分子生物学技术在国内防制虫媒传染病领域的应用分子生物学在医院感染控制中的应用和评价觉得合适与我索取全文
第一章 生物大分子制备和分析常用技术第一节 概论一、预处理和细胞的分离（一）选择材料及预处理（二）细胞的分离二、细胞的破碎及细胞器的分离第二节 电泳技术一、基本原理二、影响电泳的因素三、醋酸纤维素薄膜电泳四、琼脂糖凝胶电泳（一）核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系（二）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系（三）琼脂糖凝胶电泳基本方法五、常规聚丙烯酰胺凝胶电泳（一）聚丙烯酰胺凝胶聚合原理及相关特性（二）聚丙烯酰胺凝胶电泳原理（三）操作方法六、SDS?聚丙烯酰胺凝胶电泳原理七、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳八、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（一）等电聚焦的原理（二）pH梯度的形成九、双向凝胶电泳十、染色方法（一）蛋白质染色（二）核酸染色第三节 色谱技术一、色谱技术的概念二、色谱法的分类（一）按两相所处的状态分类（二）按色谱的分离机制分类三、常用的色谱方法（一）凝胶色谱（二）离子交换色谱（三）亲和色谱（四）高效液相色谱（五）毛细管电泳第四节 离心技术一、离心理论（一）离心分离的原理（二）相对离心力和离心时间（三）离心机的分类二、离心分离的种类（一）差速离心法（二）密度梯度离心法三、离心操作注意事项第五节 分光光度技术一、基本原理——朗伯?比尔定律二、分光光度技术的应用（一）定量分析（二）定性分析第二章 蛋白质、核酸的提取与分离第一节 蛋白质的提取、分离纯化及定量一、蛋白质（包括酶）的提取（一）水溶液提取法（二）有机溶剂提取法二、蛋白质的分离纯化（一）根据蛋白质溶解度不同进行分离的方法（二）利用色谱技术对蛋白质进行分离纯化（三）利用电泳技术对蛋白质进行纯化分离（四）利用超速离心分离制备蛋白质（五）膜分离技术在蛋白质分离纯化中的应用（六）重组蛋白的分离纯化（七）分离制备蛋白质的一个实例三、蛋白质的定量第二节 DNA的提取与分离一、质粒DNA的提取与分离（一）质粒提取的一般步骤（二）质粒DNA的小量制备（三）质粒DNA的大量制备二、染色体DNA的提取与分离(一)从培养细胞中提取DNA(二)从组织中提取DNA(三)从大量血样的白细胞中分离高分子量DNA(四)从小量血样的白细胞中分离高分子量DNA(五)高分子量DNA的小量快速制备第三节 RNA的提取与分离一、组织培养细胞胞质RNA的制备二、胍盐法制备总RNA(一)氯化铯纯化培养细胞的RNA(二)氯化铯纯化组织中的RNA(三)一步法从培养细胞或组织中分离RNA三、细菌RNA的制备(一)从革兰阴性菌中分离高质量RNA(二)革兰阳性菌RNA的分离(三)革兰阴性菌RNA的快速分离四、poly(A)+RNA的制备第四节 核酸的定量测定一、紫外分光光度法测定DNA和RNA的含量二、电泳比较法（溴化乙锭荧光法）三、定磷法测定核酸四、二苯胺法测定DNA含量五、地衣酚法测定RNA含量第三章 PCR技术……第四章 分子杂交与印迹技术第五章 分子克隆技术第六章 外源基因转移技术第七章 蛋白质表达技术第一节 外源基因在原核细胞中的表达第八章 分子标记技术第九章 分子改造技术第十章 测序及人工合成技术第十一章 基因组学技术第十二章 蛋白质组学技术第十三章 生物芯片技术第十四章 生物信息学技术附录参考文献
后基因组时代的分子生物学技术2000年6月26日，人类基因组计划(human genome project，HGP)与Celera公司的负责人共同宣布了人类基因组工作框架图的完成，2b01年2月分别将自己测定的框架图发表在"Nature"和"Science"向大众公布。同时，模式生物基因组计划(model organism genome project，MOGP)已完成了大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)、果蝇(Drosophila melanogaster)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)的基因组全序列测定和图谱的绘制等工作。另外小鼠(Musmusculs)等哺乳动物基因组计划也取得了很大进展。