分子生物学在医学中的应用论文摘要

《西安交通大学学报（医学版）》 （原名《西安医科大学学报》）创刊于1937年，是由国家教育部主管、西安交通大学主办面向国内外公开发行的国家级综合性医学学术刊物。报道内容刊物以该校重点学科为依托，主要报道该校在医学科研、教学、医疗等方面的新成果、新技术和新经验，报道国内外医学新动态、新理论、新进展。内容涉及基础医学、临床医学、预防医学、口腔医学、法医学、药学、祖国医学、生物工程等学科。主要栏目设有专家论坛、研究论著、专题研究、研究快报、调查研究、技术方法、经验交流等栏目。收录情况西安交通大学学报（医学版）2001年入选“中国期刊方阵”；是国家科技部《中国科技期刊论文数据统计源》核心期刊；《中文核心期刊要目总览》综合性医药卫生类核心期刊，被国际权威性的检索机构美国《生物学文摘》、《化学文摘》、荷兰《医学文摘》和俄罗斯《文摘杂志》所收录；在国内被《中国生物学文摘》、《中国药学文摘》及《中国医学文摘》的内、外、儿、基础、老年学、卫生学、皮肤科学、中医学等19种系列期刊作为固定摘录刊源。 刊名：西安交通大学学报(医学版)Journal of Xi'an Jiaotong University(Medical Sciences)主办：西安交通大学周期：双月出版地：陕西省西安市语种：中文;开本：大16开ISSN：1671-8259CN：61-1399/R邮发代号：52-39历史沿革：现用刊名：西安交通大学学报(医学版)曾用刊名：西安医学院学报;西安医科大学学报(中文版);西安医科大学学报创刊时间：1937该刊被以下数据库收录：CA 化学文摘(美)(2009)中国科学引文数据库(CSCD—2008)核心期刊：中文核心期刊(2011) 中文核心期刊(2008)中文核心期刊(2004)中文核心期刊(2000)期刊荣誉：中科双效期刊Caj-cd规范获奖期刊 1 总则 1 性质 《西安交通大学学报(医学版)》是由国家教育部主管、西安交通大学主办的医药卫生类综合性医学学术刊物。被国家科技部及相关机构分别确认为中国科技论文统计源期刊、医药卫生类核心期刊,被国际权威检索系统美国《化学文摘》 (Chemical Abstracts, CA)、荷兰《医学文摘库/医学文摘》(EMBase/Excerpta Medica, EM)和俄罗斯《文摘杂志》(Abstract Journal, AJ)收录，还被国内许多重要数据库及20余种二次文献收录。 2 栏目 《西安交通大学学报(医学版)》设有专家述评、专题研究、论著、调查研究、研究简报、技术方法等栏目。专家述评一般不超过4 000字，研究原著5 000字以内，其他不超过3 000字。 2 撰稿要求 1 总体标准 文稿撰写应遵照国家标准GB7713科学技术报告、学位论文和学术论文的编写格式，GB6447文摘编写规则，GB/T 7714-2005文后参考文献著录规则，GB/T 3179科学技术期刊编排格式等国家标准和国际期刊编辑规范和要求。 2伦理学声明 研究若涉及动物实验，应获得动物实验管理委员会的批准，并符合有关动物实验管理条例或/和美国NIH发布的实验动物应用和保护指南；若涉及人体实验应说明其程序是否符合人体试验委员会（单位性的、地区性的或国家性的）制定的伦理学标准并得到该委员会的批准，是否取得受试对象的知情同意。 3 撰写格式 论著应包括文题、作者姓名(不超过8人)、作者单位、中、英文摘要(包括目的、方法、结果、结论)、中、英文关键词(5-8个)、中图分类号[按《中国图书馆分类法》(第4版)标注]、正文(序言、材料与方法、结果、讨论)、参考文献。 4 标题层次 层次应分明。文中节段层次序号分别用“1”、“1”、“1”，一般以三级为宜。文内并列条文序号用圆圈码，如①、②、③……表示。 5 图与表 图与表应少而精，避免与文字重复。表应有表序和表题(中英文)。