宁夏回、汉族不育男性MTHFR基因C677T多态性分析

不育症是指有规律性生活1年及以上未避孕而未育者，病因复杂，通常从遗传、精子质量、精浆生化、性功能等多方面进行评估。有报道亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)在生殖与孕育过程中至关重要，与男性精子关联密切[1]，可能影响精子质量，且MTHFR基因多态性可能存在种族差异性。笔者选择回、汉族男性不育患者279例，检测其MTHFR基因第667位碱基(C677T)多态性，分析不育男性患者MTHFR基因C677T多态性回、汉族患者间的差异性，判断回、汉族患者间MTHFR基因C677T表达的异同，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2016年1月-2017年10月就诊于我院生殖中心男科门诊的279不育患者，常规询问病史、生殖系统体检，排除患有染色体异常、隐睾、精索静脉曲张、生殖系统感染等疾病者。279例病患中回族96例，年龄22～39岁，平均(29.83±5.73)岁，BMI(24.09±3.10)kg/m2；汉族183例，年龄23～39岁，平均(29.74±4.74)岁，BMI(24.32±3.93)kg/m2。

1.2 精液分析：禁欲3～5 d，手淫取精液于无菌杯中，置36 ℃温箱内液化后，采用计算机辅助精子分析系统(北京，清华同方MX7.8.5-T)，按WHO(第5版)[2]标准行精液分析，获得精子浓度和前向运动百分率(PR)。

1.3 MTHFR基因C677T的检测：于上午09～11时抽取外周静脉血，按试剂说明书(购自西安金磁纳米生物技术有限公司)行全血基因组DNA分离和MTHFR基因C677T检测，全血基因组DNA分离采用手工操作磁性微粒法获得，MTHFR基因C677T检测采用ABI2720(美国)PCR-金磁微粒层析法分析。

1.4 观察指标：按回、汉族分为2组，分析2组患者MTHFR基因C677T各基因型CC、CT、TT及等位基因分布的差异性，分析2组患者各基因型之间精子浓度、PR的差异性。

1.5 统计学方法：采用SPSS 17.0统计软件，计量资料用表示，多组间比较采用方差分析，2组间比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者MTHFR基因C677T各基因型及等位基因分布情况:回族96例患者中，CC型28例，CT型47例，TT型21例；汉族183例患者中，CC型47例，CT型91例，TT型45例，2组间比较差异无统计学意义(χ2=0.4885，P>0.05)。等位基因，回族C基因 103例、T基因 89例；汉族C基因 185例、T基因 181例，2组间比较差异无统计学意义(χ2=0.484，P>0.05)，见表1。

 

表1 2组患者MTHFR基因C677T各基因型及等位基因分布情况[n(%)]

  

组别基因型nCCCTTT等位基因nCT回族9628(29．17)47(48．95)21(21．88)192103(53．65)89(46．35)汉族18347(25．68)91(49．73)45(24．59)366185(50．55)181(49．45)χ2值0．490．48P值>0．05>0．05

2.2 2组患者各基因型之间精子浓度、PR情况：①精子浓度：回族为(26.07±24.09)×106/mL，CC型为(27.51±17.88)×106/mL，CT型为(24.92±27.86)×106/mL，TT型为(29.43±23.98)×106/mL；汉族为(35.79±27.95)×106/mL，CC型为(33.56±25.83)×106/mL，CT型为(38.34±30.13)×106/mL，TT型为(32.97±25.77)×106/mL。2组患者总体比较，汉族高于回族(P<0.05)，见表2。②精子PR：回族为(36.68±23.86)%，CC型为(40.23±22.22)%，CT型为(35.49±22.91)%，TT型为(34.63±28.16)%；汉族为(36.45±18.41)%，CC型为(38.07±19.66)%，CT型为(36.57±18.13)%，TT型为(34.53±17.69)%。2组患者总体比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

 

表2 2组患者各基因型之间精子浓度、PR的比较

  

