4种杀菌剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定

柑橘溃疡病是由地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种（Xanthomonas axonopodis pv.citri）引起的一种细菌性病害，主要为害柑橘的叶片、枝梢和果实，发病部位产生溃疡斑；柑橘树染病后可导致落叶落果，影响树势和产量；果实染病后品质变劣，商品价值降低且不耐贮藏[1]。已报道防治柑橘溃疡病的杀菌剂主要有松脂酸铜、20%噻菌铜SC、3%中生菌素WP、77%多宁WP和72%农用硫酸链霉素等[2-4]，防治效果受天气因素制约。据国内相关报道，27.12%碱式硫酸铜SC对水稻稻曲病有较好的防效，30%络氨铜AS对西瓜枯萎病有较好的防效，0.3%四霉素AS对杨树溃疡病具有很好的防治效果[5-9]。本文利用紫外分光光度计，测定27.12%碱式硫酸铜SC等4种杀菌剂对柑橘溃疡病菌的EC50，以期了解这4种杀菌剂对柑橘溃疡病菌的毒力作用，为筛选田间防治柑橘溃疡病药剂提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 供试杀菌剂

27.12%碱式硫酸铜（铜高尚）SC和37.5%氢氧化铜（冠菌乐）SC，澳大利亚纽发姆有限公司生产；30%络氨铜AS，山西科星农药液肥有限公司生产；0.3%四霉素AS，辽宁微科生物工程有限公司生产。

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1.2 供试培养基

牛肉膏蛋白胨液体培养基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化钠5 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.0～7.2，121℃，高压蒸汽灭菌30 min；牛肉膏蛋白胨固体培养基：在牛肉膏蛋白胨液体培养基加入琼脂18 g。

1.3 供试菌株

柑橘溃疡病菌由本文作者从广西大学农学院植物标本园采集柑橘溃疡病病叶，进行分离并纯化，经柯赫氏法则验证其致病性后保存至-20℃冰箱备用。

1.4 毒力测定及数据处理的方法

供试杀菌剂对柑橘溃疡病菌的毒力回归方程见表2，由表2可知，4种杀菌剂浓度的对数值与抑制率的机率值的相关系数均在0.95以上，27.12%碱式硫酸铜SC、37.5%氢氧化铜SC、30%络氨铜AS和0.3%四霉素AS对柑橘溃疡病菌的EC50值分别为572.33µg/mL、819.16µg/mL、1442.55µg/mL和0.47µg/mL。

抑制率（%）=［（对照菌液OD值—处理菌液OD值）/对照菌液OD值］×100

杀菌剂对溃疡病菌抑制率的计算公式为：

第二，语言文字工作模式研究，有利于处理好规范化成果的纵向、横向应用问题。纵向是语言本体的应用，比如对内、对外汉语教学中的应用；横向是其他领域的应用，主要包括生活性服务、生产性服务领域的应用。有利于科学认识语言文字工作在国家整体发展中的定位。

根据菌抑制率与其所对应的杀菌剂浓度，用DPS7.05统计软件中的生物测定方法计算杀菌剂对柑橘溃疡病菌的抑制有效中浓度，即为EC50。

根据药剂浓度和抑制率的相关现象，先找出抑制率约为20%和90%所对应的两个药剂浓度，算出公比，在抑制率为20%～90%之间设置5个不同剂量的等比浓度做毒力测定（具体浓度设置已在表1中列出）。

供试杀菌剂27.12%碱式硫酸铜SC、37.5%氢氧化铜SC、30%络氨铜AS和0.3%四霉素AS对柑橘溃疡病菌均有一定的抑制作用，结果见表1。

2 结果与分析

2.1 供试杀菌剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定

他驾着她的车赶往附近的医院。这里是盘龙湖别墅区，是他的住所所在地。车尖利地发出一声叹息，驶离了他们最初欢愉之地，像一次逃遁。

 

表1 4种杀菌剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定

  

杀菌剂27.12%碱式硫酸铜SC 37.5%氢氧化铜SC 30%络氨铜AS 0.3%四霉素AS空白对照有效浓度（µg/mL）713.68 648.80 589.82 536.20 487.46 1 250.00 1 041.67 868.06 723.38 602.82 1 764.71 1 604.28 1 458.43 1 325.85 1 205.32 0.67 0.58 0.50 0.44 0.38—浓度对数值2.854 2.812 2.771 2.729 2.688 3.097 3.018 2.939 2.859 2.780 3.247 3.205 3.164 3.123 3.081-0.174-0.237-0.301-0.357-0.420—菌液OD值0.068 0.221 0.368 0.488 0.666 0.057 0.214 0.371 0.523 0.656 0.069 0.252 0.408 0.558 0.678 0.051 0.205 0.351 0.494 0.615 0.805菌抑制率（%）91.55 72.55 54.29 39.38 17.27 92.92 73.42 53.91 35.03 18.51 91.43 68.70 49.32 30.68 15.78 93.66 74.53 56.40 38.63 23.60—机率值6.38 5.60 5.11 4.73 4.06 6.47 5.63 5.10 4.62 4.10 6.37 5.49 4.98 4.50 4.00 6.53 5.66 5.16 4.71 4.28—

