图书馆
额。。。楼上的各位实在都太不靠谱了。。看来拿分的只能是我了。。。。跪谢楼上各位大大的不精彩答案啊
微生物前沿、生物过程、计算生物学、生物医学……这些
您到中国知网 里面有全部的论文库，全文的，可直接注册后下载，祝您愉快！ 我帮您下载了一篇很短的，不知道是否对您有用，其他的可看参考资料后自行下载哦。科技传播杂志吴卓颖编辑，有其他需要咨询的可直接加我。祝您好运哦！ 临床微生物检验的快速诊断技术研究进展 关键词：分子生物 来源： CHKD期刊全文库《当代医学》2099年第16期 （本文作者：解放军第二五二医院 李苏利） 目前感染性疾病仍然是危害人类健康的重大隐患。随着新发和突发感染性疾病的涌现，曾已被控制的感染性疾病的卷土重来，造成感染性疾病的微生物种类日益复杂，常见的病原微生物的威胁不仅没有消除而且出现了大量耐药菌株，加上新的病原微生物的出现，给临床诊断和治疗带来了极大的困扰。严峻的现实给病原微生物的检测和诊断提出了更高的要求。世界卫生组织(WHO)对临床微生物实验室提出:临床微生物实验室尽可能把目标集中在快速诊断方面。利用一切手段将实验室数据转化为临床有用的信息。 1 自动化鉴定技术的应用 临床微生物的实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，尤其是分离培养，目前仍然是许多病原体检测的“金标准”。但是，由于细菌的生长繁殖需要一定时间，使检测周期难以缩短。此外，很多病原体的培养受营养要求、抗生素应用及病原体含量等因素的影响，用传统人工方法操作复杂、检测周期长，敏感性与特异性也有限。为解决这一问题，各种自动化培养和鉴定系统不断产生，随着计算机的发展和应用，先后出现了许多自动与半自动细菌鉴定与药敏系统，统称为“微生物鉴定专家系统”，这些系统大大提高了临床实验室的工作效率和检测的准确性，传统鉴定方法也在逐步改进，并在一定程度内加快了检测速度。 2 免疫学方法 免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应，检测病原微生物，简化了病原微生物的鉴定步骤，备受关注。各大文献数据库提供的数据显示，几乎建立了所有病原体的血清学检测方法，表明该方法已成为一种微生物实验室常用的成熟的检测技术。 1 凝集技术 常用的凝集技术有乳胶凝集技术和血清凝集技术。用于微生物的初步诊断、分型、鉴定，例如霍乱弧菌和志贺菌的分型，大肠杆菌O57：H7、脑膜炎球菌等，短时间内就可完成鉴定。该诊断法具有操作简便、快速、准确、特异性强、阳性率高等特点。 2 荧光抗体技术 荧光抗体技术是根据抗原抗体反应具有高度的特异性，把荧光素作为抗原标记物，在荧光显微镜下检查呈现荧光的特异性抗原抗体复合物及其存在部位。荧光抗体技术的主要特点是特异性强、速度快。吕治林等报道由美国同行所作的用炭疽杆菌细胞壁(CW-DFA)和荚膜抗原(CAP-DFA)特异的荧光标记的单克隆抗体，可快速鉴别炭疽杆菌。 3 酶免疫技术 酶联免疫技术现已被广泛地应用于多种病原微生物的检测，可检测样本中病原体抗原，也可检测机体中的抗体成分。应用单克隆抗体结合硝酸纤维膜上的斑点ELISA技术，已成功地自患者的咽拭标本中同时检出可能存在的肺炎支原体、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒。Gehring等用酶联免疫化学发光法(ELIMCL)测定大肠杆菌O57：H7。许多疾病的检测都已有商品化的试剂盒出现。 3 分子生物学技术 随着分子生物学技术的迅速发展，使人们对微生物的认识从外部表型逐渐转向内部基因结构特征，微生物的检测也从生化、免疫方法转向基因水平检测，对于那些难培养和不可能培养的微生物，可直接通过获得基因信息，给微生物学的检测带来崭新的领域，为科学快速发展提供了新的机遇。 