ER、AR在前列腺穿刺活检组织中的表达及临床病理意义

前列腺癌(prostate cancer, PCa)是一种好发于中老年男性的恶性肿瘤。经直肠前列腺B超引导下10～12针前列腺系统活检，是早期诊断金标准[1]，然而穿刺诊断阳性率仅为40%[2]。国际泌尿病理协会推荐联合标记进行诊断[3]，但由于穿刺标本的局限性、前列腺癌组织学形态的多样性及免疫组化染色的敏感性等问题，使诊断分级分组较低的前列腺癌仍然具有挑战性。前列腺和乳腺均被认为属性激素依赖性器官，雌激素受体(estrogen receptor, ER)、雄激素受体(androgen receptor, AR)在PCa及乳腺癌中的作用被广泛研究[4-5]。但关于ER在PCa发生发展、浸润转移中作用的报道有限，且ER、AR联合预测预后、指导治疗的价值尚未被常规应用。

我们拟采用免疫组化二步法对前列腺穿刺诊断PCa患者及良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)的组织学标本中ER、AR的表达进行分析，为如何提高PCa穿刺病理诊断阳性率提供参考，为ER、AR在PCa发展中的可能作用提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014-01—2016-12间在惠州市中心人民医院行前列腺12针系统穿刺活检病例，观察组为144例PCa患者，年龄53～91岁，中位年龄74岁。对照组为60例前列腺增生(BPH)患者，年龄45～87岁，中位年龄70岁。观察组均经临床病理学检查证实为前列腺腺泡细胞癌，符合2014年国际泌尿病理协会(ISUP)修订的前列腺癌诊断标准[6]。均为初次诊断，穿刺前未经任何治疗。每例患者仅选取与综合评分相一致的、肿瘤容量(瘤荷)最高的其中一条组织进行实验研究。其中1组24例，2组21例，3组38例，4组33例，5组28例。

1.2 前列腺癌分级分组系统及形态学标准[6] 1组(3+3=6)：为完全单个的相互分离的腺腔轮廓完整的小腺体；2组(3+4=7)：主要为腺腔结构完整的腺体；3组(4+3=7)：主要为筛状腺体、融合腺体、腺腔结构不完整的腺体；4组(4+4=8/3+5=8/5+3=8)：完全为筛状腺体、融合腺体、腺腔结构不完整的腺体；5组(4+5=9/5+4=9/5+5=10)：无腺体结构，可见肿瘤性凝固性坏死。

1.2 方法

在编制财务预算过程中，要确保其口径、范畴等要素和财务决算报表间的统一性，需依照“从上至下、分级式制定、上级审核”的流程进行工作，相关人员要理性的结合企业上一年度的预算执行状况，以完善预算编制相关指标的合理性与可执行性。并确保财务预算的各种报表与数据间建设良好的联动关系，相互牵制与促进，最后构建一个相对完善的预算管理体系。

2.1 BPH和PCa患者ER、AR、34βE12及P63的表达 ER、AR在BPH中的阳性表达率和在PCa患者中的阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；34βE12、P63在BPH中的阳性表达率分别为96.67%和91.67%，34βE12、P63在PCa患者呈阴性表达，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

雄激素阻断治疗(androgen depression treatment, ADT)被作为复发或转移性PCa的标准治疗方案，虽然可使PCa的瘤荷减少超过40%[10]，但几乎所有病例都会继续进展为非激素依赖性难治性PCa。 Arndt Katzenwadel等[11]认为，经ADT后PCa细胞为了应对雄激素阻断，发生了一系列涉及AR、生长因子及凋亡的分子事件，最终通过多种机制促进肿瘤细胞生长、迁移及侵袭而导致治疗失败。本文结果显示，AR在PCa患者中的阳性率仅为53.47%，约半数患者在疾病诊断时已经不表达AR，ADT是作为标准治疗方案还是将治疗引向死路，尚需更多研究证实。

我国PCa穿刺活检组织诊断阳性率不高 [7]，穿刺诊断的肿瘤负荷、Gleason评分及临床分期往往被低估[8]。本研究方向在于如何提高穿刺活检诊断的准确性及阳性率。穿刺诊断难点之一是鉴别非典型小腺体增生(atypical small acinus hyperplasia, ASAP)与3分PCa，虽然P504S、c-myc、34βE12及P63可进行鉴别诊断[9]，但P504S、c-myc特异性及敏感性还有待提高，34βE12表达缺失可发生于ASAP。我们发现ER在2组PCa患者中呈高表达，AR在1组PCa患者中呈高表达。提示联合ER、AR可作为分级分组较低的PCa穿刺诊断参考指标。另外，PCa和膀胱尿路上皮癌常同时发生难以鉴别，此时ER的表达则具有重要鉴别意义，因为后者对雌激素无反应。我们发现，144例PCa患者中约40%表达ER。ER阳性，可鉴别膀胱尿路上皮癌，为PCa病理诊断的确立提供支持证据，进而提高诊断准确性。

