云南龙胆中木脂素苷类成分研究

云南龙胆（Gentiana yunnanensis）为龙胆科龙胆属（Gentiana L.）植物，生于山坡草地、路旁、高山草甸、灌丛中及林下，主产于海拔在2300-4400米的西藏东南部、云南、四川和贵州[1]。作为药用植物，在云南滇西北地区与滇龙胆混用。龙胆属植物全世界约400种，我国有247种、41变种。云南共有125种，包括6个变种，其中绝大部分分布在云南西北部地区[2]。龙胆属植物主要含环烯醚萜和裂环环烯醚萜类、三萜类、黄酮类及口山酮类等成分[3]。环烯醚萜和裂环环烯醚萜类成分具有显著的保肝、利胆、抗炎、解热、抗病毒等活性，三萜类成分具有抗真菌等活性。黄酮类化合物绝大多数为异荭草素和异牡荆素的衍生物, 此类化合物具有治疗心血管疾病的作用[3]；口山酮类化合物主要以苷的形式存在，绝大多数来源于该属植物的地上部分和全草，对中枢神经系统具有药理活性[4]。目前未见文献报道云南龙胆的化学成分研究。为了解云南龙胆的活性成分，本实验对该植物的正丁醇部位进行了系统研究，从中分离鉴定了6个木脂素苷类成分。分别为：imethoxy-3′-hydroxy-′, 9-diepoxylignan-3-O-β-D-glucopyranoside (1)、SyringaresinoD-glucopyranoside (2)、Dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside (3)、(7S,8R)-Balanophonin-4-O-β-D-glucopyranoside (4)、(7S,8R)-Dehydrodiconiferyl alcohol-9′-O-β-D- glucopyranoside (5)、Lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside (6)。化合物结构见图1。

  

图1 化合物1-6的结构式Fig.1 Structures of Compound 1-6

1 仪器与材料

1.1 实验材料

云南龙胆采于云南省大理州苍山花甸坝，经大理大学段宝忠副教授鉴定为龙胆科龙胆属植物云南龙胆（Gentiana yunnanensis Franch）的全株，植物标本（编号：WFS-2016718）存放于大理大学药学与化学学院王福生教授研究组。

1.2 仪器与试剂

Bruker AM-400型核磁共振仪；旋转蒸发仪RE-2000A (上海亚荣生化仪器厂)；300～400目柱色谱硅胶和GF254薄层硅胶(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20 (Pharmacia)；ODS（日本YMC公司）；石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇等试剂为工业级试剂，均需重蒸后使用。

2 提取与分离方法

云南龙胆干燥全株6 kg，粉碎后用95 %乙醇冷浸提取5次，减压浓缩得到浸膏；滤渣用50 %乙醇水冷浸提取5次，浓缩得到浸膏；将浸膏合并分散于水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取513 g正丁醇部位浸膏，经大孔吸附树脂（AB-8）柱层析，用甲醇-水（0%～100%）梯度洗脱，得到5个组分Fr. 1～5。Fr. 4（30.8 g）经ODS柱层析（甲醇-水），梯度洗脱得到6个组分Fr. 4-1～4-6。Fr. 4-1（5.8 g）经硅胶（氯仿-甲醇）和凝胶（甲醇）柱层析得化合物1（28 mg）和化合物2（10 mg）；Fr. 4-2（3.9 g） 经硅胶（氯仿-甲醇）和凝胶（甲醇）柱层析得化合物3（16 mg）和化合物6（11 mg）；Fr. 4-3（2.8 g）经硅胶（氯仿-甲醇）和凝胶（甲醇）柱层析得化合物4（10 mg）和化合物5（13 mg）。

