1 hSFMSCs细胞克隆形成实验结晶紫染色大体观察Figure 1 Gross observation of colony formation of hSFMSCs by crystal violet staining

2.2 IL⁃1β对hSFMSCs细胞增殖的影响

将hSFMSCs按103个/孔接种于96孔板中，共6块板。每块板分为3组：分别为0 ng/mL IL⁃1β组、1 ng/mL IL⁃1β组及10 ng/mL IL⁃1β组，每组5个复孔。每72 h换1次培养基。接种后每天取1块板在同一时间点去除原培养基，加入100 μL完全培养基及 10 μL CCK8（cell counting kit⁃8）溶液，混匀后继续在细胞培养箱中培养1.5 h后，用酶标仪检测450 nm吸光度值，并绘制生长曲线。

振动声调制的频率选择对试验结果有较大影响，合理选择高频超声与低频振动频率可以获得最佳调制效应，但因试样制作误差、缺陷改变固有频率等因素，各试样的固有频率各不相同。若使用相同频率激励无法使所有试样产生最大调制效应，不利于试验结果分析。首先对试样固有频率进行分析，使用安捷伦33220A信号发生器产生扫频信号加载到叠堆压电陶瓷，扫频范围为1～1500Hz，扫频时间为2s，激励电压为75Vpp，采样频率为20kHz，采样长度为50kpts，使用粘接在试样上的压电晶片接收响应信号，对数据进行处理即可获得其频响曲线。

2.3 IL⁃1β对hSFMSCs细胞周期的影响

0 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs G1期细胞比率为（91.63±1.14）%，S期细胞比率为（8.05±1.70）%。

1 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs细胞 G1期比率为（93.00±5.21）%，S期比率为（6.44±4.99）%。

10 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs细胞G1期比率为（94.93±1.89）%，S期比率为（5.16±1.33）%。

免疫组化半定量:光学显微镜下组织细胞膜或细胞浆中有棕黄色颗粒沉积为阳性细胞。每张切片随机选取10个高倍(×400)视野，按照每张切片的阳性细胞的比例以及着色的深浅进行半定量的分析。阳性细胞着色比例A：<5%，0 分；5%～25%，1 分；26%～50%，2 分；>50%，3 分；着色强度B：无着色或背景染色，0 分；浅棕黄色，1 分；棕黄色，2 分；棕褐色，3 分。积分=A×B，积分0 分记(﹣)；积分1～3 分记(+)；积分4～6 分记(++)；积分7～9 分记(+++)，两位病理科专职人员检测结果的平均值作为最终结果记录。

应用2⁃ΔΔCT计算基因的相对表达水平，其中以甘油醛⁃3⁃磷酸脱氢酶（glyceraldehyde⁃3⁃phosphate dehydrogenase，GAPDH）作为内参基因，并计算扩增效率。ΔΔCT的计算公式如下：ΔΔCT＝（Cttarget gene⁃CtGAPDH）sample⁃（Cttarget gene⁃CtGAPDH）control。

2.4 IL⁃1β对hSFMSCs细胞凋亡的影响

  

图2 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs细胞生长曲线Figure 2 Influence of IL⁃1β on the cell growth curve of hSFMSCs

0 ng/mL IL⁃1β组 hSFMSCs凋亡率为（1.68±1.99）%，1 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs凋亡率为（2.81± 2.58）%，10 ng/mL IL⁃1β组 hSFMSCs凋亡率为（2.15±2.03）%。各组间差异无统计学意义（F＝0.196，P＝0.827）。

2.5 IL⁃1β对hSFMSCs细胞多向分化能力的影响

2.5.1 成骨分化 hSFMSCs成骨诱导后呈密集复层生长，各组在2周时茜素红染色即均有散在红色的矿化结节形成，但在IL⁃1β刺激组中染色较0 ng/mL IL⁃1β组浅且面积较小。4周时茜素红染色即可见视野内较密集广泛的红色矿化结节形成，IL⁃1β刺激组矿化染色也较14d时明显增多，但与0 ng/mL IL⁃1β组相比矿化结节数量仍较少（图3）。

软骨相关基因的表达比较：软骨诱导培养4周后，分别去除培养基，液氮研磨，提取软骨微球总RNA，采用实时荧光定量PCR检测比较Sry基因相关 HMG box⁃9（sexdeter mining region Y related high⁃mobility group box⁃9，SOX9）、Ⅱ型胶原（collagen Ⅱ，COL⁃Ⅱ）、基质金属蛋白酶13（matrix metalloprotein⁃ase 13，MMP13）的表达情况。

  

图3 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs成骨分化茜素红染色Figure 3 Influence of IL⁃1β on alizarin red staining in osteogenic differentiation of hSFMSCs

