鱼溶浆、酶解鱼溶浆(粉)对黄颡鱼体色的影响

黄颡鱼隶属鲇形目、鲿科、黄颡鱼属。在中国，黄颡鱼是一种优质名贵的经济鱼类，因为市场价格高，可获得更高的经济效益，在很多地区养殖量逐年增长。人工养殖条件下黄颡鱼的体色易变，会影响商品价值。影响养殖鱼类体色的因素很多，饲料色素不足是主要因素之一，水质、疾病、饲料等也能导致黄颡鱼体色发生变化。养殖鱼类体色变化分为黑色和黄色等鲜艳体色的变化，鱼类黑色体色的形成主要依赖于皮肤、鳞片中成熟的黑色素细胞数量、分布，以及黑色素颗粒的分布状态；黄色体色的形成则依赖于类胡萝卜素、叶黄素等在皮肤、鳞片的含量和分布，鱼类不能自身合成叶黄素，必须从饲料中摄入并沉淀。

目前黄颡鱼配合饲料以蒸汽鱼粉作为主要蛋白质原料，其使用量一般为28%～35%。水产养殖业高速发展，而鱼粉产量不能同步，导致鱼粉资源需求紧张，所以，如何提高海洋捕捞鱼类作为饲料产品的利用效率、在人工配合饲料中降低鱼粉的使用量是一个重要的研究课题。鱼溶浆(SW)是鱼粉生产过程中的鱼类副产物，含大量悬浮于水中的微小颗粒状物质，如溶解于水中的蛋白质、肽、氨基酸等，也含有生物胺、氧化三甲胺及少量的油脂成分、微量元素等，这些生物活性成分对肉食性鱼类的营养价值有不可替代的作用。以植物蛋白质作为饲料主要蛋白质源，添加鱼溶浆补充海洋鱼类蛋白质的活性成分，以节约鱼粉资源、降低人工配合饲料的成本，此过程对黄颡鱼体色的影响是本文研究的主要目的。

一、材料与方法

1.试验原料 试验鱼粉为品牌特级鱼粉，其原料鱼主要为秘鲁鳀。鱼溶浆、酶解鱼溶浆(HSW)、酶解鱼溶浆粉(HSM)由浙江省舟山丰宇生物有限公司提供，原料鱼主要为东海海域捕获的金枪鱼、鳀和部分野杂鱼，金枪鱼排、鳀、野杂鱼的比例约为5∶4∶1。原料鱼按照鱼粉生产工艺流程，经过蒸煮、压榨后得到压榨液，压榨液经油水分离，液体部分进行减压、加热浓缩，至水分55%左右即为SW；水分浓缩至70%左右，加热到105℃进行灭菌处理，于50～55℃酶解3～5小时，再浓缩得到水分含量45%左右的HSW，HSW经过120～140℃喷雾干燥得到HSM。SW、HSW、HSM的主要营养组成见表1。

 

表1 鱼粉、鱼溶浆、酶解鱼溶浆(粉)营养成分(干物质) %

  

类别水分粗蛋白质粗脂肪灰分鱼粉5.22 68.65 9.08 20.71鱼溶浆53.39 65.40 6.15 15.67酶解鱼溶浆43.03 69.94 1.77 17.50酶解鱼溶浆粉1.96 79.72 1.54 13.33

2.试验饲料的制备 SW、HSW、HSM使用量的确定：对照组(FM组)含300克/千克的蒸汽鱼粉。以对照组鱼粉的蛋白质量为基础，以实测的SW、HSW、HSM的蛋白质含量为依据，按照对照组鱼粉蛋白质量的75%、50%、25%计算SW、HSW、HSM(干物质)三种蛋白质在试验饲料配方中的用量，共10个试验饲料配方，见表2。试验配方中，以混合油脂(鱼油∶磷脂油∶豆油＝1∶1∶2)提供不饱和脂肪酸，平衡各试验饲料中脂肪含量，以磷酸二氢钙提供磷源保持各试验配方总磷含量，以米糠粕、大豆浓缩蛋白质、棉籽蛋白质和鸡肉粉保持试验饲料配方比例平衡。玉米蛋白质粉作为黄颡鱼饲料主要色素来源而各在配方中保持一致。

原料粉碎后过60目筛，用混合机混合均匀，用制粒机加工成直径1.5毫米、长3～5毫米的颗粒饲料。颗粒饲料采用风干的方式，风干至含水量10%左右，作为养殖试验用的颗粒饲料。所有的试验饲料均在-20℃密封保存备用。试验饲料营养成分实测值见表2，各组间蛋白质、脂肪、总磷、能量水平无显著差异。

 

表2 试验饲料配方及营养成分实测值(干物质) 克/千克

  