表格采用三线表。表内每一栏均应有表头，表内非公知通用缩写应在表注说明。图应有图序和图题(中英文)、图注。线条图请用电脑制作；图片请用电子版，以半栏5 cm、通栏5 cm宽度为限进行图片组合编排。表注、图注应适当详细，具自明性。所有的图表应在正文中该出现的地方注出。表题、图题同时标出中英文。 6 计量单位 严格使用法定计量单位，不再使用N(当量浓度)、M(克分子浓度)、百分比浓度[%(V/V)、%(m/m)\]等已废除的非标准计量单位和符号。如表示溶液中某物质的含量，应采用物质的量浓度单位(mol/L…)或质量浓度单位(g/L…)。 7 参考文献 本刊采用“顺序编码制”的著录方式，以文中出现顺序用阿拉伯数字编号排序。参考文献主要以作者亲自阅读的近1～5年公开发表的重要论著为主。常用参考文献书写格式如下： 期刊：[序号]作者 文题[J] 刊名，年，卷(期)：起-止页码 [注：作者1-3位全列出，每位间加逗号，3位以上仅写前3位，后加“等”或“et al”；外文文献作者姓前(全大写)名后(缩写，不加缩写点)] 专著：[序号]著者书名[M]出版地：出版者，年：起-止页 或：作者 文题[M]//著者书名 出版地：出版者，年：起-止页电子期刊：[序号]作者 题名[J/OL]刊名，年，卷(期)：起-止页[引用日期]获取和访问路径 8 作者简介 在首页地脚标注第一作者简介，内容包括姓名(出生年-)，性别(民族)，职称，学位，研究方向 E-mail地址。研究生论文还请注明通讯作者姓名、职称、E-mail地址。 9 基金项目资助 置首页地脚。格式如:国家自然科学基金资助项目(N 30200076),同时标注英文（如：Supported by ）。 3 投稿要求1 投稿 向本刊投稿请按操作提示进行网上投稿 2 声明 来稿文责自负，勿一稿多投。对一稿多投者将被列入黑名单,3年内不再刊登该作者文章。若稿件涉及经济利益或其他关系造成的利益冲突则应在投稿时说明； 3 审稿 来稿均需经本刊编辑部初审、2位同行专家评审(均为盲审)、编辑审阅加工等过程，作者可建议熟悉该专业的审稿人或因利益冲突而不适宜审阅该稿的审稿人姓名。 4 修稿 本刊对来稿有删改权，如不同意删改请事先声明；修改过程中，作者提交的最终修改稿的所有信息应准确无误，定稿后不应再改动，以确保网络预印版和纸质版的一致性。 5 版权 为保护作者及编辑部合法权益，在修稿期间双方签订版权合同。 6 付酬 来稿刊出后酌付稿酬，并赠送当期学报1本。本刊所付稿酬包含刊物内容网上传播使用费。凡是不同意将文章入编“万方数据-数字化期刊群”、“中国核心期刊(遴选)数据库”和《中国学术期刊(光盘版)》及其他网络数据库的作者，请在投稿时声明，以便另行处理。 7 投稿地址：西安市雁塔西路76号 《西安交通大学学报(医学版)》编辑部?邮政编码：710061]

分子生物学在医学领域的应用很多，比如说血，血小板，血细胞之类的。

CD44分子生物学特性及肿瘤关系的研究进展1 粘附分子CD44的研究进展 CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，在淋巴细胞，成纤维细胞表面均能检测到它的表达[1，2]。CD44蛋白属于未分类的粘附分子，其正常功能是作为受体识别透明质酸（HA）和胶原蛋白Ⅰ、Ⅳ等，主要参与细胞-细胞，细胞-基质之间的特异性粘连过程。 1 CD44基因的定位与结构 人类CD44基因位于11号染色体短臂上，有20个高度保守的外显子，完整基因组在染色体DNA上大约跨越50kb。CD44基因的外显子按表达方式分为两种类型：一种是组成型外显子，另一种是V区变异型外显子。组成型外显子有10个，其中转录片段存在于所有CD44转录子中。仅含组成型外显子的CD44转录子，称为标准型CD44（CD44S），它编码361个氨基酸（Aa）。