组别n精子浓度(×106/mL)精子PR(%)回族 CC2827．51±17．8840．23±22．22 CT4724．92±27．8635．49±22．91 TT2129．43±23．9834．63±28．16 F值0．270．79 P值>0．05>0．05汉族 CC4733．56±25．8338．07±19．66 CT9138．34±30．1336．57±18．13 TT4532．97±25．7734．53±17．69 F值0．730．74 P值>0．05>0．05

3 讨论

MTHFR是一种黄素依赖酶，基因定位于1p36.3[3]，是同型半胱氨酸(Hcy)代谢的限速酶之一，其通过参与甲硫氨酸循环，为 DNA甲基化提供甲基，影响基因表达。MTHFR基因被与疾病有关的新突变位点不断被发现[4]，其中MTHFR基因C677T多态性是近年来研究热点，MTHFR第677位核苷酸突变，分为CC(野生型)、CT(杂合型)、TT(纯合型)3种基因型，体外实验发现，突变后MTHFR酶的耐热性和活性下降[5]，发现其与动脉硬化、高血压、心脏病、出生缺陷、老年痴呆、激素代谢等密切相关[6]。通过外源性补充叶酸，可以在一定程度上降低这些疾病发生的风险。

MTHFR基因C677T多态性存在地理、种族差异性，Rai等[7]研究发现C667T多态性与亚洲不育男性存在显著相关性，Irfan等[8]发现巴基斯坦特发性不育男性与C677T有显著关联；Yang等[9]报道我国10省市汉族的分布情况，发现TT型在北部地区明显高于南部地区。笔者选择不育患者279例，其中回族96例，汉族183例，分析回、汉族患者之间MTHFR基因C677T各基因型的差异，发现回、汉族间各基因型间差异无统计学意义。同时检测了精子浓度和PR，发现回、汉族2组患者精子浓度有明显差异，精子PR无差异，与王莹等[10]报道一致。

综上所述，宁夏地区不育男性患者MTHFR基因C677T多态性回汉、族间无显著差异性，因此，在不育症的MTHFR基因C677T多态性防治过程中，可以整体规划、综合治疗，无需按民族特征制定个体化方案。

[参考文献]

[1] Wu W，Shen O，Qin Y，et al.Methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism and the risk of male infertility:a meta-analysis[J].International Journal of Andrology，2012，35(1):18-24.

[2] World Health Organisation.WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human semen[M].5 thed.Geneva:World Health Organisation，2010:10-26.

[3] Frosst P，Blom HJ，Milos R，et al.A candidate genetic risk factor for vascular disease:a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase[J].Nature Genetics，1995，10(1):111-113.

[4] Forges T，Chery C，Audonnet S，et al.Life-threatening methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) deficiency with extremely early onset:characterization of two novel mutations in compound heterozygous patients[J].Molecular Genetics and Metabolism，2010，100(2):143-148.

[5] Goyette P，Frosst P，Rosenblatt DS，et al.Seven novel mutations in the methylenetetrahydrofolate reductase gene and genotype/phenotype correlations in severe methylenetetrahydrofolate reductase deficiency[J].American Journal of Human Genetics，1995，56(5):1052-1059.

[6] Rampersaud GC，Kauwell GP，Bailey LB.Folate:a key to optimizing health and reducing disease risk in the elderly[J].Journal of the American College of Nutrition，2003，22(1):1-8.

[7] Rai V，Kumar P.Methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism and risk for male infertility in Asian population[J].Indian Journal of Clinical Biochemistry，2017，32(3):253-260.

[8] Irfan M，Ismail M，Azhar Beg M，et al.Association of the MTHFR C677T (rs1801133) polymorphism with idiopathic male infertility in a local Pakistani population[J].Balkan Journal of Medical Genetics，2016，19(1):51-62.

[9] Yang BY，Liu YY，Li YF，et al.Geographical distribution of MTHFR C677T，A1298C and MTRR A66G gene polymorphisms in China:findings from 15357 adults of Han nationality[J].PLoS One，2013，8(3):57917.

[10] 王莹，刘芳，刘永杰，等.宁夏不育男性精子质量分析[J].第二军医大学学报，2012，33(10)：1158-1159.