*注：预混料中为每千克饲料提供铜25毫克，铁640毫克，锰130毫克，锌190毫克，碘0.21毫克，硒0.7毫克，钴0.16毫克，镁960毫克，钾0.5毫克，维生素A 8毫克，维生素B18毫克，维生素B28毫克，维生素B612毫克，维生素B120.02毫克，维生素C 300毫克，泛酸钙 25毫克，烟酸 25毫克，维生素D33毫克，维生素K35毫克，叶酸5毫克，肌醇100毫克。

 

原料细米糠米糠粕鸡肉粉棉籽蛋白质大豆浓缩蛋白质玉米蛋白质粉面粉鱼粉鱼溶浆酶解鱼溶浆酶解鱼溶浆粉磷酸二氢钙沸石粉混合油脂预混料*原料合计组别FM 150 130 60 60 60 50 120 300 SW25 150 77 140 140 140 50 120 SW50 150 67 115 115 115 50 120 SW75 150 54 91 91 91 50 120 HSW25 150 78 140 140 140 50 120 HSW50 150 72 115 115 115 50 120 HSW75 150 62 91 91 91 50 120 HSM25 150 96 140 140 140 50 120 HSM50 150 115 111 111 111 50 120 HSM75 150 123 86 86 86 50 120 83 166 249 15 20 25 10 1000 34 20 36 10 1000 37 20 35 10 1000 40 20 34 10 1000 62 33 20 39 10 1000 125 35 20 42 10 1000 187 37 20 45 10 1000主要成分(干物质)93.4 42.73 8.33 11.82 19.53干物质(%)粗蛋白质(%)粗脂肪(%)灰分(%)能量(千焦/克)92.54 42.85 8.27 13.52 19.23 92.43 42.89 8.23 13.03 19.00 92.17 43.05 8.19 12.43 19.11 91.94 43.34 8.25 12.1 19.37 78 34 20 40 10 1000 92.5 43.03 8.36 12.98 18.75 155 36 20 42 10 1000 92.25 43.39 8.34 12.62 18.88 233 38 20 44 10 1000 92.43 43.41 8.31 12.14 19.46 92.96 42.94 8.15 12.33 19.08 93.15 43.05 8.19 12.11 19.26

3.试验鱼与养殖管理 养殖试验在浙江一星养殖基地池塘网箱中进行，在面积为40米×60米的池塘中设置试验网箱(规格为1.5米×1.5米×2.0米)，以海盐县长山河河水为水源。为了保证池塘溶氧均匀，池塘中间设置1台1.5千瓦的叶轮式增氧机，同时设置1台2.2千瓦的微孔增氧鼓风机，每个网箱放置一个直径20毫米纳米曝气管制成的圆形微孔增氧盘(增氧盘直径为0.5米)，安装在水下1.8米的深度，投喂期间关闭增氧设备，投喂前使用微孔增氧1小时，其余时间使用叶轮式增氧机增氧。

试验用黄颡鱼苗(3000尾)购自浙江省湖州农业合作社，运输前停食24小时。0.3%食盐溶液浸泡15分钟消毒后，200尾/箱分配到试验网箱中暂养，以对照组饲料驯养14天。选取规格整齐的黄颡鱼种1350尾，平均质量为(15.67±0.11)克，0.3%食盐溶液浸泡15分钟消毒后，随机分成10组，每组设3个重复(n＝3)，共30个网箱，每个网箱45尾鱼。

皮肤叶黄素的测定参考AOAC 970.64的方法，分别取背部、腹部皮肤2.0克于100毫升棕色容量瓶中皂化：加入30毫升己烷－丙酮－乙 醇 － 甲 苯 (10∶ 7∶ 6∶ 7)、2毫升40%氢氧化钾－甲醇溶液，56℃水浴20分钟，暗处放置1小时后，加入30毫升己烷，以10%硫酸钠溶液定容，混合均匀。吸取5毫升皂化后的样品进行色谱分离(硅胶G∶硅藻土＝1∶1)，以己烷－丙酮(96∶4)洗除样品中的类胡萝卜素，再加入己烷－丙酮－甲醇(80∶10∶10)，持续洗脱，直至收集到全部叶黄素，于474纳米处测定OD值。

试验鱼以试验饲料驯化14天后开始正式投喂。日投喂3次(5∶30－7∶00、12∶00－13∶30、18∶00－20∶00)，日投喂量为鱼体重的3%～5%，三餐投喂比例2∶2∶3，每10天估算1次鱼体增重量，调整投喂量，正式投喂60天。每天6∶00、18∶00测试、记录水温，试验期间水温25.5～34.4℃。每5天测定水下30厘米的水质，养殖期间水体溶解氧浓度＞7.0毫克/升、pH 8.0～8.4、氨氮浓度＜0.10毫克/升、亚硝酸盐浓度＜0.005毫克/升、硫化物浓度＜0.05毫克/升。