1 PCR技术 PCR具有高度敏感性和特异性，在病原体检测上，对形态和生化反应不典型的微生物鉴定，常规方法常难以准确检测，即使出现大量死菌PCR也能做出准确的鉴定；不受混合标本的影响，可轻易从含有大量正常菌群的标本中鉴定病原菌；对于生长缓慢或难于培养的微生物鉴定，如分枝杆菌、幽门螺杆菌、支原体、衣原体、螺旋体等，目前其他方法阳性检出率很低，PCR技术对这类菌株的鉴定有重要意义。 但是常规PCR技术也存在一些问题，如出现假阳性、形成引物二聚体，检测操作也比较繁琐，中间污染环节多，易出现假阳性或假阴性结果。为了克服这些不足，一些新的PCR技术渐衍生出来并被用于实践，如巢式PCR、逆转录PCR、多重PCR、通用引物PCR(UP-PCR)、PCR单链构象多态性分析、随机引物DNA多态性扩增(RAPD)、限制性长度多态性分析(RFLP)、实时荧光定量PCR等。 2 基于16S rRNA与GyaB的检测技术 1 以16S rRNA为靶基因进行检测 16S rRNA存在于所有原核生物细胞中，它们相对稳定且有较高的拷贝数，其序列中含可变区及高度保守区，因此可设计群、属、种特异性的探针。现阶段各种常见细菌的16S rRNA基因几乎全部测序完成，16SrRNA编码基因的这些特点使之成为较理想的细菌基因分类的靶序列，逐渐成为细菌鉴定、分类的“金标准”。 2 以促旋酶(g yras e)B亚单位基因靶基因进行检测GyaB除了具有16S rRNA所具有的优点外，其基因进化率高于核糖体基因，还有GyaB在近乎全部细菌中呈单拷贝形式。有研究表明，基于GyaB序列构建的进化图谱与基于DNA-DNA杂交的相一致。因此，GyaB的分析特别适合于菌株的区别和鉴定。Fukushima等以GyaB基因为靶基因设计基因芯片来检测分枝杆菌属，实验结果显示此芯片鉴别分枝杆菌达到种水平，并且能区别密切相关的菌种，这对临床治疗具有重要的参考价值，说明分析GyaB基因序列对于在菌种水平鉴别细菌是快速而有效的方法。 3 多位点序列分型 多位点序列分型(MLST)是近年来发展很快的分子生物学分析方法，具有很高的分辨能力，既适于分子流行病学研究，也可用于分子进化学的研究。MLST越来越多地被作为能进行国际间菌株比较的常用工具，建立一种更为准确的分析系统方法，并且用于研究出现的不同的抗生素抵抗株，相关特殊基因型及新的变异株引起的疾病流行病学分析和种群结构的研究。 4 环介导等温扩增技术(LAMP) 环介导等温扩增技术(LAMP)，是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统方法相比，不需要热循环为等温扩增，且由于反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA扩增方法。该法针对靶基因的6个区域设计4条特异引物，利用一种链置换聚合酶在恒温条件(65℃左右)保温约60min即可完成核酸扩增反应，扩增出特征性梯状条带。还可通过设计两条环引物可使反应速度提升1/2～1/3。LAMP技术可用于病原微生物的现场快速检测、战时野外及基层普及应用。 4 分子生物传感器 分子生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断技术相结合而成的一种新技术，是现代临床诊断发展的一个新方向。由于生物传感器检测准确、操作简便等特点，近年来已经在许多领域取得了很大的进展，在感染类疾病诊断、药物筛选、未来战争生物战剂监测等领域获得了广泛的应用，其中临床中用于病原体检测的以DNA生物传感器最为常见。华裔科学家陈建柱最新制成的生物传感器，仅需20s时间即可检测出微量SARS病毒、天花病毒及炭疽杆菌等的存在，从而达到早期诊断的目的。 5 基因芯片 基因芯片是高通量的群体指标分析系统，基因芯片技术是一项全新的技术，它以一次性检查上万个基因的优势，被誉为是基因功能研究中最伟大的一项发明。