3 实验结果

化合物1：白色无定形粉末。 (400 MHz,CD3OD) 6.99 (1H, d, J=1.7 Hz, H-2), 7.12 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6.88 (1H, dd, J=1.7, 8.3 Hz, H-6),4.64 (1H, d, J=2.5 Hz, H-7), 3.08 (1H, m, H-8), 4.20(2H, m, H-9), 6.92 (1H, d, J=1.7 Hz, H-2′), 6.76 (1H,d, J=8.1 Hz, H-5′), 6.75 (1H, dd, J=1.7, 8.1 Hz, H-6′),4.67 (1H, d, J=3.0 Hz, H-7′), 3.08 (1H, m, H-8′), 3.86(2H, m, H-9′), 3.83 (3H, s, 4-OCH3), 3.83 (3H, s,4′-OCH3), 4.86 (1H, d, J=6.7 Hz, Glc-1), 3.48 (1H, m,Glc-2), 3.46 (1H, m, Glc-3), 3.37 (1H, m, Glc-4), 3.38(1H, m, Glc-5), 3.86 (1H, m, Glc-6a), 3.66 (1H, m,Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 137.37(C-1), 111.53 (C-2), 147.41 (C-3), 150.86 (C-4),117.86 (C-5), 119.75 (C-6), 87.03 (C-7), 55.48 (C-8),72.63 (C-9), 133.70 (C-1′), 110.91 (C-2′), 147.26(C-3′), 149.07 (C-4′), 116.06 (C-5′), 120.02 (C-6′),87.43 (C-7′), 55.30 (C-8′), 72.67 (C-9′), 56.71(4-OCH3), 56.39 (4′-OCH3), 102.73 (Glc-1), 74.85(Glc-2), 77.77 (Glc-3), 71.26 (Glc-4), 78.14 (Glc-5),62.45 (Glc-6)。以上数据与文献[5]报道的波谱数据基本一致，故鉴定化合物1为 4,4′-Dimethoxy- 3′-hydroxy-7,9′:7′,9-diepoxylignan-3-O-β-D-glucopyranoside。

化合物2：白色无定形粉末。 1H-NMR (400 MHz, CD3OD) 6.63 (2H, s, H-2, 6), 4.69 (1H, d,J=4.0 Hz, H-7), 3.10 (1H, m, H-8), 3.88 (1H, m,H-9a), 4.25 (1H, m, H-9b), 6.69 (2H, s, H-2′, 6′), 4.73(1H, d, J=3.8 Hz, H-7′), 3.10 (1H, m, H-8′), 3.88 (1H,m, H-9′a), 4.25 (1H, m, H-9′b), 3.88 (6H, s, 3,5-OCH3), 3.88 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 4.85 (1H, d, J=7.8 Hz, Glc-1), 3.46 (1H, m, Glc-2), 3.18 (1H, m, Glc-3),3.40 (1H, m, Glc-4), 3.40 (1H, m, Glc-5), 3.76 (1H,dd, J=12.0, 2.5 Hz Glc-6a), 3.65 (1H, dd, J=12.0, 5.1 Hz, Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 133.01(C-1), 104.41 (C-2, 6), 149.28 (C-3, 5), 136.11 (C-4),87.52 (C-7), 55.45 (C-8), 72.81 (C-9), 139.49 (C-1′),104.73 (C-2′, 6′), 154.35 (C-3′, 5′), 135.47 (C-4′),87.12 (C-7′), 55.67 (C-8′), 72.87 (C-9′), 56.77 (3,5-OCH3), 57.04 (3′, 5′-OCH3), 105.27 (Glc-1), 75.65(Glc-2), 78.27 (Glc-3), 71.24 (Glc-4), 77.74 (Glc-5),62.50 (Glc-6)。以上数据与文献[6]报道的波谱数据基本一致，故鉴定化合物2为Syringaresinol-4′-O-β-D-glucopyranoside。

化合物5：黄色油状物。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 6.93 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2), 6.75 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5), 6.81 (1H, dd, J=8.1, 2.0 Hz, H-6),5.51 (1H, d, J=6.3 Hz, H-7), 3.48 (1H, m, H-8), 3.81(2H, m, H-9), 6.95 (1H, d, J=1.5 Hz, H-2′), 6.97 (1H,d, J=1.5 Hz, H-6′), 6.60 (1H, d, J=15.9 Hz, H-7′), 6.22(1H, dd, J=15.9, 6.7 Hz, H-8′), 4.48 (1H, m, H-9′a),4.29 (1H, m, H-9′b), 4.35 (1H, d, J=7.8 Hz, Glc-1),3.21 (1H, m, Glc-2), 3.27 (1H, m, Glc-3), 3.29 (1H, m,Glc-4), 3.35 (1H, m, Glc-5), 3.84 (1H, m, Glc-6a),3.66 (1H, m, Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 134.51 (C-1), 110.48 (C-2), 149.10 (C-3), 147.57(C-4), 116.15 (C-5), 119.73 (C-6), 89.35 (C-7), 55.15(C-8), 64.85 (C-9), 132.32 (C-1′), 112.09 (C-2′),145.49 (C-3′), 149.41 (C-4′), 130.31 (C-5′), 116.68(C-6′), 134.24 (C-7′), 124.21 (C-8′), 70.95 (C-9′),56.72 (3-OCH3), 56.35 (3′-OCH3), 103.13 (Glc-1),75.13 (Glc-2), 77.99 (Glc-3), 71.69 (Glc-4), 78.12(Glc-5), 62.81 (Glc-6)。以上数据与文献[9]报道的波谱数据基本一致，故鉴定化合物5为(7S,8R)-Dehydrodiconiferyl alcohol-9′-O-β-D-glucopyranoside。