在进行支架施工中，要使用大量的带电设备，为了确保施工的安全，设备必须做到重复接地并做好防水处理。电动设备要安装好漏电保护器，防止漏电造成的安全事故。要安排专门的检察人员定期进行设备的维护保养。

西山煤矿位于江南古隆起带北缘太平复向斜中三峰庵-内招溪背斜的南东翼，下古生界本区普处于太平坳陷的沉积和沉降中心。于早寒武系随全球海平面上升并伴随有海流的大循环，促进了大量藻类及其经生物的繁殖，其遗体沉积在海底经厌氧分解，再经复杂的生化作用进一步转化成腐泥沉积，进而形成了腐泥煤(优质或劣质)，与此相伴的还有一些黑色烦质泥岩、粉砂质泥岩。

6.数据处理 原始数据经Excel 2003初步整理后，用SPSS 19.0进行单因子方差分析(One-Way ANOVA)，同时进行Duncan氏多重比较分析试验数据的差异显著性，结果以平均值±标准差(mean±SD)表示，以p＜0.05为差异显著水平。

 

表3 试验饲料油脂氧化指标

  

项目酸价(毫克/克)MDA(毫克/千克)过氧化值(毫摩尔/千克)组别FM 27.40 4.97 1.33 SW25 35.32 5.58 1.18 SW50 47.55 7.86 1.17 SW75 64.42 9.02 1.05 HSW25 24.48 4.83 1.43 HSW50 26.65 6.08 1.53 HSW75 40.09 7.96 1.36 HSM25 28.57 3.83 1.38 HSM50 29.94 4.18 1.42 HSM75 40.72 4.74 1.41

等式中236是在指定的波长处反式叶黄素的光密度值。

皮肤酪酸酶活力的测定参考朱磊的方法，取背皮0.6克加入3毫升磷酸缓冲液(67毫摩尔/升，pH 6.8)，冰冻匀浆，匀浆液于4℃、8000转/分离心25分钟，取上清液作为粗酶液。取2毫升粗酶液，加入0.5毫升L-多巴(3毫克/毫升)，混合后立即于475纳米处测定OD0值，15分钟后再测定OD1值。以OD每15分钟变化0.001作为一个活力单位(U)。

本来，在此前“义必成”镖局护送文华斋裴主事的计划中，李陆峰必死无疑，但是，拿人钱财、替人消灾在多数情况下是有底线的，那就是尽量不杀生害命。义必成镖局就是这么做的，他们顺利地护送裴主事出城，并将文华斋贵重古玩全部运出。镖局最怕摊上人命案，哪怕是面对凶徒，一般也不会动杀机。主要原因有两个：一来镖局需要不停接手生意，没有时间和精力跟人家打人命官司；二来镖局要生存，要盈利，没有闲钱、也不值得为人命案付出高昂代价——就算是格杀凶徒，死者家属不敢深究，镖局也会被官府敲去一大笔烧埋钱。

总叶黄素浓度(毫克/千克)＝A474×1000/(236×d)；

1.饲料分析 本试验中，鱼溶浆经脱脂处理，脂肪含量低，主要以鱼油补充黄颡鱼所需不饱和脂肪酸，试验饲料油脂氧化指标见表3。各组过氧化值无明显差异，SW75组酸价、MDA最高，分别为FM组的2.35、1.81倍。

d-稀释系数＝样品重(克)×分离的皂化液5毫升/(50毫升上相液×最后的稀释液)；

皮肤黑色素的测定参考袁立强等的方法，取背皮0.2克加入2毫升丙酮，猛烈震摇，30℃水浴1小时，3500转/分离心15分钟，弃上清，残渣加入5毫升5%盐酸－甲醇溶液，60℃水浴1小时，离心，取残渣按上述方法重复提取1次。再取残渣加入8毫升2%氢氧化钠，70℃水浴，直至提取液均质，混匀，1000转/分离心5分钟，于290纳米测定OD值。以A290纳米/克湿重表示黑色素含量。

5.样品分析 饲料水分采用LGJ-18B型冷冻干燥机干燥至恒重测定；酸消化后，凯氏定氮法测定蛋白质含量；石油醚索氏抽提法测定粗脂肪含量；550℃焚烧12小时测定粗灰分含量；饲料能量采用XRY-1C型氧弹式热量计测定。饲料过氧化值(POV)、丙二醛用比色法测定，酸价(AV)根据《GB/T 5530-2005 动植物油脂酸值和酸度测定》测定。详见表3。

4.样品采集 每网箱随机取6尾鱼，分别割取背部、腹部皮肤，剪碎、混匀，液氮速冻后-80℃保存待用。

二、结果

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2.黄颡鱼体色 试验结束时，试验组鱼体背部为灰褐色、黑褐色，腹部呈微黄色或浅黄色，侧面色斑较明显。