所有这些，标志着基因组学研究已由静态碱基测序的结构基因组学(structural genomics)转入到和态生物学功能注释的功能基因组学(functional genomics)即后基因组时代(post-genomeera)。前者代表基因组研究分析的早期阶段，以建立生物体高分辨遗传、物理和转录图谱为主；后者代表基因组研究分析进入了一个新阶段，即利用结构基因组学提供的信息，系统研究基因的功能，它以高通量、大规模试验方法及统计与计算机分析为特征。后基因组时代的分子生物学技术主要包括功能基因表达概况、功能蛋白质组学、比较基因组学和生物信息学等技术。1 功能基因表达概况研究 基因表达概况是比较不同组织和不同发育阶段，正常状态和疾病状态，以及体外培养的细胞中基因表达模式的差异。基因表达分子模式研究，一是制作mRNAs的表达谱，二是研究蛋白质表达谱即蛋白质组学(这proteomics)。在转录水平研究基因表达的经典方法有RT-PCR、RNase保护试验、RNA印迹杂交等方法，但这些方法只能一次做一个或几个基因。目前，随着各种生物基因组计划的深入研究，必须借助新的技术如微点阵(micrioarray)和基因表达系列分析(serial analysis Of gene expression，SAGE)等技术进行大规模、高通量的基因表达分析。1．1 差别显示 1992年真核生物mRNA的差别显示(differential display，DD)技术建立，它可以快速而可靠地同时比较两个以上的细胞群体或组织的基因表达差异。经DNase处理的高纯度的总RNA用T11XY引物(X＝A／C／G；Y＝A／C／G／T)进行反转录，其产物作为下一步PCR的模板，PCR底物使用标记的核苷酸，使用与反转录相同的T11XY引物和随机引物10mer各一套。这样就可以扩增出一个亚群的总cDNA，然后总cDNA进行凝胶电泳放射自显影，通过cDNA带谱的比较就可鉴定出差异扩增的cDNAs。1．2 代表性差异分析 代表性差异分析(representational difference analysis，RDA)先是用于鉴别2个复杂基因组的差异而建立的，以后结合减法杂交和PCR技术的优势用于分析基因差别表达。首先，用从2个不同的群体获得的mRNA，分别称为tester和driver(对照)，进行反转录，用多位点限制性酶消化后，在cDNA的两端连上linker，然后进行PCR~产生不同基因池的最初代表。tester和driver的cDNAs的linker经消化后，再在它的两端连上一个新的linker，尔后把tester和driver的cDNAs以1：100的比例混合，过量的drivercDNAs是为了促进在2个cDNA间的杂交，然后通过其两端的引发位点进行PCR，只扩增tester cDNA产生的同源双链。RDA的主要优势是，通过稀有表达的tester序列的一个富集步骤，只特异性扩增存在于一个cDNA池中的片段。1．3 表达序列标签 一个细胞或生物的基因表达模式决定了其基本的生物学性状。在微生物中编码区域的鉴定可以通过对整个基因组测序而实现。对于真核生物存在着基因的非邻接组织结构，这就需要表达序列标签(expressed sequence tags，ESTs)。ESTs的最重要的特征之一是能够用于鉴定由基因组得来的编码区。重叠的ESTs序列可以装配为一个个重叠框(contig)，从而可以确定一个基因的整个mRNA序列。利用产生的数据库和ESTs，对区分表达和未表达的基因组区域将会有很大的帮助。
铁铁在与过氧化物阴离子和后来亚铁的反应减少iron被氧化和因而电烙可能引起高度易反应 在Fenton反应的hydroxyl基础。 概略反应， 指Haber-Weiss反应，发生 在过氧化物的hydroxyl根本生产和减退 concentration [15]。 低分子大量铁复合体 能也的are导致ROS [16， 17]。 We以前展示了那铁剥夺 stimulates从铁枸橼酸盐的铁举起由人的erythroleukemia K562细胞和那这刺激依靠 protein综合。 然而，没有的介入任何知道 与一个建议的角色的proteins在非铁传递酶铁运输across查出了质膜[18]。 存在 铁举起的transport系统从低分子大量 complexes包括铁枸橼酸盐是有大量文件证明的[19– 23]。 