它以许多特定的寡核苷酸片断或基因片断作探针，有规律地排列、固定在诸如硅片、 玻璃片、尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵，以达到一次试验同时检测多种疾病或多种样品的目的。基于高通量、微型化和平行分析的特点，基因芯片在微生物病原体检测、种类鉴定、功能基因检测、基因分型、突变检测和基因组监测等研究领域中发挥着越来越重要的作用。目前，许多细菌、病毒等病原体的基因组测序已经完成，将许多代表各种微生物的特殊基因制成1张芯片，经反转录就可检测样本中有无病原体基因的表达及表达水平，由此判断病人感染病原、感染进程以及宿主反应等，这样就大大提高了检测效率。 6 蛋白指纹图谱技术 蛋白质指纹图谱技术是随着蛋白质组学兴起的一种新技术。近年来，越来越多的学者意识到有必要从蛋白质水平来研究微生物。蛋白质是细菌功能的执行者，细菌种类繁多，不同的蛋白种类决定细菌千变万化的功能和特征。1996年，Clayin等采用MALDITOF MS质谱成功鉴定了革兰阴性和革兰阳性细菌，表明不同属种的细菌具有不同的蛋白指纹图谱，同一种细菌具有相似的蛋白指纹图谱，根据细菌蛋白指纹图谱可对细菌进行快速鉴定。中科院微生物所唐宏研究员等利用“蛋白质质谱指纹图谱”最新技术及其检测办法，可以分析得出SARS与非SARS病人血清中的蛋白质成分变化。这种检测SARS病毒方法经北京天坛医院临床证实，阳性率接近95%，特异性将近96%，能在病人发烧的第一天即可以得出满意的检测结果。有专家称蛋白质指纹图谱技术标志着一种划时代的诊断模式的诞生。 随着计算机技术的不断发展，临床病原菌检测将向着高度自动化和开发简便的快速检测技术两个方向发展。分子生物学技术通过自动化仪器的使用，将在病原菌诊断、鉴定和耐药基因检测方面发挥巨大的的作用。随着多学科交叉时代的到来，最终将彻底改变临床病原菌检测的现状和传统观念，实现高效高质、快速统一。
可上CA、medline进行检索
食物的微生物污染是影响食品安全的重要因素之一,在其贮藏与加工过程中,快速、准确地检测食物微生物污染,是控制和保障食品安全的重要手段。目前,对于食品中大肠菌群的检测,国内多数采用的检测方法是依据中华人民共和国国家标准(GB1~31-94)和中华人民共和国国家质量监督检验总局的《食品卫生微生物学检验-大肠菌群的快速检测》(GB/T32-2002)。其中国标法检测结果的准确性、灵敏性均较高,但是操作繁杂、耗时较长,不适合于保质期短的食品检测;尽管快速检测国标法大大缩短了试验周期,操作也相对较易,但仍然需要使用大量玻璃容器和仪器,不便于现场操作。3M试纸快速检测方法由于前处理简单,处理时间短,在生产加工企业的现场检测中具有较大优势,但是其检测效果和检测限量是否达到国家规定的食品卫生标准还有待证实。对此,笔者进行了3M试纸的大肠菌群检测法与国家颁布检测标准方法的试验对比研究,并采取大肠菌群污染的自然状态未知浓度和模拟培养已知浓度的两种比较,以期为食品贮藏、加工过程的卫生质量控制应用研究提供基础依据。
pubmed，NCBI找文摘（也有免费的全文，较少），看到需要的，有意向读全文的，在文献论坛求助如丁香园、龙王学术、小木虫、博研联盟、萍萍家园求助，也可以通过馆际互借
英文的你可以去看看科研出版社，中文的你可以看看汉斯出版社，所有文献都是免费查阅下载的
In the process of manufacture,store and transport,it exists the environment that suit for the microbe growth and propagate,because there are enough carbon sources,water,oxygen and other organic matter,inorganic When the microbe propagate largely in any time,it should bring the oil pollution,down