黄颡鱼皮肤叶黄素、黑色素和酪氨酸酶含量见表4。各试验组背部皮肤酪氨酸酶活力无显著差异(P＞0.05)。FM组背部黑色素含量最低，SW25、SW75、HSW25、HSM25黑色素显著高于FM(p＜0.05)。FM组鱼体背部叶黄素沉积量最高，除SW50和HSW75，其他试验组降低显著(p＜0.05)。与FM相比，除了SW50、SW75和HSW50，其他组腹部叶黄素含量显著降低(p＜0.05)；SW和HSW相比，HSM腹部叶黄素的含量降低，部分处理差异显著(p＜0.05)。

罗四强忙说：“试一下。爸爸一直说要帮阿里过这个坎。爸爸的腿疼去不成东湖，也是个坎，说不定你们两个人搭帮着一起过了。”

 

表4 皮肤酪氨酸酶、色素含量

  

注：不同字母表示差异显著(p＜0.05)。

 

组别背部黑色素(毫克/千克)背部酪氨酸酶(单位/克)背部叶黄素(毫克/千克)腹部叶黄素(毫克/千克)FM 33.47±2.52a 1.93±0.05 60.01±16.52c 18.65±2.77c SW25 49.69±6.37c 2.08±0.14 36.31±7.46ab 14.12±1.00ab SW50 42.71±3.16abc 1.69±0.45 51.08±3.09bc 18.87±2.00c HSM75 40.89±13.71abc 1.51±0.32 45.64±2.87ab 11.18±0.48a SW75 46.67±3.48bc 1.70±0.54 36.07±0.61a 19.99±4.88c HSW25 47.01±2.81bc 1.74±0.54 43.16±0.19ab 11.69±2.16a HSW50 45.22±7.16abc 2.04±0.34 45.76±14.29ab 16.90±0.92bc HSW75 35.87±3.46ab 1.73±0.54 50.77±1.03abc 12.18±0.64a HSM25 46.22±8.00bc 1.73±0.54 38.05±4.12ab 11.12±1.08a HSM50 45.01±4.37abc 1.42±0.57 42.16±3.43ab 12.58±0.17a

三、讨论

黄颡鱼体色已成为影响养殖利润的重要指标。黄颡鱼料配方的目标之一是如何保持黄颡鱼体色的黄色亮度，同时保有正常黑色素体色。黄颡鱼体色受多种因素的影响，本文讨论了以鱼溶浆或酶解鱼溶浆(粉)、植物蛋白质为蛋白质源的饲料对黄颡鱼体色的影响，发现饲料中添加150～225克/千克的鱼溶浆或酶解鱼溶浆，黄颡鱼着色效果与鱼粉相近，对体色影响较小；减少饲料中鱼溶浆等的用量会增加黄颡鱼黑色素的沉积，而酶解鱼溶浆粉的使用会减少黄颡鱼叶黄素的沉积。

黄颡鱼不能自身合成叶黄素，只能通过饲料摄入，以满足黄色素沉积的需要。鱼体黄色素沉积受饲料中色素源的来源、含量影响，饲料中缺乏黄色素，黄颡鱼着色效果差。周邦维以血粉替代玉米蛋白质粉作为豹纹鳃棘鲈的色素源，鱼体叶黄素的沉积减少，表明叶黄素对饲料色素源依赖度较大。本研究以6%的玉米蛋白质粉作为色素源可满足黄颡鱼叶黄素需求，营养素吸收效率降低，导致饲料叶黄素摄入不足可能是鱼体叶黄素沉积减少的原因。黄颡鱼摄食后，吸收的叶黄素沉积在体面、脂肪及部分组织中，当沉积的叶黄素受到饲料中有害物质的破坏，特别是饲料中存在大量氧化油脂时，叶黄素可能会被部分分解。本研究为平衡饲料的不饱和脂肪酸而添加的鱼油可能产生更多的氧化产物，引起叶黄素的分解。

鱼体的黑色素主要是自身合成，与黑色素细胞的数量、分布密切相关。饲料中SW加入75～225克/千克时，黄颡鱼生长降低，采食下降，可能是黑色素沉积的主要原因。本试验中添加鱼溶浆的饲料油脂氧化程度略高于其他试验组，表明试验鱼氧化损伤可能性更大，也可能引起黑色素的增加。

实证检验了内部控制评价对会计稳健性的影响，得出以下结论：在进行内部控制评价工作的过程中，有外部评价主体参与的内部控制评价公司的会计稳健性高于仅有内部评价主体参与的内部控制评价公司的会计稳健性；发现内部控制缺陷并积极配合进行整改的公司的会计稳健性要显著高于发现内部控制缺陷却拒绝配合进行整改的公司的会计稳健性；能够提供真实性较高的内部控制评价报告的公司的会计稳健性要高于提供真实性较低的内部控制评价报告的公司的会计稳健性。