V区外显子也有10个，在基因组上位于第5和第6个组成型外显子之间，在染色体DNA中专25kb。含有V区外显子的CD44转录子统称为CD44拼接变异体（CD44V）。V区外显子的拼接方式非常特殊，它们既能以连续方式拼接，也能以跳跃方式拼接，参与拼接的V区外显子多少不一，从而使转录片段长短不一。目前通过PCR技术在许多细胞系中已发现10多种CD44V。早期发现血细胞的CD44分子（CD44H）为标准型。最先获得克隆的拼接变异体是含有CD44V8-10的CD44V，它主要存在于上皮细胞又称为上皮细胞型CD44V（CD44E）。目前对CD44的研究较多，如V3、V5、V6。 2 CD44分子的结构特征 从已知的cDNA序列推测，CD44S由341个Aa组成，N-末端起台于21位Aa，前面20个Aa为信号肽，紧接着是胞质外区域的248个Aa，第249个Aa至269位的21个是疏水性的，为跨膜区，其后是胞质内C-末端尾部有72个Aa。另外还有一种CD44S的短尾形式，其胞质内C-末端尾部仅3个Aa。这种Aa序列具有Ⅰ类膜蛋白的特征。Lokeshwar等[3]用实验观察CD44S分子的合成过程，发现CD44分子首先被合成43KD的蛋白前体，接着在内质网内进行N-糖基化，形成58KD的N-糖基化前体，其后在高尔基复合体内进行O-糖基化和其它翻译后修饰，形成最终的85-95KD分子。 1 CD44S胞质外结构域特征：CD44S分子信号肽的N-末端的130Aa内编码了5个Asn-x-Ser/Thr序列和6个半胱氨酸残基，前者是5个N-糖苷键连接位点，其中3个被利用。6个半胱酸形成3个二硫键，形成球形结构域，这一球形结构域的重要特征是与动物连接蛋白有较高的同源性。有两个区域与透明质酸结合，分别是21-45Aa，135-195Aa。 CD44S的胞外近膜区存在一个56Aa的结构域（161Arg-216Asp），含有19个ser和Thr残基，常以2～4个成簇，这些是已知的O-糖基化位点特征，表明CD44有7个潜在的O-糖基化位点，其中4～5个位点被利用。此外这一区域含有4个Ser-Gly二肽，是潜在的硫酸软骨素连接位点。并且已得到证实，CD44分子加上硫酸软骨素后，与其结合细胞外基质的能力有关，包括Ⅰ型胶原、层粘边蛋白、纤粘连蛋白。 CD44分子细胞膜外区域有多个潜在的N-糖苷键连接位点，可连换多个碳水化合物，不仅与分子成熟过程中的翻译后修饰有关，也与细胞的功能状态有关。糖基化赋予CD44分子异质性，而其异质性与不同的O-糖基化程度有关，这种现象是CD44分子所特有的。这种新的糖基化调节方式在CD44S结合不同的细胞外基质成分的能力方面超着重要作用。深入研究这一分子的糖基化调节机制及生物功能方面的联系是十分有意义的。 2 CD44S胞质内结构特征：CD44S分子第249-269跨膜区的Aa序列中存在一个半胱氨酸残基，代表着一个潜在的脂酰化位点，这一位点可与软脂酸连接导致CD44分子脂酰化。在CD44S的胞质内区域尾部存在一结构域可与锚蛋白（ankyntn)结合。胞质内尾部序列有5个保守的丝氨酸残基，可作为蛋白激酶C（PKC）的底物被磷化[4]。上述脂酰化过程均可增强CD44S分子与锚蛋白的结合能力。比较CD44S和其他G蛋白的序列发现存在4个 同源性高的区域，实验证实CD44还是一种GTP结合蛋白，可结合GDP底物并且有GTP酶活性，显著增强CD44与锚蛋白的相互作用[5]。在CD44合成过程的各种中间产物，发现均有锚蛋白结合位点和结合活性，提示糖基化对锚蛋白结合位点的形成无关，并且结合锚蛋白对于CD44分子的输送和信号传导功能起重要作用。 3 CD44V的特征：目前发现10个V外显子编码的氨基酸中有约30%的丝、苏氯酸残基，具有广泛潜在O-糖基化位点，如：V6具有潜在的O-糖基化位点。