生物制药参考文献

“现代生物技术丛书”是化学工业出版社重点策划、隆重推出的一套精品图书，已被国家新闻出版总署列为“十五”国家重点图书。该套书由我国著名生物技术专家焦瑞身先生担任编委会主任，各相关领域科研、教学、产业一线具有权威性的专家学者共同撰写。《生物制药技术》是一本全面介绍生物制药技术的图书。本书以当代生物制药技术的研究和进展开篇，包括基因组技术、高通量药物筛选技术、手性合成、组合生物合成、生物芯片等高新技术；之后按照生物制药的方法分为微生物制药、新型发酵技术制药、生物转化、转基因制药、抗体工程制药、细胞培养、海洋生物制药等章进行药物生产的详细介绍；最后对分离纯化和分子育种两项生产关键技术进行了集中阐述。本书引用了大量的文献资料，集中反映了该领域国内外的技术现状和研究趋势，对于生物药制领域的科研技术人员是很好的技术资料和借鉴。其对各种制药方法的介绍，理论与实践相结合，是相关专业学生和相近专业技术人员学习和深入生物制药领域的好参考 第一章 当代生物制药技术的方法与进展第一节 药物筛选模型改进、高通量筛选与虚拟筛选第二节 从微生物、海洋中开拓药物的新来源第三节 组合生物合成与表面展示技术第四节 生物芯片技术第五节 微生物基因组第六节 生物手性合成技术参考文献第二章 微生物制药第一节 微生物药物第二节 核酸、核苷和核苷酸类药物第三节 药用氨基酸第四节 微生物产生的其他药用产品参考文献第三章 新型发酵技术制药第一节 微生物发酵技术制药的基础第二节 微生物发酵制药的技术第三节 微生物发酵罐与参数检测第四节 原位发酵和连续发酵第五节 微生物发酵制药新技术参考文献第四章 生物转化与药物合成第一节 微生物（酶）转化与手性合成第二节 甾体药物的生物转化第三节 生物转化与单一构型氨基酸的制备第四节 D型泛酸盐的生物转化第五节 不饱和脂肪酸的生物转化第六节 氧化葡萄糖酸菌与维生素C和a-葡萄糖苷酶抑制剂米格列醇的生的转化第七节 生物转化与R-（+）硫辛酸的制备第八节 其他一些重要品种的生物转化第九节 新生物转化系统的研究和应用参考文献第五章 转基因制药第一节 转基因动物制药第二节 植物医药基因工程参考文献第六章 抗体工程制药第一节 抗体分子和相关的免疫学问题第二节 多克隆抗体第三节 单克隆抗体第四节 基因工程抗体的研制第五节 抗体在生物医学中的应用第六节 工程抗体的中试和产业化参考文献第七章 细胞培养技术制药第一节 哺乳动物细胞培养第二节 植物组织细胞培养第三节 昆虫细胞培养参考文献第八章 海洋生物制药第一节 海洋微生物活性成分的研究及药物的开发第二节 海洋动植物活性成分的研究及药物的开发第三节 海洋毒素研究及其应用第四节 海洋药物研究现状及我国在这一研究领域中的对策参考文献第九章 生物制药的分离纯化技术第一节 细胞及组织的破碎第二节 沉淀第三节 溶剂萃取第四节 色谱分析参考文献第十章 制药工业微生物的分子育种技术第一节 传统突变筛选技术第二节 基因克隆第三节 组合生物合成第四节 定向进化第五节 展望参考文献中西文名词对照

液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 下载带有 Google 工具栏的 Firefox， 上网冲浪更惬意 作者; 姜维，方晓明，唐毅锋，庞国芳 【摘要】 目的 建立脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留量的测定方法。方法 色谱柱：Kromasil C18（250mm×6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（65:35）；流速：0ml/min；柱温：35℃；检测波长：292nm；进样量：40μl。结果 样品的室内加标平均回收率为7％～8％，室内相对标准偏差为5％～0％，室间加标平均回收率为4％～0％，室间相对标准偏差7％～1％，定量测定低限（LOQ）为10μg/kg。结论 本方法简便，准确，可用于脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留含量的测定。 【关键词】 高效液相色谱法;脂肪;醋酸美仑孕酮;醋酸甲地孕酮;醋酸氯地孕酮 Determination of progestones in fat of beef and pork by HPLC 【Abstract】 Objective To establish the determination method of melengestrol acetate，chlormadinone acetate and megestrol acetate in fat of beef and Methods Chromatographic separation was carried out on a C18column（250mm×6mm，5μm）and acetonitrile-water (65:35) as the mobile