level,if it is a long time,the device should be destroied and The article studies the etching principle of the harmful bacterium of desulfovibrio,thiobacillus denitrificans,Summary a few way of the microbe etching,sum up the antiseptic status of crude oil and oil system,further simple introduce a kind of new type special antiseptic for 你可以在下面提供的网站去下载
微生物前沿、生物过程、计算生物学、生物医学……这些
可上CA、medline进行检索
可上CA、medline进行检索
如果序列之间，利用16SrRNA或ITS的通用引物进行PCR扩增。对微生物群落进行测序包括两类，从而分析微生物群落构成，每个OTU对应于一个不同的16SrRNA序列,核心是研究样品中的物种分类。测序区段，目前的生物信息学分析也可以基于16srDNA的测序对微生物群落的基因构成和代谢途径进行预测分析，一般情况下，大大拓展了我们对于环境微生物的微生态认知：16SrDNA（或16SrRNA），而可变区序列则能体现物种间的差异，通过测序以后就可以分析样品中的微生物多样性，保守区序列反映了物种间的亲缘关系，是不经过分离培养微生物，一类是通过16srDNA，其分子大小适中，那怎么区分这些不同的序列呢，18srDNA：由于16srDNA较长（1。目前我们根据16s的测序数据可以将微生物群落分类到种（species）（一般只能对部分菌进行种的鉴定）。16SrRNA基因序列包括9个可变区和10个保守区。通过OTU分析。借助不同环境下微生物群落的构成差异分析我们可以分析微生物与环境因素或宿主之间的关系。一般我们对v3-v4双可变区域进行扩增和测序，基因构成基因测序分析微生物菌群结构NA是什么意思微生物群落测序是指对微生物群体进行高通量测序5kb），这个时候就需要引入operationaltaxonomicunits。以16srDNA扩增进行测序分析主要用于微生物群落多样性和构成的分析，而对所有微生物DNA进行测序，长度约为1542bp，通过分析测序序列的构成分析特定环境中微生物群体的构成情况或基因的组成以及功能，ITS区域进行扩增测序分析微生物的群体构成和多样性，通过提取样品的总基因组DNA：16SrRNA基因是编码原核生物核糖体小亚基的基因，分别是v1-v9，是细菌系统分类学研究中最常用和最有用的标志，就可以知道样品中的微生物多样性和不同微生物的丰度、物种丰度以及系统进化：operationaltaxonomicunits(OTUs)在微生物的免培养分析中经常用到，突变率小，几个概念，也有对v1-v3区进行扩增测序，挖掘有应用价值的基因资源，我们只能对其中经常变化的区域也就是可变区进行测序。OTU；还有一类是宏基因组测序，也就是每个OTU对应于一个不同的细菌（微生物）种。16SrRNA基因测序以细菌16SrRNA基因测序为主，寻找标志性菌群或特定功能的基因。16srDNA包含有9个可变区，比如不同的16SrRNA序列的相似性高于97%就可以把它定义为一个OTU，甚至对亚种级别进行分析
通过OTU聚类分析，可以简化数据结构，得到样品中的微生物多样性以及不同微生物的丰度。操作分类单元operational taxonomic units (OTUs)。一般我们提取样品的总基因组DNA，利用16S rRNA或ITS的通用引物进行PCR扩增，通过测序会出现大量不同序列，为了方便区分不同的序列，不同的16S rDNA基因序列若相似性高于97%，就可以把它定义为一个OTU，每个OTU对应于一个不同的微生物种。这样一来在微生物研究中，将相似性高于97%序列归类为一个OTU，就可以简化数据结构，便于分析。
