HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌前病变筛查中的应用价值

宫颈上皮内瘤变是宫颈癌发生发展过程中连续的癌前病变过程。从癌前病变发展至癌症约需要5-10年，因此，有效的早期筛选和诊断并及时给予治疗将极大地改善患者预后，减少宫颈癌发病率和死亡率[1]。临床常使用宫颈组织活检诊断宫颈疾病，但易出现假阳性或漏检，由于高危型人乳头瘤状病毒(HR-HPV)与宫颈癌及癌前病变有密切关系，HPV DNA联合宫颈组织活检能直接反映宫颈细胞感染HPV情况，提高诊断结果的敏感性[2]。但有学者提出HPV DNA检测并不能反映感染HPV病毒后的活性状态。研究显示，HPV E6/E7肿瘤蛋白的大量表达能促进致癌病变过程，造成HR-HPV的持续感染，HPV E6/E7 mRNA表达与病变严重程度密切相关[3]。因此，本研究比较了HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA联合宫颈组织活检在宫颈癌前病变筛查中的应用价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年7月到2018年7月在东莞市南城医院，病理科行宫颈病变筛查的受试者80例为研究对象。纳入标准：(1)患者自愿签署知情同意书；(2)距上一次宫颈癌检查时间>3年或未做过此类检查。排除标准：(1)有子宫切除或盆腔放射治疗史患者；(2)怀孕或哺乳期妇女；(3)伴有其它系统肿瘤病变史。年龄18-55岁，平均(36.25±5.57)岁，其中15例≤30岁，19例30-39岁，26例40-49岁，20例>50岁。病理结果(组织活检)：慢性宫颈炎19例，轻、中、重度宫颈鳞状上皮瘤样病变(CIN1、CIN2、CIN3)各26例、13例、15例，宫颈鳞状细胞癌7例。

1.2 方法

1.2.1 HPV DNA检测 使用采样工具专用刷于患者宫颈管旋转5-10圈，收集宫颈口及宫颈管脱落的上皮细胞，将刷头置入专用保存液瓶中待检，采用HC2法检测HR-HPV DNA，每份样本重复检测3次并取均值，RLU/CO>1.0判断为阳性。

1.2.2 HPV E6/E7 mRNA检测 用专用宫颈刷于宫颈管旋转5-10圈，收集宫颈口脱落的上皮细胞，将其置于专用保存液瓶中待检，使用冷光仪光度计和试剂盒检测已加入标记荧光物质、并经信号放大的底物，信号强度越强表示mRNA越多，每份样本重复检测3次并取均值。mRNA数量以拷贝数为计算单位，平均拷贝数>1.0判断为阳性。

1.3 观察指标

比较不同年龄段患者HPV DNA与HPV E6/E7 mRNA的阳性检出率；比较不同病变程度(CIN1、CIN2、CIN3)患者HPV DNA与HPV E6/E7 mRNA的阳性检出率；以CIN2及以上病变作为癌前病变的相对标准[4]，比较HPV DNA与HPV E6/E7 mRNA癌前病变诊断的特异度、灵敏度及阳性预测值。

1.4 统计学处理

农村商业银行的前身为农村信用合作社，在组建之初，股东主要来源于信用社的员工及主要的大客户，因此股东在分布上相对零散，呈现出股东数量多、股东持股比例少等现状，造成股东管理的难度加大，成本提升。根据我国颁布的农村商业银行员工持股的相关规定可知，员工持股比例不得大于20%，而这种规定也在很大程度上造成了管理水平粗放化、关注度及责任意识淡化等现象，这一点与企业高持股比例所形成的严格高效管理形成很大的反差。

2 结果

2.1 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA对不同年龄段检出情况比较

在30岁以下受检者中HPV E6/E7 mRNA阳性检出率显著低于HPV DNA(P<0.05)，其它年龄段检出率均无显著差异(P>0.05)，随着年龄增加，HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA的阳性检出率均呈增高趋势，见表1。

 

表1 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA对不同细胞病理学分级检出情况对比[n(%)]

  

年龄段HPV DNA阳性检出HPV E6/E7mRNA阳性检出<30(n=15)53.33(8/15)13.3(2/15)∗30-40(n=19)57.89(11/19)47.37(9/19)40-50(n=26)64.54(16/26)57.69(15/26)>50(n=20)65.00(13/20)70.00(14/20)

注：与HPV DNA相比，*P<0.05

2.2 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA不同病变程度检出情况比较

宫颈癌是中国女性常见恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌，近年来宫颈癌及癌前病变发生率不断上升，发病年龄段也越来越广，因此，准确有效的进行宫颈癌前病变检查，对于提高宫颈癌的预防措施和治疗水平是非常必要的。宫颈癌前病变发展为宫颈癌需要5-10年，这也就为宫颈癌病变的早期发现和早期治疗提供了客观条件[5-6]。研究报道HR-HPV的持续感染是将引发宫颈癌的发生发展，但只有少数HR-HPV感染会发展成恶性肿瘤，原因为HPV基因组包括编码基因区中的E6和E7编码的致癌蛋白能导致宫颈上皮癌变，恶性肿瘤的发展需要致癌蛋白在整合的HPV基因组中表达出来[7-8]。E6、E7这两个癌基因通过抑制肿瘤抑制蛋白基因功能、促进不规则细胞生长，激活端粒酶活性等机制，引起E6、E7的过度表达，最终导致细胞周期失控、癌细胞生成[9-10]。相关研究提示，对于HPV感染患者，宫颈组织中HPV E6/E7 mRNA的异常表达往往预示着细胞细胞癌变的可能性增高[11]。