然而，在运输介入的具体分子 system保持阴暗，即使证明of这些分子高度富挑战性主要归结于 在一些铁混乱的their潜在的介入。 为了辨认候选人膜分子 the运输系统，我们使用了两相分成 允许细胞膜分数的隔离的system by具体方式。 随后，我们使用了 high-resolution第2电泳法和计算机分析 蛋白质的for侦查与增加的水平的在膜 K562在铁剥夺之下的细胞的fraction。 蛋白质 增加的with平实被辨认了使用液体 chromatography与纵排质谱分析结合了。 We辨认了二这样蛋白质，即，二磷酸果糖酶A (ALDA)和电压依赖阴离子渠道2 (VDAC2)。 The二磷酸果糖酶A和VDAC2增加的表示 K562在铁剥夺之下的细胞被证实了 western污点分析。
什么类型的？如果是医学类型的丁香园上有。
NrrA直接调控表达hetR在异形胞 分化的鱼腥藻菌株7120 ？ Heterocysts是终末分化细胞蓝藻 有能力的固定大气中的氮。经 限制结合氮在中期，尤其是营养 细胞改变其形成heterocysts经常 间隔10至15细胞（ 10 ， 12 ， 29 ） 。在丝状蓝藻 鱼腥藻。 7120株，约10 ％的 基因的染色体估计上调 在异形胞发展（ 6日， 7日） 。 Heterocysts显着 不同于植物细胞的生理和形态 问题（ 30 ） 。异形胞的发展提供了一个极好的 模型为研究细胞分化和多模式 形成。 该hetR基因是一个主基因调节异形胞 分化。虽然突变基因块早期hetR 步骤分化，额外拷贝hetR结果的形成 多个连续heterocysts （妇幼保健型） 根据氮枯竭条件（ 4 ） 。表达hetR 从皮特启动，这是受铜，诱导 异形胞分化细胞氮不论地位 （ 5 ） 。的水平增加hetR后不久，誊本 氮被剥夺，其表现是局部heterocysts （ 2 ） 。上调的hetR取决于ntcA （ 9 ） 。 该ntcA基因，这是发展所需要的异形胞 （ 9 ， 28 ） ，编码一个转录调节，全球控制 氮代谢蓝藻（ 19 ， 27 ） 。该NtcA 蛋白质，属于环腺苷酸受体蛋白家族 细菌监管，结合启动子区域含有 序列签字GTAN8TAC （ 12 ） ，和8基地回文 序列， TGTAN8TACA ，是表明是最佳 NtcA结合序列的体外筛选（ 15 ） 。那个 DNA结合活性的NtcA提高了2 - oxoglutarate （ 2 146/03 ） （ 17 ， 26 ） ，和NtcA依赖的转录 glnA启动蓝藻Synechococcus sp 。提高应变6803 7942 在场的2 146/03体外（ 25 ） 。 2 146/03拟 一种信号分子，细胞传递信息 氮地位（ 24 ）和触发异形胞分化 （ 17 ） 。该NtcA依赖推动者hetR不 包含NtcA识别序列，并NtcA不 绑定到DNA片段相应的hetR启动 地区（ 23 ） 。因此，分子基础的NtcA依赖 调节hetR仍然不明。 最近，我们发现， nrrA基因（ all4312 ） ，编码 反应调节的OmpR家庭，参与了 调节异形胞发展（ 6 ） 。该基因是nrrA 上调氮剥夺，但诱导nrrA 不发生在ntcA突变株（ 6 ， 22 ） 。
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【综述】几种用于发现未知病毒核酸序列的技术及其应用翁康生 病毒是引发人类传染性疾病的主要病原体之一, 它们极大地威胁着人类健康。目前还存在人类尚未认知或新出现的病毒, 随时可能严重危害人类健康安全〔1 - 3〕。及早地发现,鉴别未知的或新出现的病毒, 是有效的预防和控制的先决条件之一。因此, 建立、储备、改良、发展、乃至创新应用于发现、鉴别未知或新出现病毒的技术方法是十分必要的。近20 多年来, 常采用传统的微生物学技术方法和现代分子生物学技术方法相结合的途径, 发现和鉴别未知病毒。通过细胞培养的方法分离病毒、电镜观察、用已知病毒的抗血清建立的免疫学方法作排他性检测、用已知病毒核酸序列建立的PCR、杂交等方法, 作特异核酸序列的检测、用分子生物学技术获得未知病毒核酸序列, 查询基因数据库, 检出并确定未知病毒基因组序列, 最终发现鉴别出未知病毒。对于无法用细胞分离培养的未知病毒, 有的采用免疫学与分子生物学技术相结合, 筛选获取病毒特异抗原编码基因的克隆, 进而发现鉴别出该病毒。更多的则是采用相应的分子生物学技术, 从被检样品中发现获取未知病毒的核酸序列,进而发现鉴别未知病毒。