1:环境污染这个是最直接的也是最显眼的坏处 2:物种灭绝加快这是由环境污染和人类的捕杀所造成的也属于科技发展的坏处 3:人身安全越来越没保障现在平均每天都有数以万计的犯罪行为发生而其犯罪手段大多都与当下时新科技相关尤其是枪械犯罪,更是让普通人民防不胜防而从第二次世界大战我们已经可以看出,随着科技的发展,现在的战争所造成的破坏与损失以远远不是以前可比甚至有可能造成人类灭亡的命运 4:人类身体素质大不如前随着科技发展,气车,火车,飞机等各种交通工具的出现使人类的日常生活发生了重大改变,人类已经不再总是依赖自己的两条腿,因而现在的人类的身体素质和以前相比已经是不能相提并论以前项羽"力拔山河气盖兮"在当今的社会已经是不可能再出现而这种情况继续发展下去则有可能使人的四肢萎缩,使人类出现一个新的形态 5:各种新兴病菌不断出现,很多病菌的杀伤力已经远远超过以前的病菌的破坏力这是由于医药科技的迅速发展加快了病毒的变种以至于科技的发展速度已经跟不上病毒的变种速度或许有一天人类会灭亡于某一场大的瘟疫 等等等等
当人类在发现和研究微生物之前，把一切生物分成截然不同的两大界－动物界和植物界。随着人们对微生物认识的逐步深化，从两界系统经历过三界系统、四界系统、五界系统甚至六界系统，直到20世纪70年代后期，美国人Woese等发现了地球上的第三生命形式－古菌，才导致了生命三域学说的诞生。该学说认为生命是由古菌域（Archaea）、细菌域（Bacteria）和真核生物域（Eucarya）所构成。在图示“生物的系统进化树”中，左侧的黄色分枝是细菌域；中间的褐色和紫色分枝是古菌域；右侧的绿色分枝是真核生物域。 古菌域包括嗜泉古菌界（Crenarchaeota）、广域古菌界（Euryarchaeota）和初生古菌界（Korarchaeota）；细菌域包括细菌、放线菌、蓝细菌和各种除古菌以外的其它原核生物；真核生物域包括真菌、原生生物、动物和植物。除动物和植物以外，其它绝大多数生物都属微生物范畴。由此可见，微生物在生物界级分类中占有特殊重要的地位。 生命进化一直是人们关注的热点。Brown等依据平行同源基因构建的“Cenancestor”生命进化树，认为生命的共同祖先Cenancestor是一个原生物。原生物在进化过程中产生两个分支，一个是原核生物（细菌和古菌），一个是原真核生物，在之后的进化过程中细菌和古菌首先向不同的方向进化，然后原真核生物经吞食一个古菌，并由古菌的DNA取代寄主的RNA基因组而产生真核生物。 从进化的角度，微生物是一切生物的老前辈。如果把地球的年龄比喻为一年的话，则微生物约在3月20日诞生，而人类约在12月31日下午7时许出现在地球上。
食物的微生物污染是影响食品安全的重要因素之一,在其贮藏与加工过程中,快速、准确地检测食物微生物污染,是控制和保障食品安全的重要手段。目前,对于食品中大肠菌群的检测,国内多数采用的检测方法是依据中华人民共和国国家标准(GB1~31-94)和中华人民共和国国家质量监督检验总局的《食品卫生微生物学检验-大肠菌群的快速检测》(GB/T32-2002)。其中国标法检测结果的准确性、灵敏性均较高,但是操作繁杂、耗时较长,不适合于保质期短的食品检测;尽管快速检测国标法大大缩短了试验周期,操作也相对较易,但仍然需要使用大量玻璃容器和仪器,不便于现场操作。3M试纸快速检测方法由于前处理简单,处理时间短,在生产加工企业的现场检测中具有较大优势,但是其检测效果和检测限量是否达到国家规定的食品卫生标准还有待证实。对此,笔者进行了3M试纸的大肠菌群检测法与国家颁布检测标准方法的试验对比研究,并采取大肠菌群污染的自然状态未知浓度和模拟培养已知浓度的两种比较,以期为食品贮藏、加工过程的卫生质量控制应用研究提供基础依据。
微生物前沿、生物过程、计算生物学、生物医学……这些