The flow rate was 0ml/min; the column temperature was 35℃; the detection wavelength was 292nm; the injection volume was 40μResults The intra-laboratory average recoveries ranged from 7％～8％ and RSD of 5％～0％The inter-laboratory average recoveries added to standard ranged from 4％～0％ and RSD of 7％～1％The lowest limit of quantitation (LOQ) is 10μg/Conclusion The method is simple and It is suitable for the determination of melengestrol acetate，chlormadinone acetate and megestrol acetate in fat of beef and 【Key words】 HPLC; fat; melengestrol acetate; chlormadinone acetate; megestrol acetate 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮为合成的孕激素类药物，有明显的孕激素和抗雄激素作用，可抑制排卵。孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用，动物实验表明有死胎率增加和致畸作用，副作用有：(1)恶心、头晕、倦怠；(2)突破性出血；(3)孕期服用，会增加女性后代的男性化作用。孕激素类药物能增强体内物质沉积和改善生产性能，可以很快产生显著和直接的经济效益，因此，对生产者有很大的吸引力。畜牧业中使用孕激素类药物(非治疗用途)已有很长的历史，但人类长期食用含有激素的肉制食品，即使含量甚微，亦会明显影响机体的激素平衡，而且有致癌危险，对幼儿造成发育异常等危害。因此，开发一种能检测孕酮残留量的方法是十分必要的。 检测孕激素类药物的方法有很多，如液相色谱/质谱法（LC/MS）〔1〕、气相色谱/质谱法（GC/MS）〔2，3〕和液相色谱法〔4～6〕等。本文采用高效液相色谱法对牛和猪脂肪样品中的孕酮进行检测。 1 试剂与仪器 1 试剂 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品（Sigama公司），乙腈（HPLC级），甲醇（HPLC级），乙酸乙酯（HPLC级），其他试剂为分析纯。水由Milli-Q净化系统（Millipore公司）制得。 （1）标准储备液：1000μg/ml，分别准确称取050g醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品于50ml容量瓶中，用甲醇定容。于4℃保存，可使用一年。 （2）混合中间溶液I：100μg/ml，分别吸取0ml醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准储备液于100ml容量瓶中，用甲醇定容。于4℃保存，可使用一年。 （3）混合中间溶液II：0μg/ml，取00ml混合中间溶液I于100ml容量瓶中，用甲醇定容。于4℃保存，可使用半年。 （4）混合标准工作液：分别吸取10、20、40、80、100μl混合中间溶液II添加到980、970、950、910、890μl的乙腈-水（65:35）中，再加入10μl 2%盐酸溶液，混匀，得到浓度为010μg/ml、020μg/ml、040μg/ml、080μg/ml和10μg/ml混合标准工作液，供液相色谱测定，当日使用。 2 仪器 Waters液相色谱系统，510泵体，486紫外-可见光检测器，Emprower pro色谱软件。氮气吹干仪（Organomation Associates，J公司）；固相萃取装置（Supelco公司）；低温离心机（德国Eppendorf公司）；涡旋混匀器（XW-80A型，上海医大仪器厂）；CN固相萃取柱（3ml，Waters公司）。 2 测定步骤 1 试样的制备与保存 1 试样的制备 把大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块，然后放入底部塞有玻璃棉的漏斗中，放入150ml的烧杯中，将烧杯置于微波炉内。根据所熬制脂肪量，使用最大功率，加热30～60s，如果脂肪没有融化，可在间隔30～60s以后重复加热30～60s，直到有液体脂肪流出，通过漏斗滴入烧杯中。把熬制好的脂肪油放入样品瓶中，密封，并做上标记。 2 样品的保存 把熬制好的脂肪油样品置于-18℃中，冷冻保存。 