无论未知病毒是否可以用细胞培养分离, 最终对其基因组序列的测定分析, 是鉴别和判断的决定性依据之一, 而获取未知病毒的核酸序列是前提条件。从少量样品中, 从高度复杂的宿主细胞核酸物质中, 分离、扩增、获取足够量的无基因序列资料的未知病毒的核酸片段, 供进一步克隆、测序、生物信息学分析, 是用分子生物学技术发现、鉴别未知和新出现病毒的关键之一〔4〕, 也是最终测定分析, 拼接出未知和新出现病毒基因组序列的瓶颈步骤。病毒所携核酸物质有DNA 和RNA 之分, 可采用的技术方法也有所不同, 现将有关技术与其应用作一简介, 以供参考。1 代表性差异分析法代表性差异分析法是为寻找分析两个生物样品复杂的基因组间有何差异而发展建立起来的分子生物学技术方法, 并不断得到演化, 发展和应用。病毒感染宿主细胞后, 与未感染的同类细胞相比, 二者核酸物质间的差异主要在于是否存在病毒核酸。消减去二者核酸间相同序列的背景部分, 扩增、比较、选取余下可能存在差异的部分, 进一步分析以发现未知病毒的核酸序列。病毒的核酸结构各有不同, 可选用相应的代表性差异分析法, 见表1 。111 DNA 代表性差异分析法(DNA Representation differenceanalysis , DNA RDA)此方法是Lisitsyn 等〔5〕利用核酸消减杂交技术〔6〕、PCR 方法和双链DNA 热变性后互补链退火复性的二级动力学原理〔7 - 8〕作者单位:上海市疾病预防控制中心 200336表1 病毒核酸类型与各代表性差异分析法的选用病毒核酸类型DNA RDA c DNA RDA非rRNA 序列6 核苷酸引导c DNA RDAds DNA 线状√ds DNA 环状√ss RNA polyA( + ) √ss RNA polyA( - ) 3 √ds RNA polyA( - ) √ 3 负链ss RNA polyA( - ) 视病毒在宿主细胞的转录机制而定。而建立的。方法中将需分析的样品DNA(Test DNA ,T- DNA) 和对照DNA(Driver DNA ,D - DNA) 设为二组,分别用同一种限制性内切酶酶切处理,并接上5′端去磷酸化的人工接头,补齐接头后,加入与接头序列互补的引物作PCR 扩增。切除扩增产物上的人工接头后,切出的T - DNA 连上第二种人工接头,变性后与过量的变性D - DNA 杂交。通过杂交,消减去T- DNA 中与D - DNA 中同源的核酸序列,而只存在于T - DNA 中的靶序列DNA(Target DNA) 则自我退火复性,其两端连有第二种人工接头。加入与第二种接头互补的引物作PCR ,只有靶序列DNA呈指数扩增,因而得到进一步富集。进过如此重复的几个轮回后,以电泳检测比较T- DNA 和D - DNA ,将T- DNA 中呈现的差异部分作分离,克隆,序列分析。Lisitsyn 等以10μg 人淋巴细胞基因组DNA 作为D - DNA ,在相同的人DNA 中加入相当于单拷贝量的120 pg 腺病毒DNA作T- DNA。以此作为实验模型,用DNA 代表性差异分析法成功的寻找、鉴定出外加入的腺病毒DNA 序列。应用此技术,Chang 等〔9〕在艾滋病相关的卡波西肉瘤(Kaposis Sarcoma) 中发现一段类似人类疱疹病毒的基因, 并由此发现一种新的病毒HPV8。以后人们又以此技术发现鉴定了HPV6、TTV 病毒、黄热病毒样基因组、MDV 等〔10 - 13〕DNA 病毒。112 cDNA 代表性差异分析法(cDNA Representation differenceanalysis , cDNA RDA)Hubank 等〔14〕针对mRNA 所含序列相对简单的特点,提出了cDNA 代表性差异分析法。它的基本原理与DNA RDA 相同,主要不同在于,采用识别4 核苷酸序列的限制性内切酶,它的识别位点在mRNA 反转录成的cDNA 中出现的频率更高,平均酶切片段长度约256 bp ,保证了cDNA 序列群中绝大多数序列,至少被切出一个片段可扩增,供差异分析,分离鉴定。cDNA RDA 技术相对经济,可高效灵敏地用于非常少的起始材料而获得结果〔15〕。具有polyA( + ) - RNA 病毒,其核酸可类似于mRNA 分离纯化,因此可应用此技术。利用cDNA RDA技术,发现鉴定了TiV、MenV ,等〔16 ,17〕RNA 病毒。