化合物4 ：黄色油状物。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 7.00 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2), 7.13 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6.90 (1H, dd, J=8.3, 2.0 Hz, H-6),5.63 (1H, d, J=6.1 Hz, H-7), 3.51 (1H, m, H-8), 3.84(2H, m, H-9), 7.21 (1H, d, J=1.5 Hz, H-2′), 7.25 (1H,d, J=1.5 Hz, H-6′), 7.59 (1H, d, J=15.9 Hz, H-7′), 6.66(1H, dd, J=15.9, 7.9 Hz, H-8′), 4.86 (1H, d, J=7.8 Hz,Glc-1), 3.46 (1H, m, Glc-2), 3.45 (1H, m, Glc-3), 3.37(1H, m, Glc-4), 3.37 (1H, m, Glc-5), 3.82 (1H, m,Glc-6a), 3.64 (1H, m, Glc-6b)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD) δ: 137.89 (C-1), 111.15 (C-2), 150.98 (C-3),147.85 (C-4), 117.95 (C-5), 119.41 (C-6), 89.67 (C-7),54.88 (C-8), 64.61 (C-9), 129.77 (C-1′), 114.23 (C-2′),146.05 (C-3′), 152.84 (C-4′), 130.96 (C-5′), 119.97(C-6′), 156.04 (C-7′), 127.18 (C-8′), 196.5 (C-9′),56.79 (3-OCH3), 56.69 (3′-OCH3), 102.63 (Glc-1),74.86 (Glc-2), 77.83 (Glc-3), 71.29 (Glc-4), 78.19(Glc-5), 62.46 (Glc-6)。以上数据与文献[8]报道的波谱数据基本一致，故鉴定化合物4为(7S,8R)-Balanophonin-4-O-β-D-glucopyranoside。

秦铁崖痛饮一杯，继续道：“秦某就不同了。缉拿真凶、抓捕恶徒是我的职责，只要能抓到真凶，自己落败受伤也在所不惜，对手是死是活更无足轻重，只要能不辱使命，就算完胜。再说，我是公门中人，受伤可以休养，名正言顺。年年办案，月月追凶，我也会厌烦，也会烦躁，暗地里也会发牢骚：这苦差，什么时候才是尽头？这营生，什么时候才能歇一歇？幸好，每过一段时期，我就会受点小伤，正好歇一歇，让狂躁厌烦之心安顿一下，才不至发疯。更妙的是，受伤静养，正好有空闲盘点前阶段办案得失，思考对敌手段中的疏漏。”

最后，加强高校教师队伍建设。高校要引导教师不断提升理论水平和思想政治素质，树立坚定的理想信念，坚持正确的政治方向，使他们以正确的思想理论引导大学生的网络言行，并将有关网络意识形态教育内容融入教学活动。高校要组织教师参加网络舆情调研活动，让他们客观理性地看待网络意识形态问题，增强他们面向大学生开展网络意识形态教育的责任意识和底线意识。高校要引导教师学习网络知识，提高他们运用网络进行教育教学的主动性，提醒他们要经常通过网络对话与学生保持情感沟通和思想交流，回应大学生的呼声，引导他们树立崇高的理想信念，将高校网络意识形态安全工作落到实处。

通过对测定指标的统计分析、相关性分析和因子评价，确定了鲜切黄瓜加工适宜性的评价指标为口感、果肉厚度、TSSC、果肉硬度、果皮硬度、果肉色差a*和L*值；通过层次分析确定各主评价指标的权重分别为35.45%、23.66%、15.82%、10.50%、6.92%、4.59%和3.07%；应用灰色关联分析对19个黄瓜样品材料的鲜切加工适宜性进行了排序，结合各样品的田间栽培性状优选出较适宜的鲜切加工样品材料为4#和2#，表明该评价体系能够较合理的指导黄瓜田间育种，筛选适宜的黄瓜鲜切加工品种。