以CIN2及以上病变作为癌前病变的相对标准，HPV E6/E7mRNA检测的特异性、阳性预测值显著高于HPV DNA(P<0.05)，灵敏度高于HPV DNA，但无统计学意义(P>0.05)，见表3。

2.3 特异度、灵敏度及阳性预测值比较

2018年仅剩最后2个交易日，基金年终排名即将水落石出。基于今年A股震荡的市场行情，权益基金市场陷入“比惨”的尴尬境地。从最新收益率情况看，普通股票型基金和QDII基金，排名前两位的基金收益率已经拉开距离，如无意外，金鹰信息产业A将稳坐普通股票型基金冠军席位，融通中国概念也摘得QDII基金第一名。混合型基金前两名基金差距并不大，意味着冠军争夺战还十分激烈，很可能要到最后才会决出最终冠军。

应用SPSS 20.0统计软件分析数据。计数资料以率表示，用χ2检验；计量资料以表示，用t检验；P<0.05为差异有统计学意义。

 

表2 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA对不同病变程度检出情况对比[n(%)]

  

病理学分级HPV DNA阳性检出HPV E6/E7mRNA阳性检出宫颈炎(n=19)15.79(3/19)10.53(2/19)CIN Ⅰ级(n=26)57.69(15/26)34.62(9/26)CIN Ⅱ级(n=13)76.92(10/13)69.23(9/13)▲CIN Ⅲ级(n=15)86.67(13/15)86.67(13/15)宫颈癌(n=7)100.00(7/7)100.00(7/7)

注：与CIN Ⅰ级相比，▲P<0.05；CIN Ⅱ级比较，ΔP<0.05

 

表3 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA对特异度、灵敏度及阳性预测值的检出比较[n(%)]

  

检测指标特异性灵敏度阳性预测值HPV DNA57.78(26/45)82.86(29/35)62.50(29/48)HPV E6/E7mRNA82.22(37/45)∗91.43(32/35)80.00(32/40)∗

注：与HPV DNA相比，*P<0.05

3 讨论

CIN Ⅰ级、CIN 2级、CIN 3级和宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 阳性检出率均高于宫颈炎患者，且CIN Ⅱ级HPV E6/E7mRNA阳性检出率显著高于CIN Ⅰ级(P<0.05)，CIN Ⅱ级与CIN Ⅰ之间HPV DNA阳性检出率无统计学意义(P>0.05)，见表2。

由于不同土地利用方式植物群落组成及土壤环境因子等条件存在差异，因此土壤动物群落组成存在一定的差异性[17，18]。从大型土壤动物类群数的水平分布研究结果来看（图1），各土地利用方式大型土壤动物类群数相差不大，最多的是森林和退耕湿地14类，最少的是退耕林地12类。从大型土壤动物个体数的水平分布研究结果来看，退耕湿地＞湿地＞退耕林地＞森林＞农田，其中个体数最多的是退耕湿地603只，占总个体数的23.50%，个体数最少的是农田151只，仅占个体总数的5.89%。

本研究结果显示，30岁以下患者HPV DNA阳性检出率高达50%，但HPV E6/E7 mRNA阳性检出率较低，说明此年龄段大部分患者感染HPV后可以自行消退，40岁以上患者中，HPV DNA与HPV E6/E7 mRNA的阳性检出率均高于50%，说明年纪较大的患者感染HPV后进展为恶性病变的风险相对较大，使用HPV E6 /E7 mRNA检测40岁以上妇女相对更有意义[12]。本研究结果显示CIN2级患者HPV E6/E7 mRNA阳性检出率有显著高于CIN1级患者，CIN Ⅱ级与CIN Ⅰ之间HPV DNA阳性检出率无统计学意义，说明对诊断低度或中度宫颈鳞状上皮瘤样病变患者，HPV E6/E7 mRNA检测能更加精确地判断病毒感染情况，HPV E6/E7 mRNA对宫颈癌的早期发现和预防有重要的临床意义[13]。同时，本研究发现HPV E6/E7mRNA检测的特异性、阳性预测值显著高于HPV DNA检测，灵敏度略高于HPV DNA检测，提示与HPV DNA相比，HPV E6/E7 mRNA表达对宫颈癌前病变有更高的特异性和阳性预测值，有望成为宫颈疾病筛查更好的指标，对宫颈癌的治疗有积极意义。此外，对于行宫颈癌术后患者，利用HPV E6/E7 mRNA检测阴道残端可有效预估风险，防止复发[14]。

综上所述，与HPV DNA检测相比，HPV E6/E7mRNA检测的特异性及阳性预测值较高，对于宫颈疾病筛查是较好的检测手段，对宫颈癌的预防、治疗具有积极意义，临床应用价值大。

扬中产业特色鲜明，拥有智能电气、新能源、装备制造三大主导产业，其中，智能电气产业的竞争优势和规模优势十分明显，占全国市场份额的20%左右，是远近闻名的“电气岛”“国家火炬计划电力电器产业基地”“中国电气化名城”和“长江制造业走廊”。2017年，三大特色主导产业规模超过1 050亿元，为发展“扬中人”经济奠定了坚实基础，为建设“智慧扬中”提供了重要支撑。

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