诱导痰嗜酸性粒细胞检测诊断哮喘-慢性阻塞型肺疾病重叠综合征的临床意义

慢性阻塞型肺疾病（COPD）和哮喘均是临床常见气道慢性炎症性疾病。研究资料显示[1]，慢性气道疾病患者中约20%同时具有慢性阻塞性肺疾病和哮喘疾病的双重特征，即哮喘-慢性阻塞型肺疾病重叠综合征（Asthma-COPD overlap syndrome，ACOS）。以往关于哮喘的研究资料显示，其发病与肥大细胞、T淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞等炎症细胞有密切关系[2]。为了探讨诱导痰嗜酸性粒细胞检测在诊断ACOS的临床意义，本研究对我院近年来收治的ACOS、COPD和哮喘患者进行了研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取我院2014年12月至2016年5月收治的ACOS患者100例作为研究组，年龄45～64岁，平均（55.3±2.7）岁，男 61例，女 39例，入选标准：均同时具备哮喘和慢性阻塞性肺疾病的临床症状、病史、体征等特点[3]，胸片和肺通气检查诊断为COPD，且同时符合以下标准：有哮喘史（40岁之前），个人过敏史；存在强支气管舒张剂阳性反应；2次以上支气管舒张阳性反应。排除标准：患者3个月内存在急性加重情况或合并感染症状者[4]。另选取同期我院收治的50例哮喘患者（对照A组）和50例慢性阻塞性肺疾病患者（对照B组），对照A组男29例，女21例，年龄45～65岁，平均（55.1±2.5）岁，对照B组男 30例，女 20岁，年龄 46～65岁，平均（56.0±2.3）岁，三组患者性别、年龄等一般资料比较无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

就实践情况看，前期工作主要包括以下几个方面：一是认真熟悉、分析工程设计图纸，确定工程所需人力、物力等情况，展开准备工作；二是由于工地大多在河流和湖泊等处施工，要预先拟定有效方案，对水流进行引导控制，采取措施保护建筑实体在正式投入使用前不会受到水流的冲刷，并合理规划施工现场道路、水电、通信基础设施建设；三是组织相应的施工队伍和建设管理队伍，并对其进行岗前培训，考核合格后方可上岗；四是提前定制施工机械，并组织人力进行调试和保养；五是提前做好原材料的采购、检查和验收，并做好详细记录，产品合格方可办理验收手续，签订订购合同。

1.2 方法

选定腌制时间为24 h，对牛肉丁进行醋渍嫩化处理，干制方式选择油炸，以感官评价为指标，对牛肉丁的油炸时间1.5，2，2.5 min进行比较研究，分析其对成品感官质量的影响，结果见表6。

三组患者血WBC计数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。三组患者诱导痰嗜酸性粒细胞计数比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组患者诱导痰嗜酸性粒细胞计数明显高于对照B组（P＜0.05），详见表1。

1.3 统计学处理：选用SPSS19.0统计学软件处理分析数据，计量资料用均数±标准差（s）表示，组间进行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

1.2.2 指标比较：对三组患者的诱导痰嗜酸性粒细胞计数和血WBC计数结果进行比较。

阮孚用手掂了掂布袋，笑答：“只装了一文钱，我是怕这布袋因为没有装任何钱财而感到难为情，所以就用这一文钱来安慰安慰它。”

2 结果

1.2.1 检测方法：①诱导痰液的获取：患者先吸入200～400 μg沙丁胺醇[5]，15min后测 FEV1值，如 FEV1＜50%或FEV1＜1 L，则禁止诱导痰操作。当FEV1≥60%时，雾化吸入7 min3%高渗盐水，并重复测FEV1值；当 FEV1＜60%，FEV 1≥50%或 FEV 1≥1 L时，雾化吸入5 min0.9%生理盐水，然后重复测FEV1值，雾化前后均用清水漱口、擤鼻。若FEV1下降≥10%但＜20%时，则继续用前面相同浓度的盐水雾化；若FEV1下降≥20%时，则停止诱导；若FEV1下降＜10%时，则增加盐水浓度雾化。后续操作步骤同前。如果在3%高渗盐水雾化后可获得足量的痰液，则无需继续增加盐水浓度进行雾化；②痰液处理：用镊子挑取出粘稠、密度大痰液部分放入EP管中，称取重量，用来测序的痰标本尽量在0.1 g以上，取上清液痰标本尽量在0.05 g以上。测序痰标本放入EP管后应立即放入-80℃冰箱[6]，取上清液标本加入重量的四倍体积冰冻0.1%二硫苏糖醇，充分混匀痰混合物，将其冰浴15 min，然后加入等体积的D-PBS液稀释，然后再进行过滤48微米的尼龙网。按1∶1比例取10μL过滤液+10 uL台盼蓝混合进行灌板、计数。过滤液在4℃下离心，2000 rpm，离心10 min。用少量D-PBS重新混匀沉渣，使其悬浮浓度在0.5×106 cell/mL。标记玻片以及准备甩片、涂片机甩片。用光镜检查甩片质量。涂片结束后风干、HE染色，光镜下计数400个非上皮细胞进行细胞分类计数（嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞及上皮细胞百分比）。同时抽血进行血白细胞（WBC）计数。