113 非rRNA 序列6 聚核苷酸引导反转录的cDNA RDA中国预防医学杂志2007 年6 月第8 卷第3 期 Chin Prev Med , June 2007 , Vol18 No13 ·317 ·© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing H All rights ( - ) - RNA 病毒,其核酸物质不似于mRNA ,需和宿主细胞总RNA 同时分离,并用随机引物作反转录。因为宿主细胞总RNA 中rRNA 约占80 % ,由于竞争反应、靶序列信号被湮灭等原因,从这样的总RNA 抽提物中,用随机6 聚核苷酸引物引导反转录的cDNA RDA 技术,发现鉴别polyA( - ) - RNA 病毒核酸序列是困难的。Endoh 等〔18〕罗列了6 聚核苷酸所有可能的排列组合,共计4 096 个序列模式,以大鼠18S、518S、28S 等rRNA、微卫星重复序列、SARS - CoV、BI - 3 病毒等的序列数据为模型,筛选出在rRNA 序列中出现频率极低或不出现的6 聚核苷酸序列模式共96 种。将这些序列分别合成并混合后,称之为非rRNA 序列6 聚核苷酸引物。生物信息学分析96 种序列模式在哺乳动物病毒科具代表性的1 791 个病毒基因组序列中出现的频率,数据表明,非rRNA 序列6 核苷酸引物可引导绝大多数病毒的cDNA 合成。分别用非rRNA 序列6 聚核苷酸引物和随机6 核苷酸引物作cDNA 反转录效率、cDNA RDA 试验,结果表明,二类引物对人工合成的RNA (二类引物在其序列中出现的频率相似) 反转录效率几乎相等,而前者对细胞总RNA反转录效率远低于随机引物。用二类引物作cDNA RDA ,检测人工合成的RNA ,前者灵敏度是用随机引物的30 倍。在模拟实验中用非rRNA 序列6 聚核苷酸引物引导反转录,串联cDNARDA 技术,检测鉴别出感染细胞的BI - 3 和SRAS - Cov 核酸序列片段。此方法能从1μg 总RNA 中检测出3 ng 的外来RNA ,其检测灵敏度不及普通的PCR 检测方法,但对于检测鉴别在宿主细胞中复制,但不知其基因序列的poly A( - ) - RNA 病毒而言,也是一个可选择的方法。114 抑制消减杂交cDNA RDA 技术结合消减杂交和PCR 抑制作用〔19〕的技术原理,Diatchenks 等〔20〕等发展出了抑制消减杂交技术( suppressionsubtractive hybridization ,SSH) 。与前两种RDA 技术不同点在于,SSH 技术将内切酶酶切处理的T - cDNA 分为两份,分别接上不同序列的去磷酸化的接头1 和2 ,分别于过量的D - cDNA作第一轮杂交。杂交过程中两组中的单链T - cDNA 浓度趋同,T- cDNA 中的非靶序列单链cDNA 与D - cDNA 中相应序列形成杂交双链而被消减, T - cDNA 中差异表达的单链cDNA被显著富集。合并一轮杂交物,加入过量变性D - cDNA ,作第二轮杂交。合并的二组份一轮杂交物中剩下的趋同化、经消减杂交后的单链T - cDNA 能互补杂交, 可以形成: 原组内T- cDNA 单链间的杂交、T - cDNA 与D - cDNA 单链间的杂交、二组间T- cDNA 单链间的杂交。补齐杂交反应后双链cD2NA 末端,用分别与接头1 和2 的外侧部分序列互补的寡核苷酸为引物,作PCR 扩增。二组份间T- cDNA 互补单链杂交物,因两端分别具有接头1 和2 ,可被指数扩增;T - cDNA 与D -cDNA 杂交物和剩余单链T- cDNA ,因一端具接头序列,被线性扩增;而同组间T- cDNA 杂交物两端具反转重复长序列,因抑制性PCR 效应,在PCR 反应循环中分子内退火形成稳定的“锅柄结构”〔19〕而不被扩增。因此,SSH 技术通过二轮消减杂交和抑制性PCR 特异扩增,使假阳性大大降低,提高了检出低丰度靶mRNA 的灵敏度。Hu 等〔21〕应用SSH 技术,结合反转录酶的模板切换(tem2plate - switching) 功能, 以HCV RNA 阳性血清体外感染的人MOLT- 4 急性淋巴母细胞白血病T 细胞系为模型,通过反转录合成全长cDNA、抑制性消减杂交、消减的cDNA 文库构建、反相斑点杂交筛选,在被筛的96 个克隆里,T- cDNA 探针杂交呈特异阳性的16 克隆中,序列分析后得到4 个插入HCV 序列的克隆。