2 结果

1.2.2 检测方法 采用免疫组化二步法对穿刺诊断PCa和BPH组织的ER、AR、34βE12及P63的表达情况进行检测。操作严格按照试剂盒说明书进行。所有病例标本均经10%中性甲醛固定液固定、取材，常规石蜡包埋，连续切片，厚度3～4 μm。切片脱蜡水化。3% H2O2水溶液处理10 min。PBS洗5 min。加一抗4 ℃孵育过夜。将PBS代替一抗作为阴性对照。

 

表1 BPH和PCa组织中ER、AR、34βE12及 P63的表达 [n(%)]

  

组别病例数ER阳性AR阳性34βE12阳性P63阳性BPH组6021(35.00)41(68.33)58(96.67)55(91.67)PCa组14458(40.28)77(53.47)0(0)0(0)χ2值0.4973.836189.777176.100P值0.4800.0510.0000.000

2.2 ER、AR在不同分级分组PCa患者中的表达 在144例PCa患者分级分组中，ER在2组PCa患者中呈高表达，差异有统计学意义(P<0.05)；AR在1组PCa患者中呈高表达，差异有统计学意义(P<0.05)。ER、AR在BPH与3、4、5组PCa患者中的表达，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

3.1.3 医学图书馆的信息基础设施要完善。信息基础设施是决定一个学校图书馆的基础能力和存储能力。目前，学校的存储能力还停留在结构化数据中，远远不能满足现在网络信息产生的数据，大数据时代可以智能分析计算能力，能高效的获取、存储和分析TB、PB级别的数据。这对医学图书馆的软硬件设施提出了巨大的挑战。

 

表2 不同分级分组PCa组织中ER、AR、34βE12 及P63的表达 [n(%)]

  

组别病例数ER阳性AR阳性34βE12阳性P63阳性BPH组6021(35.00)41(68.33)58(96.67)55(91.67)PCa1组2414(58.33)16(66.67)**0(0)0(0)PCa2组2113(61.90)*11(52.38)0(0)0(0)PCa3组3810(26.31)20(52.63)0(0)0(0)PCa4组3311(33.33)17(51.51)0(0)0(0)PCa5组2810(35.71)13(46.42)0(0)0(0)

注：*P<0.05,**P<0.05

趁着雪还没有下下来，驮子驮着三轮车，载着常爱兰和周小羽离开了我们岭北镇。那天有很多人送他们，常爱兰是笑着离开的，她说，有空你们到我们江西来玩，有空一定要来。

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1.2.1 仪器及试剂 ER、AR、34βE12及P63抗体均购自福州迈新生物技术开发有限公司；HM340E石蜡切片机购自Thermo公司；全自动免疫组化机购自瑞士Roche公司。

 

表3 前列腺癌患者ER与AR表达的关系

  

AR+-r值P值ER+45130.3970.000*-3254

注：*P<0.01

3 讨论

1.3 统计学分析 数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析，计数资料采用百分数表示，数据比较采用χ2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2.3 PCa患者ER与AR表达的关系 在144例PCa患者中，ER阳性58例，其中AR阳性45例；ER阴性86例，其中AR阴性54例。ER表达与AR表达呈正相关(P<0.01)。

1.2.3 结果判定 由3名及以上病理科副主任医师采用双盲法阅片。ER、AR以细胞核出现棕黄色为阳性。高倍镜下取4个不同视野，各计数200个细胞的阳性细胞数，取平均值计算每个标本的阳性表达率。ER、AR以肿瘤细胞染色阳性百分数>20%为阳性，<20%为阴性。34βE12及P63在腺体周围基底细胞中表达，34βE12表达定位于胞浆，P63表达定位于胞核。

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雄激素在PCa的发生发展中起重要作用，可改变其生长速率。雌激素由雄激素合成，雄激素是雌激素的前体，加之ER的最佳配体E2由雌激素或睾酮合成，雄激素对于雌激素及其受体来说都非常重要。本文结果显示ER、AR在BPH及PCa患者中表达阳性率均无显著差异，与Tobias Zellweger 等[12]报道的结果一致。分析原因，AR作为核受体，是前列腺腺上皮细胞生长所必须的，正常腺上皮呈强阳性表达，然而前列腺组织学形态在60岁以后表现出腺上皮增生、萎缩、萎缩后增生等异质性，使AR表达不一；雄激素状态的改变同时也影响了ER的表达。

ER包括ERα及ERβ，两者具有不一样的生物学功能。ERβ可与ERα、AR相互作用或通过抑制后两者的功能，直接或间接抑制细胞生长[13]。Georgios Megas[14]等认为ERα及ERβ与晚期PCa患者的疾病进展和复发相关，ERα阳性患者预后较差，ERβ阳性患者预后较好。Tobias Zellweger等[12]则认为ERβ和磷酸化AR的表达相关，均提示不良的临床预后。我们发现ER、AR在PCa中表达呈正相关，且ER及AR更倾向于表达在分级分组较低的患者，但ERα、ERβ、AR三者之间关系，有待进一步研究证实。

目前ER、AR尚未达到临床应用的目标，因为研究结果不尽一致。我们期待在不久的将来，ER、AR诊断与治疗的联合将会在PCa的诊疗中扮演重要角色。

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