2 提取 称取熬制好的脂肪油00±01g，置于50ml具塞离心管中，加入5ml乙腈，于60℃水浴中保温3min以使固体脂肪溶化，涡旋振摇1min，在-5℃下离心7min（离心力1160g），吸取上清液至15ml带塞聚丙烯离心管，再在沉淀物中加入5ml乙腈重复提取一次，合并上清液。在合并的乙腈提取液中加入2×2ml正己烷，涡旋振摇1min，于-5℃中离心5min（离心力1160g），弃去正己烷层。乙腈提取液于60℃中用氮气吹干仪吹干，残渣待皂化。 3 皂化 在残渣（2项）中依次加入4ml正己烷、1ml 1mol/L 氢氧化钠溶液和0mol/L氯化镁溶液，于涡旋混匀器上快速混匀10s，在60℃水浴中保温15min，于-5℃中离心5min（离心力1160g），吸取上清液至15ml玻璃试管。在沉淀物中再加入4ml正己烷混匀后，在60℃水浴中加热15min后，在-5℃中离心5min（离心力1160g），合并上清液。于60℃中用氮气吹干仪吹干，用0ml正己烷溶解残渣，待净化。 4 净化 将皂化后的样液（3项）倒入经5ml乙酸乙酯和6ml正己烷预处理过的CN柱中，用2×1ml正己烷润洗玻璃试管，洗液倒入到CN柱中。待样液流过后，依次用5ml正己烷和6ml 5%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗柱子，随后打开真空泵将小柱中液体抽干，保持抽气2min。最后用5ml 20%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱，洗脱液收集于15ml玻璃试管中，于60℃中用氮气吹干仪吹干。残余物用990μl乙腈-水（65:35）涡旋溶解，静止15min后，加入10μl 2%盐酸溶液，混匀，供液相色谱测定。 5 测定 1 液相色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（250mm×6mm，5μm）；预柱：C18柱（5mm×6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（65:35）；流速：0ml/min；柱温：35℃；检测波长：292nm；进样量：40μl。 2 液相色谱测定 根据样液中3种孕酮的含量情况，选定浓度相近的标准工作液，标准工作液和样液中3种孕酮的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，标准品的色谱图见图1。 图1 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮的色谱图（100ng/ml）1-醋酸甲地孕酮，2-醋酸氯地孕酮，3-醋酸美仑孕酮 液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 来自: 免费论文网 3 结果与讨论 1 线性范围 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮浓度在010～10μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其相关系数（γ2）均大于998。 2 回收率、精密度和定量检测限 本实验以2种脂肪（牛脂肪和猪脂肪）作为样本。取适量标准品加入到0g样品中，使添加量相当于10、20和50μg/kg，每个添加水平各取24份试样（每种脂肪各12份）。图2为空白脂肪样品和添加样品（10μg/kg）的色谱图。表1为醋酸美仑孕酮，醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮外标法测得的室内回收率和精确度。表2为8家实验室的室间回收率和精确度结果。根据回收率试验，能可靠测得的最低浓度确定定量检测限（LOQ），LOQ为10μg/kg，满足残留限量的检测要求。 （A） （B） （C） （D） 图2 空白脂肪样品和添加样品（10g/kg）的色谱图A：牛脂肪空白样；B：猪脂肪空白样；C:牛脂肪添加样；D:猪脂肪添加样 表1 室内回收率和精确度的结果 (每一添加量，n=24) 表2 8家实验室室间回收率和精确度的结果 (每一添加量，n=32) 【参考文献】 1 Hooijerink H，van Bennekom EO，Nielen MWFScreening for gestagens in kidney fat using accelerated solvent extraction and liquid chromatography-electrospray tandem mass Anal Chim Acta，2003，483(1-2): 51- 2 Neidert EE，Gedir RG，Milward LJ，et Determination and qualitative confirmation of melengestrol acetate residues in