V3外显子序列分析中发现Ser-Gly-Ser-Gly片段，它可结合硫酸肝素，结合硫酸肝素后的CD44V能与碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）结合肝素的表皮生长（HBEGF）因子结合，此结果提示这种CD44参与了传递细胞因子的过程。 3 CD44蛋白的主要功能 CD44基因编码合成的CD44蛋白具有一系列功能，包括：①作为导向性受体，调节淋巴细胞在血液和淋巴液间的运行，即淋巴细胞归巢或再循环[6]。②在淋巴细胞自溶、离体淋巴细胞的活化中发挥作用。③促进成纤维细胞和淋巴细胞与胞外基质成分如透明质酸、硫酸软骨素、纤维素、糖原等的粘附。④参与信号传递蛋白可影响蛋白在细胞间的位置，刺激其分泌特异的生长因子具不同的传导作用。⑤结合并中和透明质酸，该作用类似于清除间质组织。⑥调节药物的吸收及细胞对药物的敏感性。 究竟是何种CD44蛋白参与了何种调节，至今不清楚，选择性剪切过程中的多样性CD44蛋白与细胞结合的多样性也表明其中有重要的协间或调节功能[7]。有研究认为，跨膜的CD44糖蛋白，其膜外成分的变异与细胞粘附及导向作用有关[8]。，而胞内分子的尾部则与活化T淋巴细胞的潜在作用有关，而且胞内分子长度可调节蛋白激酶A/C位置，影响细胞的信号传递[9]。 2 CD44分子在肿瘤细胞中的表达 1989年Stamenkevie等使用不同的单抗分离和克隆了一个编码CD44标准型的cDNA，该基因不仅由淋巴样细胞表达，也可由不同的癌细胞系包括实体瘤典型标本中表达。在裸鼠研究某些人的转移癌时发现，CD44基因表达在转移中起作用。在大鼠胰腺癌细胞中非转移性细胞株只表达标准CD44（CD44S），而转移性细胞株表达CD44V，而且将CD44V变异体cDNA转染到非转移性的细胞株可引起转移[10]。Hofmann[11]用 notherm印迹法研究了20多个体外培养的人癌细胞系，也发现许多肿瘤组织能表达CD44V，但在不同细胞中V区外显子的转录拼接模式不尽相同。第一份临床肿瘤标本（结肠癌）的检测结果是1992年由英国年津大学病理实验室的研究人员首先报道的，以后人们应用免疫组化及RNA-cDNA-PCR印迹杂交在肺癌、结肠癌、食道癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、宫颈癌、肾癌和非何杰金淋巴瘤等中发现有CD44V表达。认为CD44V5、CD44V6的表达与肿瘤进展程度、转移及预后密切相关[12]。对于各种癌的实验研究已经进入肿瘤的发生、生长、转移增殖潜能及预后复发各环节与CD44分子表达的相关性，并提出实验数据和假说加以论证。 1 CD44分子与肿瘤的发生、生长、发展 癌的发生发展与癌基因（c-erb2、c-myc， ras）和抑癌基因（P53，nm23）等异常表达有关。有研究表明CD44异常表达可早于ras、P53等基因的异常，所以CD44的变异可能与ras部基因激活有关，是癌形成的一个因素[13]。Muider[14]对结肠癌肿瘤P53突变和CD44蛋白的研究，在结肠肿瘤各期中观察到有统计显著性的P53、CD44V6表达增强的趋势，P53和CD44V6表达间有显著相关性。P53被认为监视基因突变的“分子警察”，失活的P53可引起失控的肿瘤生长，因此P53突变引起失去最后控制时，V6‘表型获得明显的生长优势’。郭亚军等[15]用抗CD44的单抗以阻断其与透明质酸的结合，从而抑制CD44阳性的肿瘤细胞在体内的生长。他推测肿瘤细胞的生长可能是CD44阳性的细胞能与细胞外基质（ECM）中的透明质酸结合，从而获得附着性，并更易从ECM中获得生长因子。FasanoM等[16]报道成人非肿瘤患者肺泡Ⅰ型上皮不表达CD44V6。Ⅱ型上皮细胞和基 底细胞有CD44V6低量表达，Ⅱ型细胞与基底细胞属于干细胞，估计CD44V6对于肺生长有重要意义。