2 非特异多重引导滚环式扩增法乳头瘤病毒、痘病毒等,其基因物质为环状DNA 分子。在事前未知基因序列的情况下,发现和鉴别这类病毒核酸序列还可选择非特异多重引导滚环式扩增法(multiply primed rolling -circle amplification ,RCA) ,扩增、分离、获取其基因片段供进一步分析。自然状况下,环状DNA 经常以滚环方式进行复制。Dean等〔22〕应用随机6 聚核苷酸作引物,加入φ29 DNA 聚合酶,以质粒DNA 和噬菌体DNA 为模型,建立了多重引物引导的滚环式扩增法。φ29 DNA 聚合酶可长距离( > 70 000 nt) 地结合于DNA模板,进行链置换DNA 合成。而随机6 聚核苷酸引物可多位点的与单链环状DNA 互补复性。在φ29 DNA 聚合酶作用下,以随机引物引导,合成与模板互补的DNA 链。当合成链延伸到与模板结合的随机引物5′端时,在φ29 DNA 聚合酶的链置换活性作用下,下游被延伸的随机引物链被“甩”出模板。而上游的延伸链继续在环状模板上复制合成。同时,被从单链环状模板上“甩”出的互补链,又成为新的模板,随机引物与之结合,在φ29 DNA 聚合酶作用下,继续以枝杈的形式进行链延伸和链置换,最后以双链DNA 串联体形式释放。用此法可使1 ng 纯pCU18 环状DNA 模板延展式地扩增至107倍。Rector 等〔23〕以此原理建立了不依赖已知的特定基因序列(非序列依赖性) 的多重引导滚环式扩增环状DNA 病毒基因组方法,并应用其扩增获取了HPV 16 的基因组DNA。在接近实样的试验样品中,由于稀释倍数和环状DNA 分子较大等原因,将HPV 16 基因组DNA 扩增了214 ×104 倍。3 病毒颗粒相关核酸的非序列依赖性PCR 扩增病毒核酸可包裹于病毒外壳内,病毒的蛋白外壳或脂膜对病毒核酸具有保护作用。而病毒颗粒具有不同于细菌或其他真核细胞的理化特性。利用这样的特点Allender 等〔24〕和Stang等〔25〕各自建立了病毒颗粒相关核酸的非序列依赖性PCR 扩增方法(sequence - independent amplification) 。两种方法的共同点在于,依据病毒颗粒小、具一定密度,用0122μm 滤器过滤、或再串上超速密度梯度离心,从样品中分离出病毒颗粒,DNA 酶酶解游离的DNA ,裂解病毒颗粒,抽提获取较纯的病毒颗粒相关核酸。Allender 等〔24〕借鉴RDA 原理,对病毒颗粒相关核酸用限制性内切酶酶切后,作非序列依赖性单引物PCR 扩增( sequence -independent single primer amplification ,SISPA) :将抽提获取的DNA或RNA 分别补齐,合成第二链DNA ,或反转录,合成双链cDNA。限制性内切酶酶切后,酶切片段两端连接一种接头,并以与接头同序列的单一寡核苷酸为引物,作PCR 扩增。扩增产物进一步克隆与序列分析。用此法检验HBV 阳性血清和GBV - B 阳性血清样品,结果在相当于106/ ml 个基因组拷贝浓度的50μl样品中,可重复试验检出相应的病毒基因片段。Stang 等〔25〕则在得到双链DNA 或双链cDNA 后加入k - 随机引物,此种引物5′端含有20 个固定序列的核苷酸,3′端则有·318 · 中国预防医学杂志2007 年6 月第8 卷第3 期 Chin Prev Med , June 2007 , Vol18 No13© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing H All rights 核苷酸随机简并序列。与变性模板退火时,6 核苷酸随机简并序列随机地与模板相应序列互补退火,在T4 DNA聚合酶作用下作链延伸。然后在延伸产物中加入k - 随机引物中固定序列部分的20 寡核苷酸作引物,进行PCR 扩增。扩增产物电泳分析、克隆、测序。用此方法检验由实时- PCR 定量,包括病毒颗粒相关核酸及游离核酸在内的病毒基因组拷贝数为109/ ml 的Cox - 3 和MAV - 1 培养物。前者的12 克隆中,9 个克隆插入有肠道病毒的四个不同区域的同源基因片段;而6 个MAV - 1 中分离的克隆内,5 个含有99 % 同源MAV - 1 基因片段。基于病毒颗粒分离纯化、DNase 处理、病毒颗粒相关核酸的非序列依赖性PCR 扩增,获取、鉴定未知病毒的基因片段,尽管灵敏度不够高,但其实验时间较短,步骤相对简单,对于病毒拷贝数高,时间紧急的样品鉴别,是较适宜的一套方法。