beef fat by electron-capture gas chromatography and gas-chromatographic chemical-ionization mass J Agric Food Chem，1990，38(4): 979- 3 Impens S，Courtheyn D，de Wasch K，et Faster analysis of anabolic steroids in kidney fat by downscaling the sample size and using gas chromatography-tandem mass Anal Chim Acta，2003，483(1-2): 269- 4 Gaver RC，Movahhed HS，Farmen RH，et Liquidchromatography procedure for the quantitative analysis of megestrol acetate in human J Pharm Sci，1985，74(6): 664- 5 Overdiek JWPM，Hermens WAJJ，Merkus FWHMDetermination of the serum concentration of spironolactone and its metabolites by high-performance liquid J Chromatogr B，1985，42(2): 279- 6 Campbell HM，Sauve FLiquidchromatographic determination of melengestrol acetate in J AOAC Int，1993，76(6): 1163- 液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 来自: 思想汇报网参考资料：sixiang-

“现代生物技术丛书”是化学工业出版社重点策划、隆重推出的一套精品图书，已被国家新闻出版总署列为“十五”国家重点图书。该套书由我国著名生物技术专家焦瑞身先生担任编委会主任，各相关领域科研、教学、产业一线具有权威性的专家学者共同撰写。《生物制药技术》是一本全面介绍生物制药技术的图书。本书以当代生物制药技术的研究和进展开篇，包括基因组技术、高通量药物筛选技术、手性合成、组合生物合成、生物芯片等高新技术；之后按照生物制药的方法分为微生物制药、新型发酵技术制药、生物转化、转基因制药、抗体工程制药、细胞培养、海洋生物制药等章进行药物生产的详细介绍；最后对分离纯化和分子育种两项生产关键技术进行了集中阐述。本书引用了大量的文献资料，集中反映了该领域国内外的技术现状和研究趋势，对于生物药制领域的科研技术人员是很好的技术资料和借鉴。其对各种制药方法的介绍，理论与实践相结合，是相关专业学生和相近专业技术人员学习和深入生物制药领域的好参考 第一章 当代生物制药技术的方法与进展第一节 药物筛选模型改进、高通量筛选与虚拟筛选第二节 从微生物、海洋中开拓药物的新来源第三节 组合生物合成与表面展示技术第四节 生物芯片技术第五节 微生物基因组第六节 生物手性合成技术参考文献第二章 微生物制药第一节 微生物药物第二节 核酸、核苷和核苷酸类药物第三节 药用氨基酸第四节 微生物产生的其他药用产品参考文献第三章 新型发酵技术制药第一节 微生物发酵技术制药的基础第二节 微生物发酵制药的技术第三节 微生物发酵罐与参数检测第四节 原位发酵和连续发酵第五节 微生物发酵制药新技术参考文献第四章 生物转化与药物合成第一节 微生物（酶）转化与手性合成第二节 甾体药物的生物转化第三节 生物转化与单一构型氨基酸的制备第四节 D型泛酸盐的生物转化第五节 不饱和脂肪酸的生物转化第六节 氧化葡萄糖酸菌与维生素C和a-葡萄糖苷酶抑制剂米格列醇的生的转化第七节 生物转化与R-（+）硫辛酸的制备第八节 其他一些重要品种的生物转化第九节 新生物转化系统的研究和应用参考文献第五章 转基因制药第一节 转基因动物制药第二节 植物医药基因工程参考文献第六章 抗体工程制药第一节 抗体分子和相关的免疫学问题第二节 多克隆抗体第三节 单克隆抗体第四节 基因工程抗体的研制第五节 抗体在生物医学中的应用第六节 工程抗体的中试和产业化参考文献第七章 细胞培养技术制药第一节 哺乳动物细胞培养第二节 植物组织细胞培养第三节 昆虫细胞培养参考文献第八章 海洋生物制药第一节 海洋微生物活性成分的研究及药物的开发第二节 海洋动植物活性成分的研究及药物的开发第三节 海洋毒素研究及其应用第四节 海洋药物研究现状及我国在这一研究领域中的对策参考文献第九章 生物制药的分离纯化技术第一节 细胞及组织的破碎第二节 沉淀第三节 溶剂萃取第四节 色谱分析参考文献第十章 制药工业微生物的分子育种技术第一节 传统突变筛选技术第二节 基因克隆第三节 组合生物合成第四节 定向进化第五节 展望参考文献中西文名词对照