化合物6：白色无定形粉末。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 6.95 (1H, d, J=1.9 Hz, H-2), 7.10 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.84 (1H, dd, J=8.4, 1.9 Hz, H-6),4.79 (1H, d, J=6.4 Hz, H-7), 2.32 (1H, m, H-8), 3.82(1H, m, H-9a), 3.62 (1H, m, H-9b), 6.76 (1H, d, J=1.9 Hz, H-2′), 6.68 (1H, d, J=8.1 Hz, H-5′), 6.60 (1H, dd,J=8.1, 1.9 Hz, H-6′), 2.46 (1H, dd, J=13.4, 11.0 Hz,H-7a′), 2.87 (1H, dd, J=13.4, 4.9 Hz, H-7b′), 2.67 (1H,m, H-8′), 3.97 (2H, dd, J=8.4, 6.5, H-9′), 3.82 (3H, s,4-OCH3), 3.79 (3H, s, 4′-OCH3), 4.85 (1H, d, J=7.9 Hz, Glc-1), 3.46 (1H, m, G-2), 3.44 (1H, m, Glc-3),3.38 (1H, m, Glc-4), 3.37 (1H, m, Glc-5), 3.84 (1H, m,Glc-6a), 3.67 (1H, m, Glc-6b)；13C-NMR (100MHz,CD3OD) δ: 139.44 (C-1), 111.23 (C-2), 150.79 (C-3),147.23 (C-4), 117.83 (C-5), 119.55 (C-6), 83.79 (C-7),54.13 (C-8), 60.45 (C-9), 133.46 (C-1′), 113.32 (C-2′),148.98 (C-3′), 145.79 (C-4′), 116.17 (C-5′), 122.11(C-6′), 33.60 (C-7′), 43.80 (C-8′), 73.64 (C-9′), 102.81(Glc-1), 74.89 (Glc-2), 77.80 (Glc-3), 71.30 (Glc-4),78.17 (Glc-5), 62.47 (Glc-6)。以上数据与文献[10]报道的波谱数据基本一致，故鉴定化合物6为Lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside。

化合物3：黄色油状物。1H-NMR(400 MHz,CD3OD) δ: 6.99 (1H, d, J=1.9 Hz, H-2), 7.11 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.88 (1H, dd, J=8.4, 1.9 Hz, H-6),5.54 (1H, d, J=5.9 Hz, H-7), 3.44 (1H, m, H-8), 3.80(2H, m, H-9), 6.92 (2H, d, J=3.1 Hz, H-2′, 6′), 6.50(1H, d, J=15.9 Hz, H-7′), 6.19 (1H, dd, J=15.9, 5.9 Hz,H-8′), 4.16 (2H, dd, J=5.9, 1.5 Hz, H-9′), 3.84 (3H, s,3-OCH3), 4.85 (1H, d, J=7.8 Hz, Glc-1), 3.45 (1H, m,Glc-2), 3.43 (1H, m, Glc-3), 3.36 (1H, m, Glc-4), 3.36(1H, m, Glc-5), 3.82 (1H, m, Glc-6a), 3.64 (1H, m,Glc-6b)；1C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 137.99(C-1), 111.09 (C-2), 150.89 (C-3), 147.63 (C-4),117.89 (C-5), 119.37 (C-6), 88.77 (C-7), 55.35 (C-8),64.90 (C-9), 130.00 (C-1′), 112.02 (C-2′), 145.51(C-3′), 149.15 (C-4′), 132.69 (C-5′), 116.46 (C-6′),131.94 (C-7′), 127.60 (C-8′), 63.84 (C-9′), 56.71(3-OCH3), 102.64 (Glc-1), 74.85 (Glc-2), 77.79(Glc-3), 71.28 (Glc-4), 78.15 (Glc-5), 62.44 (Glc-6)。以上数据与文献[7]报道的波谱数据基本一致，故鉴定化合物3为Dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside。

4 小结

（1）本实验首次对龙胆属植物云南龙胆的化学成分进行了研究，发现6个木脂素苷类成分，化合物1和2为双四氢呋喃类木脂素苷，化合物3-6为苯并呋喃类木脂素苷，它们均首次从该药用植物中分离得到。

四川竹编以精细见长，色彩清雅，大多为实用工艺品，其中成都的瓷胎竹编、自贡的竹编龚扇、梁平(重庆)的竹丝画帘、渠县的竹编字画都是竹编工艺中一颗颗璀璨的明珠。

（2）目前龙胆属植物中仅在滇龙胆中发现含有木脂素苷类成分[11]。龙胆科假龙胆属植物尖叶假龙胆（Gentianella acuta）中也有木脂素苷类成分[12]。

（3）苯并呋喃类和双四氢呋喃类木脂素及其苷类化合物具有抗肿瘤、肝保护、抗氧化、抗病毒、抗炎以及免疫抑制等生物活性[13-14]。本研究丰富了龙胆属植物的化学成分研究，为该药用植物进一步的药理研究及开发利用奠定了基础。

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