病毒的种类、结构、特性多种多样,感染病毒后需要检验的样品又各不相同,因此用于发现鉴别未知病毒的核酸序列的技术,也不是固定不变和完全通用的。以上的技术方法各有优缺点和适用范围。而针对扩增获取未知病毒基因组序列片断,这一发现鉴定未知病毒的分子生物学技术的要点或瓶颈,必然还会有新的改进、创新技术出现,将会更快、更灵敏、更简便、更准确的发现鉴别未知病毒。参 考 文 献〔1〕 Drosten C , Gunther S , Preiser W, et al1 Identification of novel corona2virus in patients with severe acute respiratory syndrome1 N Engl J Med ,2003 , 348 : 1967 - 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扫描版（部分文字乱码）分子生物学技术在动物营养学上的应用及其发展前景(上)摘要：本文从营养与基因表达调控、基因工程、转基因等三个方面综述了分子生物学技术在动物营养学中应用的最新进展，并对动物营养学的发展前景作了展望。自从发现双螺旋结构以来，分子生物学取得了飞跃性的发展，形成了以基因工程为主要内容的的现代分子生物学技术@在生物学、医学等研究中得到广泛的应用，几乎渗透到生命科学的每一个领域，成为研究和揭示生命现象本质和规律的一种重要工具。当前，世界各国都将分子生物学纳入本国科技发展的重点，可以预见，"21世纪将是生命科学的世纪，全世界所共同面临的许多重大问题，诸如饥饿与营养、疾病、能源与环境污染等问题的根本解决，在很大程度上将依赖于分子生物学技术的发展和应用。及时全面的了解和掌握分子生物学理论和技术的发展动态及研究热点，将具有重要的意义。就目前来看，我国动物营养学方面的研究工作基本尚处在机体水平：即在机体水平上研究各种营养素对机体的作用、在机体内的代谢与平衡、影响机体吸收营养素的因素等问题。分子水平方面的研究还刚刚起步，尚处于初级阶段。动物机体的生理病理变化，如生长发育、新陈代谢、遗传变异、免疫与疾病等，就本质而言，都是动物基因的表达调控发生了改变的结果，许多生理现象的彻底阐明，最终需要在基因水平上进行解释，所以动物营养学的各方面研究应与分子生物学技术，尤其是基因工程技术相结合，从分子水平上来解释各种营养素对机体的作用机制、动物机体的生理病理变化等问题，这也是动物营养学今后发展的必然趋势之一。*营养与基因的表达调控随着分子生物学技术不断发展，越来越多与代谢有关的动物基因被克隆和鉴定，人们对营养与基因调控的关系越来越感兴趣。营养与动物基因表达调控的研究已成为当今动物营养学研究的一个热点领域；如何通过改变日粮组成成分来调节体内相关基因的表达，从而使动物体处于最佳生长状况已成为现代动物营养学研究的重点；通过营养对动物基因表达的调控途径及其机制的研究，将为人们如何更加有效地对某些特定有益基因的表达提供理论依据。已有大量证据表明，主要的营养物质如糖、脂肪酸、氨基酸以及一些微量元素（如锌）对动物体内许多基因的表达都有影响。!"!营养对磷酸烯醇式丙酮酸激酶基因表达的调控PEPCK是动物肝和肾中糖元异生作用的关键酶，目前较为研究清楚的是日粮中糖含量对PEPCK基因表达的调控。糖类对PEPCK的调控主要是通过对其启动子的作用，当动物进食含有大量糖类的饲料时，PEPCK的启动了就会关闭，从而导致ABA8C水平大幅度下降，而当禁食或饲喂高蛋白质低糖的饲料时，PEPCK的启动子就会处于打开状态，从而PEPCK水平得到大幅度提高，其具体调控机制大致如下：?556D4（*0)#）等通过对大鼠ABA8C基因的分析表明，ABA8C基因启动子位于1 E+至F#,之间，其中包含了大多数激素调控基因转录所必需的组织特异性调控元件。日粮中糖的含量水平会影响胰岛素、;?GA等激素的相对水平，而胰岛素与;?GA等激素相对水平又会影响到特异性!"#!转录因子的活性，特异性转录因子与$%$&’启动子上的相应调控元件结合与否，又会影响$%$&’基因的表达(，)。现有大量证据表明，$%$&’基因一系列复杂的调控元件中，有包括胰岛素、甲状腺激素、糖皮质激素、视黄酸对$%$&’基因转录的正调控元件和胰岛素对$%$&’基因转录的负控调元件，在上述调控元件中，*+,$调控元件-&%/和$(-0/调控元件是最重要的两种，*+,$对$%$&’基因的诱导和胰岛素对$%$&’基因的抑制作用就是通过这两个调控元件来进行调控的。