所以认为CD44V6对于幼稚细胞生长和对于肿瘤细胞生长的机理可能相似。Lu等[17]发现在宫颈腺癌，无论是原位癌还是浸润癌均有CD44S弥漫表达，且浸润癌比原位癌明显高表达CD44S，几乎所有的原位癌与浸润癌CD44V9均增加，仅有较少的浸润癌表达CD44V4与CD44V6，而原位癌几乎不表达。说明宫颈上皮的癌变与CD44S和几种CD44V表达的量变和质变有关。 2 分子表达与肿瘤的转移、侵润 Matsumura等[18]用PCR技术检测了转移性结肠癌、非转移性结肠癌、正常结肠粘膜的CD44基因表达活性，发现转移性结肠癌细胞CD44变异拼接外显子表达明显增强。Pales等[19]用单克隆抗体检测以CD44表达情况发现，在人类结肠癌标本中，CD44V在浸润和转移的肿瘤中呈阳性表达，并认为CD44V的表达可作为结肠肿瘤浸润的标志。Herrtich[20]研究发现在一些分化不良的息肉中检测以V6外显子在肿瘤浸润中有增强的高频率表达，推测表达CD44V6的肿瘤细胞能够有利于癌细胞浸润和转移的条件。 Granberg等[21]发现在支气管类癌瘤患者，表达CD44S可减低远距离转移，CD44V77-8阳性肿瘤降低远距离转移风险，CD44V9阳性可降低远距离转移及死亡，而CD44V4、CD44V5、CD44V10与临床结果无关，证明支气管类癌瘤具有潜在恶性，CD44S、V7-8、V9阳性可能引起较好的临床结果，可以考虑作为预后评估的指标。 关于CD44V与肿瘤转移相关性的假说如下：激活的淋巴细胞和转移的癌细胞具有许多共性，即都有很强的侵出行为，均有可逆的粘附接触过程进行细胞迁移，在引流淋巴结中两类细胞皆能大量积聚和快速增殖，最后它们都能释放到循环系统，并通过外渗作用进入周围组织，这些相似性很可能基于CD44V6在二者中的共同作用，提示CD44V6在淋巴细胞活化中的作用机理与CD44V6在肿瘤转移中作用机理是相同的。即CD44V6高表达的癌细胞可能获得淋巴细胞“伪装”，逃避人体免疫系统的识别和杀伤，更易进入淋巴结，形成转移[10]。 有结论认为CD44V6变异体可能通过促进癌细胞与血管内皮细胞和细胞外基质的粘附，促进肿瘤细胞向基质侵袭，从而影响肿瘤细胞的迁移和运动能力。也有结论认为CD44V6可能通过影响癌细胞的骨架构像和分布，从而影响癌细胞的运动能力，而影响癌转移。 3 CD44分子对治疗肿瘤的展望 因为CD44V6对于肿瘤的发生、发展都有一定的相关性，推测CD44V6与肿瘤的分型、分化、分期有一定关系，如果这种关系得以明确，我们就可以通过癌组织CD44V6的表达程度来判断癌的类型，所处时期来进行适当治疗。 有研究认为CD44V6的表达要先于抑癌基因的表达，如果能够检测出CD44异常表达，则对于癌的早期诊断有密切关系。已有研究表明，CD44V6可用于诊断。如1997年吴忠等报道，应用RT-PCR技术检测CD44V6在30例尿液标本脱落细胞检测到CD44V6的表达，而在膀胱炎患者和正常志愿者未检测到CD44V6的表达。 肿瘤的转移是癌症患者的主要死亡原因，Seiter等[10]用抗CD44变异型蛋白的抗体与CD44变异型产物相结合，显示鼠癌细胞的转移潜能被终止，这也为大肠癌的治疗提供了又一个可能途径。 手术切除的肿瘤标本中如有CD44V6蛋白阳性，常会伴术后肿瘤再发或远处转移。CD44V6可作为一种有效的癌预后的标志物，用以指导治疗方案的制定。 CD44基因及其选择性剪切在癌的预测、早期诊断、病情进展、转移潜能与预后的估计等方面具有很大的潜在价值。随着分子生物学不断的发展，癌基因研究的不断深入，相信该基因对癌的预测、诊断、治疗、预后的价值会得到更加全面的认识。

范围很广。就举一个最简单的例子吧。比如发现了一种新蛋白。需要检测其分子量、性质、功能、在细胞中的含量及分布等，以及其编码基因。