为了进一步证实IL⁃1β对hSFMSCs成骨分化能力的影响，对各组RUNX2和OCN两种基因的mRNA表达进行实时荧光PCR检测，发现成骨诱导组其mRNA表达较未诱导组明显升高，但在成骨诱导中，与同期0 ng/mL IL⁃1β组之间比较，随着IL⁃1β刺激浓度的增加RUNX2和OCN基因的mRNA表达均显著降低（P ＜0.05）（图4）。

细胞克隆形成率可反映接种细胞后的贴壁细胞及其增殖能力。hSFMSCs通过极低密度接板培养2周，镜下可见明显的呈旋涡状细胞密集成团。通过结晶紫染色在培养皿中可见多个散在的直径约1.5 mm的紫色团块，0 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs克隆形成率为（25.50±2.52）%，1 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs克隆形成率为（27.47±2.60）%，10 ng/mL IL⁃1β组hSFMSCs克隆形成率为（25.47±2.15）%，3组之间比较差异无统计学意义（F＝0.665，P＝0.548）（图1）。

实时荧光定量PCR比较显示，0 ng/mL IL⁃1β组成脂诱导2周、4周成脂分化的相关基因PPARG2和LPL mRNA表达明显较未诱导组升高（P＜0.05）。

  

图4 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs成骨分化的基因表达Figure 4 Influence of IL⁃1β on expression of genes related to osteogenic differentiation of hSFMSCs

  

图5 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs成脂分化 油红OFigure 5 Inf l uence of IL⁃1β on oil red O staining in adipogenic differentiation of hSFMSCs

在成脂诱导组中，与同期0 ng/mL IL⁃1β组之间比较，IL⁃1β刺激组成脂分化的相关基因PPARG2和LPL表达明显降低（P ＜0.05）（图6）。

2.5.3 成软骨分化 hSFMSCs经各浓度IL⁃1β介导下成软骨诱导后均形成软骨微球（图7），检测各组软骨微球的基因SOX9、COL⁃Ⅱ和MMP13的mRNA表达情况，结果显示SOX9和COL⁃Ⅱ基因的mRNA表达随着IL⁃1β的刺激而降低，而MMP13基因在IL⁃1β刺激下则mRNA表达明显增加，差异有统计学意义（P ＜0.05）（图8）。

研究证实翻转课堂已经成为一种重要医学理论教学模式。翻转课堂译自“flipped classroom”或“inverted classroom”，也可译为“颠倒课堂”，是指重新调整课堂内外的时间，将学习的决定权从教师转移给学生。在这种教学模式下，课堂内的宝贵时间，学生能够更专注于主动的基于项目的学习，共同研究解决所学习内容中的重点和难点问题，从而获得更深层次的理解[2-4]。教师不再占用课堂的时间来讲授信息，这些信息需要学生在课后完成自主学习，他们可以看视频讲座、听播客、阅读功能增强的电子书，还能在网络上与别的同学讨论，能在任何时候去查阅需要的材料。教师也能有更多的时间与每个人交流[5-7]。

  

图6 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs成脂分化的基因表达Figure 6 Influence of IL⁃1β on expression of genes related to adipogenic differentiation of hSFMSCs

  

图7 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs成软骨诱导 体式显微镜Figure 7 Inf l uence of IL⁃1β on chondrogenic induction of hSFMSCs

3 讨论

3.1 骨关节炎与间充质干细胞

  

图8 不同浓度IL⁃1β刺激下hSFMSCs成软骨分化的基因表达Figure 8 Influence of IL⁃1β on expression of genes related to chondrogenic differentiation of hSFMSCs

最早有研究发现在骨关节炎患者关节软骨分离培养出的间充质干细胞明显比健康人的多，并能诱导分化软骨微球。随后，逐渐有研究报道在患有骨关节炎疾病和关节内损伤的人膝关节滑液中发现干细胞数量增多［8⁃9］。骨关节炎患者关节内滑液中的间充质干细胞数量可达到类风湿性关节炎患者的20倍，而且其数量与关节内滑膜的炎症程度无关，推测可能是炎症或损伤时促进细胞化学因子的表达，促使干细胞迁移募集；这为应用关节内hSFMSCs进行修复的设想提供了可能。但Murphy等［10］发现从骨关节炎患者的膝关节手术中取得的软骨分离培养获得的间充质干细胞成脂及软骨分化能力减弱，成骨能力与正常个体相似。这与临床中见到部分骨关节病例中的骨密度增加而软骨缺损的现象相符。Marinova⁃Mutafchieva等［11］发现肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）转基因小鼠动物模型中急性炎症发生前关节腔内BMSCs明显增多，而抗TNF治疗或者TNF受体p55/p75基因敲除小鼠中BMSCs的局部迁移和关节炎症均受到抑制，间充质干细胞因而被认为在关节疾病的致病机制中扮演重要的角色。Mohan⁃ty等［12］也在模拟类风湿性关节炎小鼠动物模型中发现在关节内炎症发生时炎症局部的BMSCs细胞数目明显增多，而随着炎症的发展BMSCs成骨分化能力减弱，认为这可能是导致关节疾病时骨质流失的原因。可见关节内环境的改变影响间充质干细胞生物学特性，使其应用局部修复治疗面临的问题更加复杂。