因此，当进食含大量糖类的饲料时，由于*+,$水平的急剧下降以及胰岛素水平的急剧上升，从而抑制$%$&’基因的表达，导致肝中$%$&’水平大幅度下降，当禁食或饲喂高蛋白低糖的饲料时，则情况恰好相反。!"#营养对脂肪酸合成酶（$%&）基因表达的调控1+2是脂肪酸合成的主要限制酶，存在于脂肪、肝脏及肺等组织中，在动物体内起催化丙二酰&3+连续缩合成长链脂肪酸的反应，其活性高低将直接控制着体内脂肪合成的强弱，从而影响整个机体中脂肪的含量。有关营养与1+2基因的表达调控，2!4!&56789-:;;(/曾报道：糖类能诱导1+2基因的转录，而脂肪则抑制这种诱导的表达。&3<=9等（:;;>）试验研究也表明，当给禁食后的成年鼠饲喂含高糖低脂肪的饲料时，1+2基因的表达就增强，而且相应的?@+含量的增加幅度与碳水化合物的摄入量也成正比。糖类对1+2基因表达的影响。为区分活体中激素水平变化的协同作用，13
什么类型的？如果是医学类型的丁香园上有。
楼上两个都是翻译机翻的楼主也真小气，才5分，50分我就帮你翻译了我以前就是搞这个的
朋友现在红领巾应该不多了，不会有人免费帮你找一篇文献还翻译给你的哦。你还是自己先根据标题找一下文献，然后请专门做生物类翻译的朋友帮你翻译吧。如果身边没有这样的朋友，高校译云可以帮到你哦，望采纳，谢谢
专业书籍翻译成中文的就有不少，像《分子克隆》(Molecular Cloning)就有几百页。 一些一般的信息可试试联合国的一些机构，如粮农组织（)，对照其英文版和中文版。 另外，国内有一些专业期刊同时具有中文版和英文版，尽管其文章不完全对应，有的甚至相对独立，不称之为中、英文版，但很多文章是同时刊登于中英文版上的，如《中国科学》、《科学通报》、《自然科学进展》、《中国农业科学》、《中国水稻科学》等等，可上这些期刊的网站查询，有的需要用户名和密码，有的不需要。
最新的文献与其学科思想，是比较先进的，需要有一个完善的知识体系架构，才能够理解最新的思想。
1 曾幼波陈琴 抗癌新药--卡莫氟(HCFU) [期刊论文] -药物生物技术2003(2) 2 姚学清林锋 肿瘤多药耐药和进展期大肠癌耐药细胞株建立研究进展 [期刊论文] -药物生物技术2003(9) 3 何娟刘晓磊彭文兴 P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药逆转机制研究进展 [期刊论文] -药物生物技术2006(3) 4 Warren LJardillier JMalarska A Increased accu-mulation of drugs in multidrug-resistant cells induced by lipo-somes 1992 5 Bennis SChapey CClouveur P Enhanced eytotoxic-ity of doxorubicin encapsulated in polyisohexyl-cyanoacrylate nanospheres against multidrug-resistant tumor cells in culture 1993 6 Cuvier CRoblot-Treupel LMillot JM Doxorubicin-loaded nanospheres bypass tumor cell multidrug resistance 1992(3) 7 Nermti FDubemet CFessi H Reversion of multj-drug resistance using nanoparticles in vitro:influence of the nature of the polymer 1996 8 张炎鲁功成张润清陈晓春 阿霉素纳米粒的制备及体外逆转人膀胱癌细胞多药耐药的实验研究 [期刊论文] -药物生物技术2002(3) 9 Verdiere ACDubemet CNemati F Reversion of muhidrug resistance with polyalkyleyanoacrylate nanoparti-cles:towards a mechanism of action 1997(2) 10 廖文彬黄惠琴张开山孙前光鲍时翔 海洋放线菌HSL-6抗菌物质的发酵优化与性质研究 [期刊论文] -药物生物技术2005(4)