 

表1 三组患者诱导痰嗜酸性粒细胞检测结果 （s）

  

注：与研究组比较，a P＜0.05

 

组别 例数 血WBC（109/L） 诱导痰嗜酸性粒细胞计数（%）研究组 100 6.70±2.20 11.80±3.20对照A组 50 7.02±2.36 15.01±11.71对照B组 50 6.62±1.98 2.05±0.40a F值 - 1.012 14.621 P值 - ＞0.05 ＜0.05

3 讨论

COPD患者的主要临床症状为持续气流受限，肺脏和气道对有毒气体或颗粒的慢性炎性反应不断增强导致这一症状进行性发展[7]。同时，这种炎性反应能导致肺气肿，并破坏肺实质的修复和防御机制。哮喘则是一种慢性非特异性炎症疾病，属过敏性气道炎症，主要以CT4+Th2淋巴细胞、肥大细胞、嗜酸粒细胞为主。因此，哮喘以气道嗜酸粒细胞为主要特征，与气道高反应密切相关。不过，在临床实践中发现，哮喘患者也同时具有COPD的相似特征，而COPD患者也可能表现出哮喘症状，即ACOS。ACOS患者临床症状复杂、肺功能受损较重，严重影响患者生活质量。目前，国内外对于这种重叠现象的研究甚少，对于其病因、发病机理、临床特征、诊断及治疗等尚不十分清楚[8]。

传统观点认为哮喘患者的气道内的炎症是由嗜酸性粒细胞和CD4+细胞介导的，而慢阻肺的炎症特点由嗜中性粒细胞与CD8+导致的。哮喘患者，尤其是未戒烟者，其气道可发生由嗜中性粒细胞产生的近似于慢阻肺的炎症反应，而在慢阻肺患者气道中同样会出现因嗜酸性粒细胞升高所致的炎性效应，即发生炎症形式的转化。Zacharasiewicz等发现稳定期的哮喘-慢性阻塞型肺疾病重叠综合征患者外周血及痰液中嗜酸性粒细胞的数量均明显增高，痰中嗜酸性粒细胞计数更多于单纯的慢阻肺患者。刘凌云等研究发现，ACOS组患者的诱导痰嗜酸粒细胞计数及外周血嗜酸粒细胞计数均明显高于COPD组，且诱导痰嗜酸粒细胞计数在诊断ACOS中的敏感度和特异度均达80%以上。因此可以推断，嗜酸粒细胞检查可以作为诊断ACOS的重要指标之一。本研究诱导痰嗜酸粒细胞检测结果发现，ACOS组诱导痰嗜酸性粒细胞计数明显高于单纯COPD组。而且这三组血WBC无统计学差异，故更加证实了痰嗜酸性粒细胞计数在反映哮喘-慢阻肺重叠综合征急性加重中的优势所在。因此，在临床诊断ACOS时，诱导痰嗜酸粒细胞检测可作为一项重要观察指标。

综上所述，目前尚缺乏ACOS的统一诊断标准，临床诊断中应结合患者的症状表现特点、病史、个性化因素以及气流受限特点等多方面进行，同时，诱导痰嗜酸粒细胞检测可作为诊断ACOS患者的重要指标。

参考文献

［1］ 朱燕亭，宋旸，李少军，等.哮喘与慢性阻塞性肺疾病重叠综合征的研究进展［J］.中华肺部疾病杂志（电子版），2015，8（3）：377-379.

［2］ 杨爽，赵海金，蔡绍曦.哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征［J］.中国呼吸与危重监护杂志，2015，14（2）：214-217.

［3］ 康闪闪，何晟，朱恬华，等.慢性阻塞性肺疾病急性加重期治疗前后诱导痰细胞分类、血ECP变化的临床分析［J］.中国临床医生，2014，21（1）：24-26.

［4］ 虞竞峰，肖华龙，强新晨，等.慢性阻塞性肺疾病血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白检测与临床意义［J］.中华医院感染学杂志，2011，21（3）：2864-2865.

［5］ 周为，柯会星，李毅，等.呼出气一氧化氮在支气管哮喘管理中的价值［J］.中国医刊，2011，46（8）：37-40.

［6］ 聂汉祥，黄毅，丁续红，等.稳定期慢性阻塞性肺疾病患者支气管舒张试验和诱导痰炎性标志物的测定［J］.武汉大学学报（医学版），2010，31（1）：79-82.

［7］ 商旭芳，董丽.慢性支气管炎型慢性阻塞性肺疾病患者稳定期诱导痰炎性细胞的表达情况分析［J］.四川医学，2016，37（2）：181-184.

［8］ Zacharasiewicz A，Erin EM，Bush A.Noninvasive monitoring of airway inflammation and steroid reduction in children with asthma［J］.Curr Opin Allergy Clin Immunol，2006，6（3）：155-160.

［9］ 刘凌云，曾勉，左万里，等.诱导痰嗜酸粒细胞检测在支气管哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠综合征中的应用［J］.国际呼吸杂志，2016，36（2）：91-94.