3.2 炎性细胞因子与间充质干细胞

间充质干细胞可以通过免疫调节作用中和一些炎症性病理改变［13⁃14］。而在优化组织再生修复的进一步研究中，Zhang等［15］比较炎性环境下BM⁃SCs和牙周膜间充质干细胞的成骨分化能力发现TNF⁃α可能通过NF⁃κB信号通路明显减弱牙周膜间充质干细胞的成骨分化能力，而对BMSCs虽然抑制其增殖能力，上调NF⁃κB信号通路蛋白的表达，但成骨能力仍增强。但Huang等［16］认为IL⁃1β可通过激活BMSCs microRNA⁃496的表达，影响Wnt信号通路抑制其成骨作用。Okada等［17］也分别比较正常和炎性因子刺激下BMSCs的成脂分化能力，发现炎性因子如IL⁃1β和肿瘤坏死因子⁃ɑ可以抑制干细胞的脂肪形成从而可能诱发骨水肿，而在类风湿性关节炎的发病机制中起作用。Skals⁃ka等［18］比较类风湿关节炎和骨关节炎患者关节内脂肪组织来源间充质干细胞，发现在TNF刺激下其软骨诱导分化的相关基因SOX9、COL⁃Ⅱ、蛋白聚糖的表达和糖胺聚糖沉积均明显减少，而体外IL⁃1β作用下BMSCs成软骨能力也下降［19］。因此，不同来源的间充质干细胞在不同的局部微环境或疾病状态下发挥免疫调节的能力和反应特异性均不同［20］，目前对在颞下颌关节紊乱病关节腔内存在的hSFMSCs其生物学特性是否改变，hSFMSCs应用于病理炎性微环境的治疗和修复效果是否受到影响尚未明了。

IL⁃1β不仅主要分布在颞下颌关节骨关节病的滑膜衬里细胞层，同时也在关节盘及关节滑液中高表达。IL⁃1β还是连接关节炎症和血管再生的关键分子，可以促进颞下颌关节盘组织细胞分泌血管生成因子，刺激新生血管组织中基质金属蛋白酶基因过度表达，从而加速关节盘和髁突软骨的降解［21］。所以本实验中选择低浓度1 ng/mL、高浓度10 ng/mL IL⁃1β作为刺激因素模拟颞下颌关节紊乱病炎性微环境尝试分析hSFMSCs生物学特性的变化。结果显示IL⁃1β对hSFMSCs的生长增殖能力无明显影响，而hSFMSCs在各浓度IL⁃1β介导下的多向分化诱导能力较正常诱导时减弱，其机制有待进一步研究。基于间充质干细胞具有的细胞因子分泌功能，本课题组前期对hSFMSCs培养基中细胞因子分泌情况进行初探，发现hSFMSCs可通过NF⁃κB通路分泌炎性因子白细胞介素⁃6和白细胞介素⁃8，且与IL⁃1β的刺激密切相关［7］。白细胞介素⁃6和白细胞介素⁃8的分泌不仅将促进合成炎性介质和基质蛋白酶，加重关节内滑膜炎症、关节软骨和骨组织的破坏，也可能是阻碍hSFMSCs分化为功能细胞进行组织修复的重要因素［7］。这似乎为颞下颌关节紊乱病患者关节腔内存在的间充质干细胞为什么进行自我修复的能力有限提供佐证，也使以此为切入点研究颞下颌关节紊乱病的致病机制提供了一个平台。但其在关节内多炎性因子及压力复杂的微环境下具体生物学特性的影响，是否与其他炎症反应通路存在交互影响有待进一步深入研究。控制炎性微环境下hSFMSCs的炎性分泌，加强hSFMSCs的定向分化组织修复能力，可能成为研究颞下颌关节紊乱病病理机制和干预治疗的新靶点。

以糖尿病肾病患者作为分析对象，其各项检测结果的阳性率见表2所示，可见患者α1-MG、β2-MG、TRF、mAlb和Cys-C阳性率分别为43.68%、40.23%、77.01%、82.76%和57.47%。

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