2.2 供试杀菌剂对柑橘溃疡病菌的毒力回归方程

将供试的柑橘溃疡病菌在直径为90 mm培养皿上用牛肉膏蛋白胨固体培养基28℃培养48 h后，用无菌接种环刮取一环菌苔置于50 mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中培养24 h，利用紫外分光光度计，测定菌液的OD值，通过标准曲线换算成菌浓度，再用牛肉膏蛋白胨液体培养基将菌液稀释成约108cfu/mL的菌悬液，用无菌水将供试杀菌剂稀释成一系列浓度的药液，备用。用微量可调移液枪将1 mL稀释的药液以及1 mL浓度为108cfu/mL的菌悬液依次加入装有8 mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的20 mL玻璃瓶中，制成含不同浓度药液的培养液，以加入等量的无菌水作空白对照，每个处理设置3个重复，28℃摇床培养24 h，再用紫外分光光度计测定置于120 rpm/min菌液的OD值。

 

表2 4种杀菌剂对柑橘溃疡病菌的毒力回归方程

  

杀菌剂27.12%碱式硫酸铜SC 37.5%氢氧化铜SC 30%络氨铜AS 0.3%四霉素AS毒力回归方程y=13.303 8x-31.6873 y=7.251 7x-16.1270 y=13.854 7x-38.7687 y=8.892 8x+7.9149相关系数R2 0.986 4 0.985 5 0.982 1 0.978 3 EC50/(µg/mL)572.33 819.16 1 442.55 0.47

3 小结与讨论

通过本次毒力测定试验，得出27.12%碱式硫酸铜SC、37.5%氢氧化铜SC、30%络氨铜AS和0.3%四霉素AS对柑橘溃疡病菌的EC50值分别为572.33 µg/mL、819.16 µg/mL、1 442.55 µg/mL 和0.47µg/mL，根据EC50值分析，4种杀菌剂对柑橘溃疡病菌的毒力作用强弱排序为0.3%四霉素AS＞27.12%碱式硫酸铜SC＞37.5%氢氧化铜SC＞30%络氨铜AS。

从毒力测定的结果来看，0.3%四霉素AS对柑橘溃疡病菌的毒力作用是最强的，柑橘溃疡病菌是革兰氏阴性菌，据张宏民[10]报道，四霉素对革兰氏阴性菌以及革兰氏阳性菌均有极强的杀灭作用。铜制剂通常是生产上用于防治柑橘溃疡最普通的杀菌剂，但从本次试验结果可以看出所用3种铜制剂的EC50都相当高，这可能是因为大田实际防治效果是多方面影响的，包括铜制剂对病菌的抑制作用和铜离子对柑橘叶片的保护作用，而毒力测定是离体情况下测定杀菌剂对柑橘溃疡病菌的抑制作用，不能等同于大田实际防治效果。另外，国内外不少研究人员研究柑橘溃疡病病菌菌株对铜制剂有抗药性的的抗性机理问题[4,11-12]发现，对铜制剂的过度使用会造成溃疡病菌抗性增加，使柑橘溃疡病的田间防治难度加大。

本次毒力测定结果仅作为田间实际病害防治的一个参考依据，后续可以结合其他研究人员室内筛选出的杀菌剂进行田间药效试验，以便筛选出在田间对柑橘溃疡病防效更好的杀菌剂。

如果早期魏晋南北朝佛教雕塑突出宗教性，则后期明显展示出人文性特点，这就是从佛教之神到融合人本身的部分变化。因此这个时期的雕塑意象是极为丰富多彩的，不仅有高大宏伟的本尊佛像，还有很多的生动活泼、新颖优美的作品，如云冈石窟的供养天雕像多为青年女性，秀丽而挺健，喜悦而不柔媚，恭谨而不失尊严；麦积山雕像不少带有内心微笑，面色平和，身躯前倾，不再是高高在上的神灵形象，却体现出对人的关怀和亲切；麦积山123石窟男女侍童更接近了现实生活中一对天真可爱的孩子，等等。

参考文献

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